复方五仁醇胶囊保肝作用的血清药理学研究

1、复方五仁醇胶囊肝补养作用的血清药理学研究摘要目的：建立复方五仁醇胶囊血清药理学研究方法。方法：建立CCl4刘涛原代培养大鼠肝细胞损伤模型。大鼠是含药血清的捐赠者，药血清受损的肝细胞增殖(MTT法)和丙氨酸氨基转移酶(ALT法)结果：每天将相当于成人剂量的甲醇提取物间隔8h分成两次，给正常大鼠服用安慰剂，连续3天，最后给药后用2h采血准备含药血清是合理的，系统中10%结论：在适当条件下制备的复方五因醇胶囊含有药血清，对肝细胞损伤有明显的保护作用，血清药理学研究方法可用于该制剂的药效评价。关键词复方五仁醇胶囊；肝保护作用含药血清；血清药理学中药“血清药理学”是动物口服后不久采血分离血清的实验方法，

2、是指利用此药血清进行体外药理实验的实验方法。这种方法被推崇为中药研究的新想法和新方法。复方五仁醇胶囊是我院开发的以五味子为军药的慢性肝炎治疗的科学研究剂，我们对该制剂进行了“血清药理学”研究的方法学探讨。1材料和方法1.1材料1.1.1动物SD松鼠、SPF级、体重23019.8g不受岩手限制，由南通大学实验动物中心提供。1.1.2试剂和试验药羟乙基哌啶罗晋b磺酸(香港帕科公司)；乙二醇双(2-氨基醚)四乙酸(美国AMRESCO公司盆景)；胶原酶IV(美国西格玛分离)；胰蛋白酶(美国西格玛公司盆景)；DMEM徽章(美国gibbo公司)；新西兰新生儿小牛血清(美国HyClone公司)；四氯化碳(宜

3、兴市第二化学试剂厂)；溴化3-(4，5-二甲基噻唑)-2，5-二苯四唑蓝(MTT，AMRESCO公司)；五味子乙素(中药固体制剂制造技术国家工程研究中心)复方五仁醇胶囊。1.1.3设备HERAcellCO2培养箱(德国GmbH公司)BIO-TEK340酶标(美国西格玛公司)日立7170全自动生化分析器(日本日立公司)；Agilent 1100系列高效液相色谱(美国agilent corporation)。1.2方法1.2.1胃管营养品治疗大鼠提取复方五因醇胶囊的内容物，加入0.5%CMC-Na制成悬浮液。另取复方五因醇胶囊内容物，逆流提取甲醇，添加0.5%CMC-Na制成悬浮液。1.2.2肝细

4、胞的分离培养根据文献1方法分离大鼠肝细胞，在96孔和48孔培养板上接种1105/cm2，培养CO2培养箱(5% CO2)37。1.2.3制备含药血清的研究药型及剂量考察将20只SD大鼠随机分为5组(制剂原型组、提取物少量、重量、大剂量组、空白组)，每组4只，禁食12h。制剂原组每天按成人临床等效剂量的10倍，用少量提取物、重量、大剂量组等方法分别连续3天给胃5、10、20的提取物悬浮液，最后给药后在1h颈动脉采血，4 过夜，分离血清，空照每天0.5% cc培养24小时间细胞，吸清液，随机分为6组(正常对照组、模型对照组、制剂原型组、少量提取物、重量、大剂量组)，每组设置6个腹腔。除正常对照组外

5、，每孔含CCl4的DMEM及其药血清(模型对照组为空白血清)，CCl4和血清的最终浓度分别为10mmol/L和10%，正常组相应添加DMEM培养液和空白血清。作用24小时后，在48个孔板收集了上清液检查ALT。96在孔板中加入每孔5mg/ml的MTT液20l，继续孵化4h，每孔加入DMSO200l，振动后，用酶标记仪测定波长570nm处的吸收值A。1.2.4制备含药血清的研究其他条件下的正交试验分别作为考察动物是否建模、约间隔时间、取穴时间、取穴成分的因素，进行2级(见表1)、L8(27)正交表分配实验。将32只SD大鼠随机分为8组，每组4只，其中肝损害模型大鼠约24小时前腹腔注射了CCl41

6、.0ml/kg。各组按成人临床等效剂量的10倍，注射两次上述提取物显液，从最后颈动脉采血，血浆组血液立即分离离心血浆，血清组血液在4过夜，分离血清。培养24h的肝细胞，吸清液，随机分成8组，分别按照1.2.3处理上述制成的药物血清(血浆)，测定ALT和吸光值A。根据文献方法2，准备对照品和药血清(血浆)，提供试品溶液，注入液相色谱法测定五味子乙素含量。1.2.5系统中添加含药血清的研究培养24小时间细胞，抛弃清液，随机分为6组(正常对照组、模型对照组、5%、10%、20%、40%药血清组)，每组设置6个腹腔。模型对照组和每个药血清组用添加CCl410mmol/L的DMEM培养液替换，正常对照组相应添加DMEM培养液，正常