微生物学 实验1普通光学显微镜的使用及细菌形态的观察

1、实验一普通光学显微镜的使用及细菌形态的观察，主要有：文晴生命学学院，2020/7/15，实验课的要求，制图要求：实验报告用蓝色或黑色的钢笔、圆珠笔或签字笔作成，用铅笔作成(包括视野、观察结果、倍率等)。 值班要求：四人一组，包括退货、黑板、地面、柜台等，值班结束后经老师同意可以离开。 一、实验目的了解显微镜的结构和各部分的作用，掌握显微镜的使用方法学习油镜的原理和使用方法，掌握并观察细菌的三种基本形态，目镜、镜筒、转换器、物镜、通光孔、聚光器、压板回形针、反射镜、镜座、粗准焦螺旋、细焦点，以及普通光学显微镜的基本实验原理：显微镜的工作原理，物镜上的标识牌，显微镜的总倍率=物镜倍率x目镜倍率，油

2、镜的倍率可达100，倍率这一大透镜，焦距长度短，直径小，但所需照度最大。从低倍镜向高倍镜移动时，通过增加照明强度、增大虹膜光圈，来增大高倍镜及油镜下视野的亮度。 从标本的玻璃板透过来的光线，根据介质密度(从玻璃板进入空气，进入镜头)，一部分光线由于折射和全内反射不能进入镜头，使用油镜入射的光线很少，物体像不清楚。 为了不损害通过的光，使用油镜时，在油镜和玻璃板之间必须加入接近玻璃折光率的镜油(通常使用沥青胶，其折光率为n=1.52 )。 增加视野的入光量，使物像更鲜明。 显微镜的极限分辨率和极限分辨率(resolution or resolving power )是指显微镜能够判别两点间的最小

3、距离的能力。 从物理上看，光学显微镜的极限分辨率受光的干涉现象和所使用的物镜镜头性能的限制可以表示为，式中，D=显微镜极限分辨率2点间的最短距离=光波波长(平均0.55m) NA=物镜的数值孔径。 显微镜的性能、数值孔径取决于物镜的镜角和玻璃板与透镜之间介质的折光率，NA=n sin(/2) n:可表示为物镜与被检体之间介质的折光率：镜嘴角。 以香柏油为介质的油镜能够达到的数值孔径(NA通常为1.21.4 )高于低倍镜、高倍镜等物镜(NA均小于1.0 )。 数值孔径通常为0.65左右的高倍镜只能识别距离为0.4m以上的物体，但油镜的极限分辨率可达到0.2m左右。三、实验器材1、标本片：四联球菌

4、、枯草芽孢杆菌2、试剂：沥青胶、混合二甲苯3、仪器及其他用具：显微镜、擦镜纸等，四、实验步骤1、显微镜观察步骤1 )低倍镜观察(10 ) :打开电源， 打开显微镜的电源开关3 .将低倍镜移动到镜筒正下方的旋转变换器4 .一边调节光源的强度，一边对准目镜，仔细观察，视野亮度均匀5 .将标本放置在载物台上，旋转促动器，使观察的目标物位于圆孔的正中间7 .用左眼观察目镜，调节粗的、细的准焦点螺旋，直到目标物清晰为止。(注意：用眼睛注视物镜，以免物镜与载玻片碰撞。) 、用高倍镜的操作转换物镜。 旋转变换器将低倍镜变换成高倍镜(注意：变换物镜时，为了避免透镜和标本片碰撞，从侧面观察，如果高倍镜接触标本片

5、，请立即停止旋转，用低倍镜重新对焦)对焦。 调节光圈，使光的亮度变得适当，然后调节细的标准焦点螺旋直到目标物清晰为止进行观察。移动促动器，找到合适的目标物，移动到视野中心进行观察。 (高倍镜看不到目标物的话，可以更换油镜进行观察)，切换油镜的操作1 .油镜。 调节粗对准螺旋，载物台下降约2 cm，切换油镜镜头2 .加香沥青胶。 从样品片的镜检部滴下沥青胶的侧面看，用粗的准焦点螺旋慢慢抬起载物台，将油透镜浸泡在油中，正好接近载玻片3 .对焦。 使聚光器上升，使虹膜光圈大幅打开，缓慢调节细微的准焦点螺旋，直至一盏茶上照明的物体像清晰为止。 4 .观察。 多观察一些视野，选择菌体分布均匀的视野进行菌体形态和序列方式的观察。 2、将显微镜用完毕后的处理光强度调节到最弱，拔掉电源开关，降低电源插头，降低载物台，漂亮地擦拭镜头上的沥青胶，沾一点混合二甲苯，擦拭镜头上的剩馀油迹，擦拭剩馀的混合二甲苯，使显微镜的各部分恢复原状，使物镜“八” 擦拭镜体、五、实验数据及处理结果，绘出油镜下观察的两种细菌的形态及不同的细菌细胞球的排列方式。 四联球菌(10100 )杆菌120(10100 )，六、思考和讨论用油镜观察时应注意的问题是什么？在载玻片和镜片之间注入什么油？ 起什么作用？