疟原虫血片制作及染色PPT课件

1、. 1、疟原虫血片的制作和染色，2、电子邮箱盒： zxt_办公室：疟疾预防哥大：QQ:35566625，3、血一是将血液涂成圆盘状，称为厚血液膜。 厚血膜上的血球在玻璃板上重叠堆积，薄血膜上的血球要求平坦地辅助在玻璃板上。 门诊或现场发热患者的血片、标本片、5，厚血膜用血容量约4l5l，涂抹直径0.8 1cm的厚血膜，由于制造过程中血红细胞溶解，疟原虫在形态上仍可识别，但细胞球浆和细胞核必然形成一定程度的固缩。 受影响较大的是大裂殖体的形态。 厚血液膜与薄血液膜相比，由于血液量大，检查范围小，节约时间，阳性检出率高。 厚血膜能检出的疟原虫的

2、数量是薄血膜的1525倍。 因此，我们建议疟疾诊断(门诊检查和现场调查)以检查厚血膜为主。 厚、薄血膜的优缺点及其适用范围.6、薄血膜用血液量约1-1.5l，宽2.5cm的长面积薄血膜涂抹2cm。 在生产过程中，血片通常用甲醇固定，完全保持血红细胞及其内疟原虫的形态，适合于疟疾原虫种类的鉴定。 因为血液量少，为了保证检查的敏感性需要时间，不适合大规模的调查。 特别是医院的检验科，由于要求短时间的诊断，漏诊发生的可能性很高。厚、薄血膜的优缺点及其适用范围，7、血膜制作(采血时间)、采血时间节点现病症患者一般都可以随时采血，在疟疾检查时无需考虑采血时间节点。 但是，在将某种时期的疟原虫作为标本进行

3、诊断或需要时，必须掌握适当的采血时间节点。8、血膜制作(采血时间)、中间日疟前驱期相当于肝内期疟原虫的发育，由于原虫密度过低，镜检多为阴性。 发冷(寒战)期相当于红内期成熟裂殖体使血红细胞膨胀的期，镜检以裂殖体和环状体居多。 在发热期外周血中以环状体(小滋养体)为主，也能看到裂殖体的发汗期原虫密度过低，镜检查多为阴性。 发作后数小时，在间歇期的外周血中以大滋养体为主，形态容易解释，作为诊断的有利时间节点的发作36-48h，能够检测出裂殖体的发作12次后，出现很多配偶体。 9、血膜制作(采血时间)，恶性疟理想的采血时间为发作后20h以内采血，发作后2小时左右，此时环状体发育至最高峰，初发患者退热

4、后，原虫不常见。 从外周血中检测出恶性疟原虫配子体是在外周血出现环状体710天后。10、血膜制作(手工工具准备)、一次性物品采血针、75%酒精、棉棒(球)、载玻片、云推送片、马克笔或铅笔。11、血膜制作(采血操作)、采血方法采血部位为耳垂、手指、通常为耳垂采血。 首先用75%酒精棉球消毒采血部位(冬天用手扭动耳垂充血再消毒)，酒精干了之后用左手的大拇哥和食指捏在耳垂上，用右手将消毒采血针(每人一针，避免血传病)迅速刺入耳垂下端，使不得其过长或过浅。 用右手中指轻轻地向上推出血。 12、13、厚的血液膜用云推送片的一角，从采血部位刮取约4-5微升的血液量(相当于匹配头的大小)，使血液滴与平坦的载

5、玻片接触，再从内侧向外侧旋转，旋转24周，再次返回圆的中心，涂抹直径水平放置血膜制作(涂膜操作)，14，15，血膜制作(涂膜操作)，薄血膜制作两张漂亮的载玻片，一张左手大拇哥，用食指夹住载玻片两端(手指绝对不接触载玻片表面)，用另一张边缘光滑(优选的血滴为平。 沿第一方向略微向后拉，使血液充满云推送玻璃的适当宽度(约2cm )后，沿第二方向以恒定的均匀速度滑动(约2.5cm )。19、20、血液涂膜的素质测评：血液膜的均匀性、薄，没有空泡，没有损伤薄的血液膜的头体尾的位置和形状好，没有停顿的起伏，两侧留有空间，注意：血滴大的方法是将幻灯片6等分，第1、2段粘贴标签条和编号标本血片每片玻璃片厚度

6、，薄薄的血膜门诊和发热患者的血片每片1人，2个厚厚的血膜1个薄薄的血膜，血膜脱落不影响检查的疟疾调查中，1片玻璃板可以涂23人的血膜。标本片、发热患者的血片、标签条、标签条、22、厚、薄的血膜的位置，每一张载玻片可以制作一个薄的血膜和一个厚的血膜，如图所示，、2血膜编号血膜制作后， 立即用特殊蜡笔或水笔在玻璃面上写上受检者的号码，防止错误，薄血膜干燥后用铅笔在薄血膜上写上血膜种类的号码和受检者的个人身份号，依次插入标本箱。26、血膜制作的注意事项、1 .玻璃板清洗时，避免玻璃板的碰撞、磨损。 制作血膜的载玻片要完全清洁，没有油污和污垢。 制作电影时，手指只有幻灯片的边缘，不能接触玻璃板的表面，

7、以免油污使薄血膜上有空白部分和厚血膜脱落。 为了使挤出的血膜均匀一致，挤出片玻璃板的边缘必须光滑。27、血膜制作注意事项、2 .将刚涂好的血膜放在样品盒内，在厚血膜不干燥之前不要倾斜样品盒，以免血膜向一侧倾斜，血膜厚度不均匀，在厚表兄弟难以溶血和着色影响检查结果的血膜干燥时冷却后立即放入标本箱，盖好。 新的木制标本箱放置在有会儿上，使酒精和醛等物质挥发后再使用。 由于血膜红蛋白固定，不能溶血，染色效果差。28、血液膜制作注意事项、3 .使血液膜自然干燥，用晒黑或火烤要不得。 干后用甲醇固定薄血液膜，使厚血液膜溶血。 夏季标本尽量在2448小时内固定、溶血、染色的冬季也超过72小时进行要不得。

8、放置时间越长，厚的血膜越难溶血，染色效果也越差。 如果不能及时染色，最好先用甲醇固定薄血膜，再用蒸馏水(或过滤清水)将厚血膜溶血，晒干固定后，放入箱中盖好，待染色后再进行染色。29、血膜染色一、染色液的种类和染色原理、染色液的种类：镜检疟原虫的染色种类名称很多，但都是从所罗门诺夫牛鼻子先生做的多色性染色液中变化出来的。 染色液可以分为水溶液和酒精溶液两种。 水溶液类有罗氏(Romanowsky )染液、场染液等醇溶液有吉氏染液、瑞氏染液等。30、血膜染色(1)染液的种类，酒精溶液类：有吉氏(Giemsa )染液、瑞氏(Wright )染液等。是在水溶液染液的基础上改良发展而成的。 目前我们推荐

9、的是酒精溶液类中的吉姆萨(Giemsa )染色液、31、血膜染色(二)染色的原理，染色原理是染料吸附与被染物阴阳络离子结合的化学反应。 各种细胞球和疟原虫主要由不同的蛋白质或类氨基酸组成。 不同的氨基酸含有氨基化学基(NH2 )和羧基化学基(COOH )。 在游离态中，由氨基化学基(NH2 )得到的氢络离子成为带正电的络离子(NH3 )，失去羧基化学基的氢络离子成为带负电的络离子(COO )。32、血膜染色(二)染色原理，主要染料均包括美蓝、伊红和美蓝氧化后的天蓝。 美蓝的有色化学基带有阳络离子，是使用盐酸美蓝的碱性染料。 溶解于水，分解为带有阴电的氯元素络离子和能着色的美丽的青阳络离子。 伊

10、红的有色化学基带有阴络离子，是酸性染料，染色时使用伊红纳金属钍盐。 溶于水后分解为带正电的纳金属钍络离子和带负电的伊红络离子。 天青是美青氧化而成的。 是碱性染料，但在染色中起着染料介质的作用。33、血膜染色(二)染色的原理是，伊红主要分解为酸性阳络离子，遇血色素、嗜伊红白细胞颗粒等盐化学基蛋白则与不溶于水的沉淀物结合为红色。 美兰主要解离为碱性美兰络离子，遇到疟原虫、淋巴与大单核细胞细胞球浆、嗜碱性白细胞颗粒等酸性蛋白时均染上蓝色。34、血膜染色(二)染色的原理是，美兰和伊红都不能使原虫和白细胞核着色，应以天蓝为媒介(染媒)着色。 天青也是盐化学基性染发剂，又有媒染剂作用，为原虫核、白细胞核

11、等原本仅染上浅蓝色结构的酸性染发剂伊红，使白细胞粗大核染上显着的蓝、红紫蓝色，而小或薄原虫核和淋巴细胞胞浆中的粒子染上紫红色。35、血膜染色(二)染色原理、染色化学反应模式图：疟原虫细胞球浆的阴络离子(COO )美青阳络离子为蓝色天青(染媒作用)疟原虫核的阳络离子(NH3 )为紫红色伊红阴络离子，36、 因此，其阴阳电荷的数量随周围液体的酸盐基度(PH )而变化，在偏酸溶液中阳络离子增加，易伊红结合，着色变红。 在金属碱的溶液中阴络离子增加，美丽的蓝色容易结合，着色偏向蓝色。 这说明了为什么调制染液的酸盐基度直接影响血片染色的质量，偏酸着色太红，而偏碱着色太蓝。 因此，染血片时稀释液应控制在P

12、H7.2以下，最佳，疟原虫结构清晰可见。 37、吉氏染色血片外观、偏酸、甲碱、标准、38，1、吉氏染液的制备：这是目前最常用的疟原虫染剂，具有方便、染色效果稳定的优点，也是我们推荐的染色方法。 将5g吉氏粉放入乳钵，加入少量的甘油研磨至一盏茶，然后一边加入250ml甘油一边研磨，装入500ml的有栓玻璃瓶中。 在乳钵中加入少量的甲醇，将剩馀的部分洗掉，装入瓶中，再次加入甲醇，清洗后装入瓶中，直到250ml甲醇洗掉乳钵的甘油。 拧紧瓶塞，摇至一盏茶，置于室温，每日用力摇溶液5分钟，3天后即可使用。 在带塞子的硬质玻璃瓶中装入约50个玻璃珠(直径3 5mm )，用玻璃漏斗将甘油装入瓶子，将吉氏粉装

13、入漏斗，用甲醇缓慢将所有染料粉装入瓶子，拧紧塞子，装入室温，每天用力摇动5分钟，3天后也可使用。血膜染色(3)染色方法、39、吉氏染色方法：先用甲醇固定薄血膜，干燥后染色。 将薄血膜固定后，也可以用清水将血色素溶解在厚血膜中再染色。批量血片染色：将固定的薄血膜血片插入染色筒中，加入2%吉氏染液稀释液(在原液2毫升中加入中性蒸馏水98毫升均匀稀释)，在云同步中染色薄血膜30分钟后，用清水以向上溢出方式冲洗染液，用清水浸渍1-2次40、单片血片染色：将薄血膜固定干燥后，中性蒸馏水(或白哈矿元素水)1ml、加吉氏母液12滴混合，均匀混合后，滴入血片标本中，染色1020分钟，然后用清水轻轻洗净单片上的

14、染液，镜检干燥。41、2、瑞式染色液的制备：将1g瑞氏染剂粉放入研钵内，加入15ml甘油研磨至一盏茶后，放入玻璃瓶内，用500ml甲醇洗出研钵中的甘油溶液，放入瓶中，摇晃后，放置于室温下，每日摇晃5分钟，这种方法染色、42、瑞氏染液的染色方法：首先用蜡笔在厚、薄的血膜之间划分边界，滴入数滴蒸馏水使厚的血膜溶血。 溶血后倾去除水滴。 在薄血膜中加入瑞氏染液67滴，均匀染色摇动玻璃片30秒。 然后，再将1012滴蒸馏水加入薄的血膜中，摇动玻璃板将染液和蒸馏水均匀混合后，用吸引管将染液导入厚的血膜中，再将厚的血膜染色5分钟。 用清水轻轻冲洗染液，晾干镜子检查。43、(4)影响染色效果的因素，血片染色

15、的好坏除了与玻璃板是否清洁、血片制作质量的好坏等有关外，还受以下因素的影响：1.染料溶剂的质量：染料、甲醇和甘油如果不纯，常使配制的染料偏酸或偏碱对染色效果因此，必须分析纯甲醇和中性甘油，并且配制时使用的器具必须干净无水分。44、(4)影响染色效果的因素2 .染色液的新旧：新配制的染色液由于色素不溶于一盏茶，染色力弱且沉渣多。 染液的保管时间越长染色力越强。 通常在染液调制12周后使用，但是装有染液的瓶子请密封。 防止吸湿影响染液的质量。45、(4)影响染色效果的因素3 .染色液的稀释浓度：染色液的浓度高时着色快而深，染色时间相对短，疟原虫寄生现象血红细胞的薛氏点粗而显着，但颜色大多为蓝色，染

16、色液浓度过低时染色时间相对长，颜色变红，雪氏的46、(4)影响染色效果的因素4 .染液稀释后的使用时间：染液的主要成分为美蓝、伊红和由美蓝氧化产生的天蓝，三者可溶于醇溶液中，但在水溶液中伊红遇到美蓝和天蓝时会发生沉淀。 因此，在稀释染液时必须使用，通常在30分钟以内染色力最强。 (4)影响染色效果的因素，5 .染色时间：染色时间长染色效果高，反而差。 室温高着色快，染色时间稍短，气温低适度变长。 因此染色时间必须根据染液的质量、新旧、稀释浓度和气温适当增减。 48、(4)影响染色效果的因素，6 .染色用水：染色液的稀释用水和染色后清洗用水可以用Ph7.07.2的干净水、通常使用的新鲜蒸馏水(或过滤后的冷水、自来水、井泉水、河水、泉水和雨水，选择偏酸或甲基碱时可以用缓冲液调节。 染色后发现血膜颜色偏向蓝(甲碱)或红(甲酸)时，可以用与此相反的酸、碱度缓冲液清洗血