酵母菌大小的测定和细胞计数.ppt

1、实验学习二酵母菌大小的测定和细胞球修订数一、实验目的1、微尺度和血细胞修订数板的使用方法。 2 .确立对微生物大小的概念。 二、实验材料1、显微镜、物镜微尺、目镜微尺、血细胞校正数板、载玻片等。 2 .麦芽汁培养基、酵母菌。 3、吸管、吸水纸等。 三、实验原理(一)酵母菌大小的测定原理所有微生物的大小必须用刻有一定刻度的微尺进行测定，首先用绝对长度的物镜微尺校正不表示绝对长度的目镜微尺，修正以后者的各尺为代表的实际长度(2)酵母细胞球校正原理微生物常用的校正方法有直接校正法和间接校正法两种。 前者使用血球订正数板在显微镜下直接订正，可以马上得到数值，但死活细胞球都订正。 后者很在意在木板上形成

2、菌落之后再数，反应很现实，但是太费时间了。 本实验采用血细胞修正数板直接进行修正数。 在修正数之前适当地稀释样品，按照规定的方法和修正公式进行运算，可以得到实际的数值。 四、操作方法(一)酵母菌大小测定的操作方法1 .微尺度结构和使用方法(一)目镜微尺度结构目镜微尺度为圆形玻璃板，其中央刻有精密刻度，通常将5mm分成50块，实际1块等于100m 刻度的大小根据使用的目镜和目镜的倍率而变化，但如图所示，必须在之前用物镜测量微尺度进行校准。 (2)物镜微光栅的结构物镜微光栅是一种特殊的载玻片，其中央有一个小圆。 圆内刻有分度，将长1mm的直线等分为100个单元，每个单元等于10m。 2 .目镜微标

3、度校准(1)拆下目镜，转动目镜上的目标透镜，将目镜微标度放置在目镜的中间隔板上，并且将目标透镜转动至镜筒内。 (2)将物镜微尺放置在显微镜的载物台上，使有刻度的面朝上，与观察标本一样，使有刻度的小圆位于视野的中央。 (3)首先用低倍镜观察，在对准焦距长度，观察物镜的微尺度的刻度后，转动目镜，使目镜的微尺度的刻度与物镜的微尺度的刻度平行，重叠两尺左的最初的线，在右侧重叠2尺的另一个重图4记录两条重叠线间的目镜微标度的格子数和物镜微标度的格子数。 3 .校正计算方式(1)目镜微标度每1单元的长度=2个重叠刻度间的物镜微标度数10个重叠刻度间的目镜微标度数(2)以相同的方法，分别在不同倍率的物镜下在

4、微标度上的1单元目镜微尺度()格=物镜微尺度()目镜微尺度每格=() (3)这样测定的目镜微尺度的尺度仅适用于测定中使用的显微镜的目镜与物镜的倍率。 更换物镜、目镜的倍率时，需要进行校准。 4 .酵母菌大小的测定(1)拆下物镜测定微尺度，更换酵母菌的水浸制片。 (2)测定菌体的长度和宽度分别占目镜测定微尺度的数量级，换算为菌体的实际长度。 (3)在同一标本上测定510个菌体，求出其平均值。 (2)酵母细胞球数的测定操作方法1 .血球校正板的构造血球校正板由比通常的载玻片厚的特制玻璃板制作而成。 镶板上有四条凹槽，构成了三个平台。 正中间的平台很宽，其间被短横沟隔开一半，每一半上面都刻有方形网格

5、。 方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格是订正数室，供微生物订正数。 这个大方格的长度和宽度分别是1m，深度，其体积是0.1mm3。 订数室通常有两种规格。 一个在大方格内分为16个中格，各个中格分为25个小格，另一个在大方格内分为25个中格，各个中格分为16个小格。但是，无论修正数室是怎样的构造，这些个都有共同的特征。 也就是说，每个大方格由1625=2516=400个小方格构成。 请参照附图。 2 .血细胞校正板的使用(1)用血细胞校正板校正酵母菌混悬剂的酵母菌个数。 (2)样品稀释的目的是使酵母菌混悬剂的校正数变得容易，每个细胞优选含有45个酵母细胞球，通常稀释10倍即可。

6、(3)用擦镜纸擦拭血球数量板，在中央的数量室中推一推专用的厚玻璃片。 (4)用吸管吸取经稀释的酵母菌混悬剂，将其置于玻璃罩边缘，使菌液缓慢渗透，再用吸水纸吸取多馀的菌液，等待有会儿，使酵母菌全部沉降血细胞校正数室内。 (5)对于校正数，在使用16单元25单元规格的校正数室的情况下，以对折角线位取左上、右上、左下、右下的4个中单元(即100单元)的酵母菌数。 如果规格是25格16格的修正数板，除其4个对角方位外，还需要计算中央的1个中格(即80个小格)的酵母菌数。 (6)遇到大格子线上的酵母菌时，一般只计算大格子上和右线上的酵母细胞球(或只计算下和左线上的酵母细胞球)。 (7)每个样品计数3次，取其平均值，用下式校正每1ml菌液中所含酵母菌的个数。 3 .校正公式(1)16单元25单元的血球校正公式：酵母细胞球数ml=100单元内酵母细胞球数100400104稀释倍数(2)25单元x16单元的血球校正公式：酵母细胞球数ml=80单元内酵母细胞球数80400104稀释倍数在各单元内是否残留有菌体或其他沉淀物如果不干净，必须反复清洗，直到漂亮地。 五、思考问题和实验作业1 .交换不同倍率的目镜和物镜时，为什么要用物镜测量微尺度？2 .利用血球校正板时，注入的菌液过多是要不得的原因？3 .酵母细胞球的大小的测量结果。 (1)目镜的倍率为低倍镜倍数高倍镜倍数。 (2)低倍镜下、目镜测量