细菌培养与药敏试验解读

1、细菌培养及药敏试验释义，主要内容，1。细菌培养标本采集和运输中的注意事项。抗菌药物敏感性试验中的药物选择原则。解释几个问题，细菌培养，标本选择和收集要求，1。避免寄生细菌的污染，并确保每个标本代表感染过程。正常菌群也可出现在健康宿主的许多感染部位，主要来自皮肤和呼吸道。如果它生长得太早和过度，它将掩盖真正的病原菌并干扰对培养结果的解释。细菌培养，2。选择正确的解剖位置、适当的时间和适当的技术。3.活组织检查或注射器抽取是收集厌氧菌培养标本的首选方法，但绝不能冷冻，而应储存在室温下。4.收集足够的样本，样本的缺乏可能会产生假阴性结果。1、细菌培养、标本运送要求1、常规细菌学检查，应及时送至细菌室

2、，延误运送影响致病菌的检测。2.被怀疑对低温敏感的淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌和流感嗜血杆菌感染的样本应立即处理。如脑脊液、生殖道、眼睛和内耳标本，绝不应冷藏。细菌培养和血液培养的临床指征具有下列一种或多种临床表现的患者可作为血液培养的重要指征：发热(38)或低温(36)寒战；白细胞增多(10.0109/升，尤其是当有“核左移”时)；粒细胞减少症(1.0109/l)；血小板减少症；皮肤、粘膜出血，常见于溶血性链球菌感染菌血症；肝脾肿大；关节痛；c反应蛋白、内毒素和降钙素原升高。患有菌血症的老年患者可能没有发烧或体温过低，如身体不适、肌痛或中风，这可能是感染性心内膜炎的重要指征。血培养的数量：美国临

3、床实验室标准化协会(CLSI)建议，对于疑似菌血症的成年患者，不允许采集23套血培养标本，且结果难以解释。婴幼儿：血液培养标本(不同部位)在25天内采集两次，无需重复采集，因为受感染的细菌在治疗后25天内不会立即消失。结果表明，血培养阳性检出率为65%，血培养阳性检出率分别为80%和95%。血液取样量：成人患者建议5-10毫升/瓶。建议婴幼儿每瓶不得少于2毫升(采血量不得超过总血容量的1%)。重新检查血培养，不同部位败血症的发病率，实验室类型：美国私立大型医院微生物实验室医院床位数： 800床位微生物标本数量： 600标本/天血培养标本数量：150瓶/天血培养标准样品：3套瓶/24小时阳性结果

4、：10-30株需氧或兼性厌氧菌/天两株厌氧菌/月BaT/ALert 3D 240 7， 实验室类型：美国大型独立实验室标本来源： 14中型医院和一些小型诊所微生物标本量： 8000标本/天血液培养标本量：1400瓶/天阳性结果：75-100阳性结果/天BacT/ALERT 3D 240 30 (5栏，每栏6个)，1370瓶/2011年7月26日，美国亚特兰大埃默里大学第一附属医院，1100 香港大学玛丽医院约翰霍彭斯医院每天接收血液培养样本。在中国大多数三甲综合医院，相同规模医院的血液培养数为3050瓶/天，在台湾大学附属医院约为300瓶/天，在香港玛丽医院约为300，400瓶/天，在中国某三

5、甲医院有3200张床位(40，000个样本/年)送检的微生物样本，血液培养仪器的血液培养瓶和血液培养瓶应置于室温下，不得冷藏在冰箱中、VITEK 2细菌鉴定仪、生物安全柜、二氧化碳培养箱、恒温培养箱、细菌培养和血液培养的皮肤消毒程序从血液培养中抽取血液时，应严格执行以下三个步骤：(1)75%乙醇擦拭静脉30秒以上；(2)1%2%碘酊30S或10%碘酒60S，从穿刺点画一个圈进行消毒，直至消毒区域直径大于3厘米；(3)用75%乙醇脱碘。对碘过敏的患者应使用75%乙醇消毒60秒，并在乙醇蒸发和干燥后采集血液。血培养瓶瓶口应用75%酒精消毒剂处理。细菌培养，脑脊液1份，脑脊液收集，置于无菌试管中，培

6、养标本不得冷藏，每次试验要求最低量：细菌培养1毫升，真菌2毫升，抗酸棒2毫升。2.脑脊液采集：第一管用于细菌培养，第二管用于生化或免疫学检查，第三管用于常规检查。细菌培养，尿液1。最好在早上保持中段尿液清洁，早上起床后用肥皂水清洗会阴。女性应该用手分开大阴唇。男人应该翻转包皮，仔细清洗，然后用水冲洗尿道周围；开始排尿，将前面的尿液和中间的尿液(1020毫升)直接排入专用无菌管，并立即送去检查。细菌培养，2。用留置导管收集尿样，用75%酒精消毒导管口，用注射器取510毫升尿液，用无菌容器送至实验室。留置导管会将细菌带入膀胱，因此不应尽可能多地使用。收集尿样后，通常在2小时内将尿样送到细菌室，4份

7、冷冻尿样不超过24小时。下呼吸道标本的来源有很多：痰、支气管肺泡灌洗液、肺穿刺液等。特别是痰液标本，在采集痰液标本前，检查口腔和咽喉是否有感染病灶(如口腔念珠菌病)，以免污染标本。让患者先用洗必泰漱口，然后用生理盐水反复漱口，然后吸深痰。细菌培养，粪便标本1。常规培养：直接将粪便标本放在干净、干燥和广口的容器中进行检查。2.直肠拭子：将无菌拭子插入肛门2-4厘米，轻轻旋转肛门括约肌。粪便可以在拭子上清楚地看到，并立即送到细菌室，病人不能自己收集；除了婴儿患者，不建议使用拭子进行常规病原体培养。细菌培养、眼、耳、鼻、喉标本耳、鼻、喉细菌感染的病原体一般来自口腔。口腔中既有需氧菌，也有厌氧菌，因此

8、周围组织器官的感染不仅应视为需氧菌，还应检查是否有厌氧菌；采集耳、鼻、咽拭子时，易被正常菌群污染，因此采集标本时应注意。细菌培养、结膜标本：预先湿拭子，在结膜上滚动收集标本。样本在15分钟内被送到细菌室。角膜标本：用刮铲刮去溃疡或伤口边缘的碎屑，直接接种于培养基平板上进行培养和涂片。口腔和咽部标本：首先用拭子擦去溃疡或伤口的表面分泌物，然后用第二个拭子收集溃疡的边缘或底部，并在常规培养后1小时内送至细菌室。细菌培养，外耳炎患者：需要深层耳拭子，因为表层拭子可能遗漏链球菌引起的蜂窝组织炎。鼻标本：用无菌拭子，放入一个鼻孔约2.5厘米，接触鼻粘膜，轻轻旋转拭子，将分泌物沾在粘膜上，慢慢取出，直接送

9、检。细菌培养、脓液和伤口分泌物标本开放脓肿：用无菌生理盐水或75%酒精擦去表面渗出物，用棉签深入溃疡底部或边缘，收集两个棉签*，分别进行培养和革兰氏染色。闭锁性脓肿：用注射器抽取脓液，将其穿刺入无菌橡皮塞检查。无菌体液是指羊水、后穹窿穿刺液、透析液、心包液、腹膜穿刺液和滑液，血液、骨髓和(非化脓性无菌体液和脑脊液，最好用血培养瓶进行富集培养)，细菌培养、阴道、宫颈压痕、子宫内膜、生殖道外伤、前庭腺、羊水膜和前列腺分泌物等生殖系统标本应由医师收集并收集在无菌试管中进行检查。检查淋病奈瑟菌时，男性和女性都应在尿道和子宫颈插入棉签，进行3厘米深的取样，以避免阴道分泌物污染棉签。目前，我院细菌室常规培

10、养为需氧培养，可分为普通细菌培养、临床常见真菌培养和支原体培养。*由于上述原因，培训结果应根据临床情况进行解释。*、抗菌药物敏感性试验，我国微生物实验室常规检测的药物一般采用美国临床实验室标准化协会(CLSI)制定的药物敏感性试验指南。药物选择考虑了临床疗效、耐药性、药物价格、美国食品和药物管理局(FDA)的意见、目前大多数人的意见以及特定期刊的文献描述。对青霉素敏感的葡萄球菌对其他青霉素、头孢菌素和经美国食品和药物管理局批准用于葡萄球菌感染的碳青霉烯类药物敏感。青霉素耐药、苯唑西林敏感菌株对青霉素耐药的-内酰胺酶有耐药性，但对青霉素耐药的-内酰胺酶、青霉素耐药的-内酰胺酶抑制剂、相关头孢菌素

11、和碳青霉烯类敏感。对苯唑西林耐药的葡萄球菌对当今所有的-内酰胺类抗生素都有耐药性。因此，对于金黄色葡萄球菌，只有青霉素和苯唑西林对-内酰胺类药物的耐药性敏感。抗菌药物敏感性试验，抗菌药物敏感性试验方法：1。KB纸片琼脂扩散法测定含药纸片周围抑菌圈的直径；2.琼脂稀释法和肉汤稀释法测定药物的最低抑菌浓度。抗菌药物敏感性试验，MIC值代表某一菌株对某一药物的实际敏感性，其作用是我们可以通过MIC值计算出成功治疗的剂量。对于某一部位的感染，如果分离出的细菌的最低抑菌浓度值较低，我们可以通过使用较低的剂量来达到治疗效果，而如果最低抑菌浓度值过高，就意味着我们需要使用更多的剂量来达到治疗效果。在抗菌药物

12、敏感性试验中，最低抑菌浓度对于制定给药频率也非常重要。如果最低抑菌浓度较低，则意味着在相同剂量的条件下，有效浓度保持的时间越长，给药频率可以适当降低。然而，如果MIC较高，为了维持血药浓度在有效浓度以上，必须缩短给药间隔，增加给药频率，或增加每次给药剂量以增加血药浓度。在临床应用中，MIC比值大于50的日剂量用于严重真菌感染，MIC比值为25的日剂量用于一般真菌感染。体外药敏试验的局限性。1.CLSI药物敏感标准制定的局限性。所有CLSI药物敏感性标准均基于血液药物浓度。目前，CLSI还没有判断局部感染药物敏感性的标准。在面对局部感染时，根据CLSI指南建立的标准来判断敏感性，体外药物敏感性结

13、果可能与体内疗效不一致。体外药敏试验的局限性；2.体外药敏试验不能反映体内病原菌和药物的动态变化。不同的患者有不同的病原体，不同数量的病原体，不同的药物与血浆蛋白的结合率等。这些因素会影响药物在体内的抗菌活性。体外药敏试验的局限性。未发现感染细菌的真实标本，如痰液、咽喉标本、尿液等。并且当培养细菌时，很难判断细菌是致病菌、定居细菌还是污染细菌，并且很难在不污染携带细菌的情况下收集这些标本。可以想象，使用该药物不可能获得一致的结果抗菌药物敏感性试验和多药耐药菌监测：1。卫生部文件；* 2、多重耐药菌管理系统；*，抗微生物药敏试验，临床上重要的多药耐药菌株的实例1。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRS

14、A):耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(现在广泛使用苯唑西林)。对青霉素类抗生素有耐药性，包括青霉素类和头孢菌素类，以及含-内酰胺酶抑制剂的复方药物，如阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林/舒巴坦等。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，VRSA，抗菌药敏试验，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的治疗：由于医院获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分离率较高，几乎都是多重耐药的，对于疑似严重耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染的患者，首先根据经验选择抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌药物，然后根据药敏结果调整到相应的敏感药物。预防和治疗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染的专家共识。*，抗菌药物敏感性试验，2。超广谱内酰胺酶(ESBLs)的产生：在各种内酰胺类

15、抗微生物剂的持续选择性压力下，细菌被诱导产生活性的和不断变化的内酰胺酶，这扩大了它们耐受第三代和第四代头孢菌素和单环内酰胺类抗微生物剂如氨曲南的能力。这些新的内酰胺酶被称为超广谱-内酰胺酶。超广谱-内酰胺酶多重耐药性，抗菌药物敏感性试验，超广谱-内酰胺酶治疗：预防和治疗产超广谱-内酰胺酶细菌感染的专家共识*，抗菌药物敏感性试验，3。耐万古霉素肠球菌(VRE)肠球菌在糖肽类抗菌药物(万古霉素)治疗过程中，自身代谢和结构发生改变，使细菌对糖肽类药物(万古霉素)产生耐药性。在药敏试验中，VRE可分为VanA、VanB、VanC、VanD、VanE和VanG，它们具有不同的表型和基因型，不同的表型决定

16、了对万古霉素和替考拉宁的不同耐药性。VanA基因，其特征是对万古霉素和替考拉宁具有高抗性；VanB基因以万古霉素为特征，表现出不同程度的耐药性，对替考拉宁敏感。VRE抗性基因可以转移到其他阳性细菌，如金黄色葡萄球菌。关于耐万古霉素肠球菌感染的预防和治疗的专家共识：*，几个问题的解释，1。涂片显微镜检查结果与培养结果不一致。涂片显微镜检查是为了报告所有可见的细菌，而培养的目的是为了检测致病菌。有些细菌需要在特殊的环境或培养基中生长。几个问题的解释，2。很明显，脓液样本被取走了。为什么鉴定报告无菌生长？我们做普通的需氧培养，脓液可能被厌氧菌或L型细菌感染。细菌有可能被大量中性粒细胞吞噬。几个问题的

17、解释？3.为什么今天的训练结果和前天不同？材料是否标准化。例如，在痰样本的口咽部有许多定居的细菌。选择优势菌进行鉴定和药敏试验可能导致两次间的差异。几个问题的解释，4。所有使用的药物都可以进行药物敏感性测试吗？不可能：并非所有使用的药物都可以进行药物敏感性测试(药物需要在体外保持稳定，并且需要有操作标准和解释标准)。这是不必要的：其他抗菌药物的敏感性可以通过耐药机制和标志性药物来预测，而不需要做自然耐药。几个问题的解释？5.所有的阳性细菌都需要用抗菌药物治疗吗？一些小伤口可以通过包扎来改变。培养阳性感染可能是污染(血培养)，或定植菌(痰培养，尿培养)。实验室的任何结果必须结合临床情况进行评估(非常重要)。几个问题的解释？6.在药敏试验报告中，最低抑菌浓度值越小，抗菌效果越好。不同抗菌药物的最低抑菌浓度是不可比的。同一药物的最低抑菌浓度越小，效果越好。几个问题的解释？7.在药物敏感性报告中选择敏感药物，为什么临床治疗无效？体外药敏试验只能预测体内疗效，但并不相同；一般来说，耐药性治疗是无效的；敏感治疗I可能不是真正的致病菌(被污染的或定植的细菌)，细菌本身的因素(如诱导耐药性、生物膜)