第3章药物的杂质检查.ppt

1、第三章 药物的杂质检查,右江民族医学院 药物化学与药物分析教研室,Q:中国药典中规定检查项下包括哪几方面的要求？ 有效性 如Al(OH)3的制酸力 均一性 如片剂的“含量均匀度”试验 安全性 如注射剂中热源、无菌检查 纯度要求 对杂质限量的检查,一、药物的纯度,反映药物质量的优劣，杂质是影响药物纯度的主要因素。,药物的纯度须考虑杂质的稳定性、生理作用及毒副作用。,第一节 药物的杂质及其来源,药品只有两个等级：合格或不合格（与化学试剂不同）。,杂质 1. 有毒副作用的物质（如砷盐） 2. 本身无毒副作用，但影响药物的稳定性和疗效的物质（如铁盐、硒化物） 3. 本身无毒副作用，也不影响药物的稳定性

2、和疗效，但影响药物的科学管理的物质 (信号杂质 硫酸盐、氯化物）,二 、杂质的来源（2 方面）,1. 生产过程中引入,（1）原料、反应中间体及副产物,（2）试剂、溶剂、催化剂类,（3）生产中所用金属器皿、装置以及其他不耐酸、碱的金属工具所带来的杂质,制备过程中产生,酸度：水解试剂带入 乙醇中不溶物：水解中间体(糊精) SO32-：产品用H2SO3漂白 可溶性淀粉：水解不完全,2. 贮藏过程中产生,水解、氧化、分解、异构化、晶形转变、聚合、潮解和发霉等,易发生水解反应的结构：,酯、内酯、酰胺、卤代烃、苷类等 如：阿托品、阿司匹林,易发生氧化反应的结构：,胺、醛、酚羟基、巯基、亚硝基、双键等 如：

3、对乙酰氨基酚、磺胺、维生素A,3、杂质的分类 （来源）,1. 一般杂质：如氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、酸、碱、水分、易炭化物、炽灼残渣等。（一般杂质检查方法收载在中国药典 中。）,附录VIII,2. 特殊杂质：指个别药物在生产或贮藏过程中引入的杂质。 如：阿司匹林中的游离水杨酸、异烟肼中的游离肼。（特殊杂质检查方法收载在中国药典 中）,正文各药品的质量标准,第二节 药物的杂质检查法,一、杂质限量,杂质量 杂质限量 杂质量,药品合格,药品不合格,药物中所含杂质的最大允许量 百分之几（%） 百万分之几 10-6,二、药物的杂质检查法,1. 对照法 （重点） 供试品与一定量待测杂质的对照品经

4、过相同处理后，比较反应结果（比色或比浊） 特点：不需知道杂质的准确含量,对照液浊度 供试液浊度,杂质限量的计算 （重点）,或,注意：计量单位要换算统一！,例 1 ： 对乙酰氨基酚中氯化物的检查： 样 2.0g 溶于100ml水中，取25ml检查Cl-，与标准NaCl溶液(10g/ml) 5ml对照液相比，不得更深。 C= 10g/ml V=5.0ml S= 25 2.0 100=0.5g,例2 检查某药物中的砷盐，取标准砷溶液2.0ml（每1ml相当于1g的As）制备标准砷斑，砷盐限量为0.00004，应取供试品多少克？,已知V、C、 L,求S,S = 5.0g,例3 磷酸可待因中检查吗啡：取

5、本品0.1g，加盐酸溶液（91000）溶解成5ml，加亚硝酸钠试液2ml,放置5分钟后加氨水3ml,所显颜色与吗啡标准溶液无水吗啡2.0mg,加盐酸（91000）溶解成100ml5.0ml,对照法比色，问其限量为多少？,例4 对乙酰氨基酚中硫酸盐的检查：取本品2.0g，加水100ml溶解，过滤，取滤液25ml,依法检查，与标准硫酸钾溶液1.0ml 每1ml相当于100gSO4,对照法比色，问其限量为多少？,2. 灵敏度法,指在供试品溶液中加入试剂，在一定反应条件下，不得有正反应出现。 特点：不需对照品,如：纯化水中氯化物的检查 50ml纯化水加入硝酸5滴，硝酸银试液1ml,要求不得发生浑浊。（

6、含氯离子0.2mg),3. 比较法：,测定杂质的吸收度、旋光度、 pH值等，不超过规定限量。 特点：准确测定杂质的量，不需对照品,注意事项： 平行操作原则 （供试品与对照品同步操作） 正确取样及称量范围 正确的比色、比浊方法,第三节 一般杂质检查,一、氯化物检查法（掌握）,（一）原理 对照法,（二）检查方法,同置于黑色背景上，自上向下观察。,问题：如何进行比浊观察？,例1. 检查氯化物杂质时，一般取用标准氯化钠溶液（10gCl/ml）58ml的原因是 A. 使检查反应完全 B. 药物中含氯化物的量均在此范围 C. 加速反应 D. 所产生的浊度梯度明显 E. 避免干扰,（D）,例2. 采用硝酸银

7、试液检查氯化物时，加入硝酸使溶液酸化的目的是 A加速生成氯化银浑浊反应 B消除某些弱酸盐的干扰 C消除碳酸盐干扰 D消除磷酸盐干扰 E避免氧化银沉淀生成,（ABCDE）,例3. 当采用比浊法检查氯化物杂质时，若药物本身有颜色而干扰检查的话，应该选用的处理方法为 A内消色法 B外消色法 C比色法 D差示比浊法 E差示可见分光法,（AB）,又叫倍量法。即 供试液加入AgNO3，过滤沉淀，加标准NaCl液，作为对照品，均有颜色,(加入试剂褪色，均无色）,例4. 若要进行高锰酸钾中氯化物的检查，最佳方法是 A. 加入一定量氯仿提取后测定 B. 氧瓶燃烧 C. 倍量法 D. 加入一定量乙醇 E. 以上都

8、不对,（D）,例5. 下列哪些条件为药物中氯化物检查的必要条件 A. 所用比色管需配套 B. 稀硝酸酸性下(10ml/50ml) C. 避光放置5分钟 D. 用硝酸银标准溶液做对照 E. 在白色背景下观察,（ABC）,二、硫酸盐检查法（对照法） （掌握）,（一）原理,（二）测定条件,1. 标准K2SO4溶液,2. 反应需在盐酸酸性条件下进行,3. 试剂：氯化钡,4. 比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察。,若供试品有色，也可用内消色法处理。,（三）干扰及排除,例：药物中硫酸盐检查时，所用的标准对照液是 A. 标准氯化钡 B. 标准醋酸铅溶液 C. 标准硝酸银溶液 D. 标准硫酸钾溶液 E.

9、 以上都不对,（D）,三、铁盐检查法,1. 原理（对照法）,（一）硫氰酸盐法（ ChP、USP）（掌握）,过硫酸铵,（2）试剂：硫氰酸铵。加过量硫氰酸铵，使反应向正反应方向进行,（1）反应需在盐酸酸性条件下进行,3. 测定条件,2. 检查方法,（2) 加过硫酸铵可氧化Fe2+为Fe3+；同时可防止硫氰酸铁受光照还原或分解褪色；消除氯化物干扰。,（4）比色方法：,同置于白色背景，从侧面或自上向下观察。,例1. 中国药典（2010年版）规定铁盐的检查方法为 A. 硫氰酸盐法 B. 巯基醋酸法 C. 普鲁士蓝法 D 邻二氮菲法 E. 水杨酸显色法,（A）,例2. 硫氰酸铵法检查铁盐时，加入过硫酸铵的

10、目的是 A. 使药物中铁盐都转变为Fe3+ B. 防止光线使硫氰酸铁还原或分解褪色 C. 使产生的红色产物颜色更深 D防止干扰 E便于观察、比较,（AB）,例3. 中国药典收载的铁盐检查，主要是检查 A. Fe B. Fe2+ C. Fe3+ D. Fe2+和Fe3+ E. 以上都不对,（D）,（二）巯基醋酸法 BP (了解） 原理：对照法,本法灵敏度较高，但试剂较贵,四、重金属检查法 铅为代表,中国药典（2010年版）共收载三法：,第一法 硫代乙酰胺法 （掌握）,第三法 硫化钠法 （熟悉）,第二法 炽灼残渣法,（一）第一法 硫代乙酰胺法 (重点）,1. 原理 对照法,适用于溶于水、稀酸和乙醇

11、的药物。,2. 测定条件,（1）硝酸铅配制标准铅贮备液（加硝酸防止Pb2+水解）,（2）本法用2ml pH3.5的醋酸盐缓冲液控制溶液pH值为33.5。,（3）显色剂：硫代乙酰胺做显色剂,（4）供试品如有色，需经处理后方可检查。,A. 外消色法：在对照管中加稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液。,B. 内消色法,（5）若供试品中有微量Fe3+存在，会氧化硫化氢生成单质硫，干扰比色。（处理方法： 加入抗坏血酸或盐酸羟胺还原Fe3+为Fe2+，可消除干扰）,3.判断方法,甲,乙,标准铅溶液,供试品溶液,当丙管中显出的颜色不浅于甲管时，乙管中显出的颜色与甲管比较, 不得更深 。,丙甲,若丙管中显出的颜色

12、浅于甲管，则取样按第二法重新检查。,总体积： 25+2=27ml,（二）第二法 炽灼残渣法 （自学）,适用于含芳环、杂环以及不溶于水、稀酸、碱及乙醇的有机药物。,三酸处理， 500600炽灼后的残渣，经处理后，依一法检查。,原理 ： 对照法,（三）第三法 硫化钠法 (重点）,适用于溶于碱而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的药物。如磺胺类、巴比妥类。,1. 原理 对照法,例1 重金属检查中，加入硫代乙酰胺时溶液控制最佳的pH值是 A. 1.5 B. 3.5 C7.5 D. 9.5 E. 11.5,（B）,例1. 中国药典（2010年版）重金属检查法中，所使用的显色剂是 A. 硫化氢试液 B. 硫代乙

13、酰胺试液 C. 硫化钠试液 D. 氰化钾试液 E. 硫氰酸铵试液,（BC）,例2. 葡萄糖中进行重金属检查时，适宜的条件是 A. 用硫代乙酰胺为标准对照液 B. 用10ml稀硝酸/50ml酸化 C. 在pH3.5醋酸盐缓冲溶液中 D. 用硫化钠为试液 E. 结果需在黑色背景下观察,（C）,例3. 现有一药物为苯巴比妥，欲进行重金属检查，应采用哪种方法 A. 一法 B. 二法 C. 三法 D. 四法 E. 以上都不对,（C）,六、砷盐检查法,（一）古蔡法 （重点）,遇HgBr2试纸生成黄色棕色的砷斑，与2ml标准砷溶液在相同条件下生成的砷斑比较,1. 原理 （对照法）,2. 检查方法：,A为10

14、0ml标准磨口锥形瓶,B为中空的标准磨口塞,C为导气管,D为具孔的有机玻璃旋塞,E为中央具有圆孔的有机玻璃旋塞盖,古蔡法装置,装入醋酸铅棉花,顶端平面上放一片溴化汞试纸,盖上旋塞E并旋紧,样品溶液、盐酸、SnCl2、KI,（二）Ag-DDC法 （二乙基二硫代氨基甲酸银）（自学）,原理 ：对照法,目视比色或者在一定波长下测吸收度,例1. 在用古蔡法检查砷盐时，导气管中塞入醋酸铅棉花的目的是 A. 除去I2 B. 除去AsH3 C. 除去H2S D. 除去HBr E. 除去SbH3,（C）,例2. 古蔡法检查砷盐的基本原理是 A. 与锌、酸作用生成H2S气体 B. 与锌、酸作用生成AsH3气体 C

15、. 产生的气体遇氯化汞试纸产生砷斑 D. 比较供试品砷斑与标准品砷斑的面积大小 E. 比较供试品砷斑与标准品砷斑的颜色强度,（BE）,例4. 葡萄糖中砷盐的检查，需要的试剂应有 APb2+标准 BSnCl2试液 CKI试液 DZn E醋酸铅棉花,（BCDE）,例5. Ag-DDC法检查砷盐时，碘化钾和酸性氯化亚锡的作用为 A将As5+还原为As3+ B有利于AsH3生成反应 C抑制SbH3的生成 D形成Zn-Sn齐以均匀连续地发生氢气 E催化加速生成AsH3,（ABCDE）,七、干燥失重测定法 （熟悉）,干燥失重是指药物在规定条件下经干燥后所减失的重量，主要是水分，也包括其它挥发性物质。,六.

16、 硒、氟及硫化物检查法 （自学）,（一）常压恒温干燥法,适用于受热较稳定的药物。干燥温度一般为105,粉末: 平铺、厚度小于5cm(疏松物质小于10cm ),颗粒结晶 : 研细,结晶水合物: 高温能除去结晶水 如: 枸橼酸钠 180 .,干燥方法 (三种) ：,（二）干燥剂干燥法 （常压或减压）,适用于受热易分解或挥发的供试品。,干燥剂：变色硅胶、浓硫酸、P2O5 。,比如: 对氨基水杨酸钠,结晶水合物不除去结晶水,（三）恒温减压干燥法 （真空干燥箱）,适用于熔点低，受热不稳定或水分难赶除的药物。 优点: 降低干燥温度, 缩短干燥时间 .,除另有规定外，压力应在2.67kPa（20mmHg）以

17、下。,八. 水分测定法 （自学）,费休法和费休试液,检查不含金属的有机药物或挥发性无机药物中混入的无机杂质(金属氧化物或无机盐类)。 1. 原理 样品炭化后+ H2SO4湿润700800炽灼至恒重炽灼残渣（硫酸灰分）,九、炽灼残渣检查法 （自学）,3. 注意事项,（1）含氟的药物对瓷坩埚有腐蚀，应采用铂坩埚。,限量一般为0.1%0.2%,（2）炽灼残渣检查法一般加热恒重的温度为700800;若残渣需留作重金属检查，则500600炽灼至恒重。,（3）加硫酸的作用： 1. 使杂质转化为稳定的硫酸盐 2. 帮助有机物炭化,例1. 炽灼残渣检查法一般加热恒重的温度为 A. 500600 B. 6007

18、00 C. 700800 D. 8001000 E. 10001200,（C）,例2. 炽灼残渣检查后，将残渣留作重金属检查时，炽灼温度应为 A. 500600 B. 600700 C. 700800 D. 8001000 E. 10001200,（A）,十、易炭化物检查法 （了解）,检查药物中遇H2SO4易炭化或易被氧化呈色的微量有机杂质。,方法：H2SO4炭化后与对照液比较。,比色：同置白色背景前，平视观察比较,十一、溶液颜色检查法 （3种）,控制药物中有色杂质限量的方法。,第一法 目视比色法 即与标准比色液比较的方法,观察方法,第二法 分光光度法,第三法 色差计法,（自学）,（自学）,十

19、二、澄清度检查法 (自学）,检查药物中的微量不溶性杂质，用作注射剂的原料药一般应作此项检查。,1. 检查方法 对照法,2. 浊度标准液的配制,1.00硫酸肼溶液与10乌洛托品溶液等量混合配制浊度标准贮备液 浊度标准原液 浊度标准液（5个级号）,原理：乌洛托品在偏酸性条件下水解产生甲醛，甲醛与肼缩合生成甲醛腙，不溶于水，形成白色浑浊。,十三. 酸碱度检查法 （自学）,1. 酸碱滴定法,2. 指示剂法,3. PH测定法,十四 残留溶剂测定法（有机溶剂） 中国药典现行版采用GC法测定 十五 灰分检查法（中药及其制剂） 总灰分；酸不溶性灰分 十六 农药残留量检查法 GC法测定,第四节 特殊杂质检查,利

20、用药物和杂质在理化性质和生理作用上的差异来检查 物理法 化学法 旋光法 分光光度法 色谱法,一. 化学法,利用药物和杂质化学性质的差异来限量检查 酸碱性差异 氧化还原性差异 杂质沉淀反应 杂质显色反应 产生气体反应 有机破坏后检查（环状药物中硫、磷、卤素）,1. 酸碱性差异,根据药典项下规定 ：可采用酸碱指示剂、 PH试纸（计）、酸碱滴定法等检查杂质，使其不超过限量。,比如：苯巴比妥中 巴比妥酸的检查,甲基橙（ 变色范围3.1-4.4, 红色-橙黄色 ),氧化还原性差异,比如：氯化钠注射液中碘化物的检查,供试品,H+, NaNO2,淀粉,不显蓝色,又如：葡糖酸亚铁中Fe3+的检查（置换碘量法）

21、,供试品,KI,I2,Na2S2O3,滴定,不超过限量,杂质沉淀反应,比如：氯化钠注射液中钡盐的检查,硫酸，灵敏度法,甘露醇中草酸盐的检查,供试品,CaCl2,OH-,CaC2O4 (白色混浊),杂质显色反应 （络合物）,比如：检查盐酸吗啡中罂粟酸、阿司匹林中的水杨酸？,三氯化铁、 硫酸铁胺,紫堇色,产生气体反应,比如：药物中微量硫化物,供试品,H+,H2S,Pb(OAc)2,PbS,（对照法）,供试品,又如：纯化水中氨的检查,OH-,碘化汞钾,显色,对照品 ：氯化铵,（无氨水溶解）,再如：氰化物的检查,1. 普鲁士蓝法 (灵敏度法）,供试品,酒石酸,HCN,FeSO4,OH-,Fe(CN)5

22、3-,FeCl3,FeFe(CN)5,(绿色或蓝色）,二. 分光光度法,紫外分光光度法 （重点） 比色法 (杂质中常用方法，目视比色、测吸收度) 原子吸收分光光度法 红外分光光度法,根据物质对波长为200760 nm波长范围的光吸收特性所建立的一种定性、定量和结构分析的方法。,1. 紫外-可见分光光度法 （751光度计）,（一） Lambert -Beer定律,应用,（一）鉴别,吸收光谱,E1cm,1%,max,（1） 结构完全相同的化合物应有完全相同的吸收光谱,注意,（2） 吸收光谱完全相同的化合物不一定是同一个化合物,利用药物与杂质吸收光谱的明显差别，进行杂质检查,（二）杂质检查中的应用,在一定波长处测定A，不超过规定A值,2. 原子吸收分光光度法 （自学）,具有专属性强、灵敏度高的特点，主要用于金属元素的测定,构造：光源（待测元素的阴极空心灯） 原子化器 、单色器、检测器,3. 红外分光光度法,红外分光光度法是利用物质分子吸收波数在4000400