ELISA基础知识和注意事项.ppt

1、2020/7/17，ELISA基础知识和注意事项，2020/7/17，类别，ELISA的基本原理和相关概念特别是捕获法处理ELISA结果的影响因素ELISA结果，2020/7/17酶催化剂具有高催化效率，可放大抗原抗体反应效应，使测定方法易感性高、2020/7/17、ELISA的基本原理、抗原或抗体结合在体外的固相载体表面后，仍可维持免疫学活性，并相互特异性结合。2020/7/17，抗原抗体复合物与酶催化剂靶二抗结合，加入合适的基质在酶催化剂作用下发色，颜色浓淡与专一性抗体水平成比例关系，可以定性和量化分析。2020/7/17、ELISA分类、抗原测定：竞争法(也可用于抗体测定)、双抗体穿山鼠

2、开关法。 抗体测定：间接法、捕获法、双抗原穿山鼠开关法、2020/7/17、竞争法elisa、竞争法elisa原理样品中抗原和一定量的酶催化剂标识牌抗原网络冲突与固相抗体结合，样品中的抗原含量越多，与固相结合的酶催化剂标识牌抗原越少，用于发色浅的小分子抗原和半抗原的定量时，测定抗体、2020/7/17、2020/7/17、二抗体穿山鼠开关法、二抗体穿山鼠开关法ELISA将特异的抗体包裹在固相载体表面，与标本中对应的抗原结合，洗涤后添加酶催化剂标的第二特异的抗体与抗原结合，添加基质而发色。 抗原检测需要至少2个抗原决定分类星空卫视、2020/7/17、包裹特异性抗体、2020/7/17、双抗原穿

3、山鼠开关法、双抗原穿山鼠开关法ELISA检测标本中的总抗体(包括IgM和IgG型抗体)。 将特异性抗原包复于固相载体表面，与标本中的特异性IgM和IgG型抗体结合，洗涤后加入酶催化剂标的特异性抗原与对应的抗体结合，洗涤后基质发色、2020/7/17、2020/7/17、间接法、间接法elisa(innisa ) 加酶催化剂标识牌二抗只需对一种免疫球蛋白分子转化包裹抗原，就可通过一种酶催化剂标识牌二抗检测出与各种抗原结合的抗体，分别为2020/7/17、2020/7/17、捕获法、ELISA(Capture ELISA ) 将专门用于检测IgM的抗人IgM抗体包复在固相载体表面，与标本中所有人I

4、gM抗体结合，洗净后加入专一性抗原与对应的专一性IgM抗体结合，洗净后加入酶催化剂靶抗原专一性抗体，洗净后加入基质发色。 2020/7/17、2020/7/17、区别理解、抗原检测？ 是抗体吗？ 包是什么？ 做什么标记？2020/7/17、间接法与捕获法比较，间接法：假阴性、假阳性捕获法：酶催化剂标识牌抗体要求高，2020/7/17、间接法的假阳性，2020/7/17质量控制血清可以是一定值也可以是不定值，可以购买也可以自己配合。 用自各儿配制时要注意选择无脂肪血的血清和血浆，不能做试剂盒内的阳性对照。 以稀释的血清为质量控制血清时，应考虑稀释基质成分对结果的影响。 质量控制血清与临床标本不符

5、，应注意结果分析，质量控制血清只能用于质量控制活动，不能用于标定器和评价方法。 用于室内质量控制的质量控制血清一般选择CUTOFF值的2-3倍的质量控制品。 2020/7/17，室内质量控制：使用质量控制，控制实验室内部实验结果的可靠性。 室间质评价：为做评估各实验室结果的可靠性的评价，可分为国家级和地方级的室间质评价。 可以理解为“各个实验室的素质测评”。2020/7/17，阈值(CUTOFF值):阈值是判断阴阳性或临床意义水平的数值，阈值的确定是测量大量数据并用统计学方法确定的。 许多试剂提供阈值或阈值的修正方法。 本底：底色。 像ELISA HBsAg一样，阳性发色，阴性不发色，背景是阴

6、性全体发色的情况。 ELISA抗HBcAb、阳性不显色、阴性显色、背景是整个阳性显色的情况。 2020/7/17，灵敏度：可检测的分析物的最小量表示检测下限的能力。 相对灵敏度=真阳性/(真阳性假阴性) 100%测定方法及显示方法：灵敏度标准品、质量控制血清、阳性标本稀释终点、血清摇镜头屏及临床标本阳性率。 2020/7/17，专一性：真阴性标本检测能力。 相对专一性=真阴性/(真阴性假阳性) 100%测定及显示方法：质量控制血清、血清盘、临床标本阴性率。2020/7/17、Elisa结果的影响因素、试剂盒的选择标本样品和稀释温育洗版显色质量控制、2020/7/17、试剂盒的选择、同行试剂使用情况高级部门对试剂实际使用的综合评价使用阈值质量控制血清进行了实际检验比较，林敏度和精度高， 为避免选择溶血，5天内测定的血清标本需要4，超过1周测定的20个保存尽量不要重复冻融(少量分注)、2020/7/17、样品和稀释，样品的精准性(个人因素和实验条件)尽量排除主要相关因素的温育， 温度水浴箱的硬板应浮在水面或水面高于反应板，2020/7/17，洗涤版，洗手机(细孔液体残留45s )，2020/7/17，显色，通常为a、b两种液体的室内质量控制血清即时法，2