药物分析-第四章-前处理

1、.,1,第四章 药物定量分析与分析方法验证 定量分析样品前处理方法, 定量分析方法特点 药品质量标准分析方法验证,.,2,一、定量分析样品前处理方法,Pretreatment of sample used in quantitative analysis 概 述,定量分析样品前处理方法,.,3,泛影酸,碘番酸,磺溴酞钠,三氯叔丁醇,碘苯酯,.,4,含金属有机药物,酒石酸锑钾,富马酸亚铁,卡巴胂 金属有机药物,.,5,定量分析样品前处理方法,不经有机破坏的分析方法 直接测定法 经水解后测定法 直接回流后测定法 硫酸水解后测定法 经氧化还原后测定法 碱性还原后测定法 酸性还原后测定法 利用药物中可

2、游离的金属离子的氧化 性测定含量,.,6,经有机破坏的分析方法,湿法破坏 HNO3-HClO4 HNO3-H2SO4 H2SO4-MSO4 干法破坏 氧瓶燃烧法,.,7,空心,A.燃烧瓶 B.铂丝网 C.D.盛固体样品滤纸及其折叠法 E.F.G.称取液体样品方法,A,G,F,E,D,C,B,氧瓶燃烧装置及称样方法,.,8,氧瓶燃烧法,样品 吸收液 测定方法 含氟有机药物 H2O pH4.3 HAc-NaAc Buffer 茜素氟蓝 分光光度法 含氯有机药物 NaOH溶液 银量法 汞量法 分光法 含溴有机药物 H2O2-NaOH液 或NaOH液- 银量法 分光法 硫酸肼饱和液 含碘有机药物 Na

3、OH液- 银量法 碘量法 硫酸肼饱和液 汞量法 分光法,.,9,碘苯酯含量测定,取本品约20mg，精密称定，照氧瓶燃烧法进行有机破坏，用NaOH T.S. 2ml与H2O 10ml为吸收液，待吸收完全后，加溴醋酸溶液10 ml，密塞，振摇放置数分钟，加甲酸约1ml，用水洗涤瓶口，并通入空气流约35min，以除去剩余的溴蒸气，加KI 2g，密塞，摇匀，用Na2S2O3液 (0.02mol/L)滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml的硫代钠液(0.02mol/L)相当于1.388mg的C19H29IO2,C19H29IO2分子量为 416.34,

4、.,10,二、药品质量标准分析方法验证,指导原则 药品质量标准分析方法验证 药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原则 药物稳定性试验指导原则 缓释、控释制剂指导原则 微囊、微球与脂质体制剂指导原则 细菌内毒素检查法应用指导原则,.,11,第三节 药品质量标准分析方法验证,目的： 证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求 效能指标： 评价分析方法的尺度 效能指标包括: 精密度, 准确度, 检测限,定量限,选择性, 线性与范围, 耐用性,.,12,(1) 准确度（accuracy） ： 测量值与真实值接近的程度 表示: 回收率 测定方法：回收试验 加样回收试验,.,13,(2)精密度（pre

5、cision ）：,定义:同一样品多次测量值之间相互接近的程度 表示：标准偏差(s), 相对标准偏差(RSD) 重复性: 同一实验室,同一人多次测定的精密度 中间精密度: 同一实验室，不同人，不同仪器测定的精密度 重现性: 不同实验室，不同人测定的精密度,.,14,(3)专属性（specificity）,指有其他成分（杂质、降解物、辅料等）可能存在情况下采用的方法能准确测定出被测物的特性)。,.,15,(4) 检测限（limit of detection， LOD） ： 药物能被检出的最低浓度(g/ml) 测定: 信噪比法(S:N=3:1) (5) 定量限（1imit of quantitat

6、ion，LOQ）： 药物能被定量测出的最低浓度(g/ml) 测定: 信噪比法(S:N=10:1),.,16,(6) 线性与范围（linearity and range）： 待测物浓度与响应值成线性关系的浓度范围 线性关系：Y=a+bx （r=0.9999) 线性程度：相关系数 (7) 耐用性（robustness）: 测定条件稍有变动时，对测定结果的影响程度 影响因素：被测溶液的稳定性，流动相的组成和pH，商品柱的品牌，柱温等,.,17,检验项目和验证内容,已有重现性验证，不需验证中间精密度 如一种方法不够专属，可用其他分析方法予以补充 视具体情况予以验证,.,18,第四节、生物样品分析的基本

7、步骤,1.药物从蛋白结合或缀合物中释出 蛋白变性：如应用三氯醋酸、HClO4、有机溶剂(乙醇、丙酮、乙腈)使蛋白沉淀 盐酸水解 酶消化法：最常使用蛋白水解酶中枯草菌溶素(一种细菌性蛋白分解酶，可在pH 7.011.0使肽键降解),.,19,.,20,样品 固相净化 及 反相高效液相色谱法测定血浆中茶碱,血浆样品0.5ml+0.8ml内标液(0.01mg/ml咖啡因)+2ml甲醇 上清液加于2g Al2O3柱，用甲醇洗脱 收集洗脱液 用空气流挥干 残渣以50.0l流动相溶解 上清液10l进样,伍朝筼等 药学学报,1989,24(10):769773,.,21,血浆样品 净化后空白血浆 净化前空白血浆,Colum