液相色谱柱的应用课件

1、液相柱的应用、高速液相色谱法训练系列、1、交流PPT、目录、一、液质联用分离原理、2、液相柱的结构、三、液相柱的选择、四、柱的使用、五、分析条件的影响、六、柱流动相与固定相间各成分的相互作用能力(吸附分配络离子交换分子尺寸等)不同(必要条件)，3，交流PPT的学习，分配过程，4，交流PPT的学习，分配系数- K，K=K=常数(t一定) Cm=成分在流动相中的浓度Cs=成分在固定相中的浓度，5在实际的工作中，很好地应用了表示库特吉卜赛人格拉夫分配平衡过程的另一个重要的残奥仪表容量因子(capacity factor ) k=Ms/Mm Ms为成分在固定相中的质量，Mm为成分在流动相中的质量，由保

2、持时间计算出容量因子后，对容量因子k，6进行实验测定，学习交流PPT，库托格拉夫理论：库托分离性能指标，7，交流PPT，学习库托格拉夫的速度方程式H=A B/u Cu H : u :流动相的线速度，8，学习交流PPT，Kut格拉夫理论：影响速率理论-柱效应的要素，H=A B/u Cu，9，学习交流PPT，Kut吉卜赛人格拉夫理论：分离度，分离度：根据邻接的两个成分的保持值之差和其差R=2(TR2-TR1)/(W2 W1 )的修正计算， 在1:R0.8的情况下，在2成分不能完全分离的2:R=1的情况下，如果2成分的峰重叠约2% 3:R=1.5，则2成分的峰完全的r值越大，分离越好，相反，峰重原来

3、如此变多。 降低色谱柱温度，增长色谱柱长度时，r上升。 10、学习交流PPT、样品成分的分离、11、学习交流PPT、液质联用的基本程序流程图HPG-3x00RS泵在整个流速范围内，800 bar的高压最高流速为5 ml/min WPS-3000RS自动试样注入器试样注入周期15秒试样注入阀耐压1000 bar TCC-3000RS柱温箱5-110 C温度范围柱后蒸发制冷DAD-3000RS检测器全波长扫描范围数据采集速率100 Hz Acclaim 2 m柱耐压800 bar chrome lee s软实时结果表明，UltiMate 3000 RSLC快速分离液相，学习2020/7/17、13

4、、13、交流PPT、高性能UltiMate 3000 x2三元梯度系统，有六通道脱气器溶剂架， 独特的双梯度泵：有可变波长或二极管能源宝紫外可见光检测器、14、交流PPT、液相色谱的应用、二、色谱的结构和安装、15、交流PPT、色谱的结构。 用前柱管依次用三氯甲烷、甲醇、水洗净后，用50%的HNO3对柱内壁进行钝化处理。 钝化时使用HNO3在柱管内滞留至少10分钟，在内壁形成钝化的氧化物涂层。 柱规内径：常用4.6mm、2.1mm柱长：学习常用50、100、150、250cm、16、交流PPT、柱的结构，柱管由柱接头、柱管和过滤烟嘴组成。 柱接头采用低死体积结构，柱接头的两端由螺丝组件连接，中

5、间设置有用于密封的压力弹簧。 为了尽可能减少管柱外死体积，安装管柱时，用1.57mm的连接管用中空螺钉按压环后，尽可能插入到最后再拧紧中空螺钉。学习17、交流PPT、管柱的结构，根据厂家和型号的不同管柱有差异，学习18、交流PPT、液相管柱的结构，在两端管柱接头内，在管柱管的两端分别放置不锈钢过滤器(或者过滤烟嘴)，以防止管柱填充材料从流动相流出。 空柱的各组件均为不锈钢制，能承受一般溶剂作用。 但是，由于含有氯化物的溶剂有腐食性，使用时请注意，以免在柱或连接管内长时间贮存这样的溶剂，避免腐蚀。 学习19、交流PPT、柱的结构，柱填料：液相柱的分离作用在填料和流动相之间进行，柱的分类取决于填料

6、的种类。 常用粒子的粒径在310 m的范围内。 正相柱：多以硅凝胶为柱填料。 另一个正相填料是在硅凝胶表面结合了CN、-NH2等官能化学基的所谓结合相硅凝胶。 反相柱：主要以硅凝胶为基质，在其表面结合十八烷基官能化学基(ODS )的无极性填料。 常用的其他反相填料有键C8、C4、C2、-NH2、苯基化学基等。20、交流PPT、液相色谱仪的安装，色谱柱的安装：拆开色谱柱包装箱，确认色谱柱的类型、尺寸、商品发货日期及柱内储存的溶剂。 学习21、交流PPT、液相色谱柱的安装，遵循柱管上所示的流动相的流动(在条件允许的情况下，建议在柱前使用保护柱)。 柱子的出口和检测器相连。 连接管是外径1.57mm

7、、内径0.1-0.3mm的网络链接管。 连接管在通过中空螺钉、冲压环后，尽量强力插入到最后，按时间顺序拧紧中空螺钉，直到不能动为止。 柱被流动相加压发生漏液时，请使用紧固器顺时针持续旋转14圈，直到漏液消失。 22、学习交流PPT，要注意连接管接头：23、学习交流PPT，时钟格拉夫连接注意事项，1、尽量减少死体积，24、学习交流PPT，连接输油管道和接头， 0.12mm内径线毛细管拉力赛HPLC中使用的2.1内径柱0.17mm内径线分析型HPLC中使用的2.14.6内径柱0.25mm内径线半调制型HPLC中使用的9.4内径柱0. 5mm内径线调制型HPLC中使用的21.2内径柱、50 mL柱样

8、品： 1 .苯胺酸2. 5-苯基- 3，6 -二氧-2-哌嗪冰乙酸3. Asp-Phe 4.阿斯残奥金，柱：stablebondsb-c18， 4.6x30mm 3.5 mm流动相： 85% H2O with 0.1%三氟冰乙酸： 15% ACN流速： 1.0 mL/min温度： 35C、25、学习交流PPT、液相柱的应用、三、液相柱的选择。样品、溶解于有机溶剂、溶解于水中、溶解于四氢呋喃、非络离子化、溶解于络离子化、溶解于有机溶剂、溶解于水中、溶解于正己烷、使用甲醇或甲醇或甲醇或乙腈/水中、结合相反相的凝胶过滤色谱分析法， 大孔填料的络离子交换模式、大孔填料的反相模式、分子量2000、低分子

9、凝胶渗透色、硅凝胶的正相模式1 .填料：硅凝胶、氧化铝、聚丙乙烯等2 .结合相： C4、C8、C18、苯基， 氨基等(溴)3.孔径： 60-100A分子量2000 4 .粒径： 2um正相99.995%纯度的二氧化硅，39，交流PPT的学习，a型，b型硅凝胶的比较，a型硅凝胶化合物的吸收，b型硅凝胶峰型峰高分离正常，40，交流PPT的学习，金属敏感测试，柱DD 150 x 4.6mm流动相CH3CN/Water (50:50 )流速1.0 mL/min检测UV230nm硅凝胶中存在金属杂质时，与2，3 -二羟基萘(峰2 )形成金属螯合物，保持时间变长，引起了峰跟踪。 2，7 -二羟基萘(峰1

10、)与金属作用，作为内标物。学习了41、交流PPT、库塔格拉夫柱的尺寸、库塔格拉夫柱尺寸对库塔吉卜赛人格拉夫分离的影响：短柱(15-100mm) -运转时间短、柱压长的柱(150-250mm )运转时间长、分离度高的窄径柱(2.1mm) -粒子形状和大粒子形状： 1球形2无定形，球形，对粒径-色谱分析法分离的影响小的粒子柱效果好，但柱压过高. 3.5m粒径的常用于分离复杂的多成分样品，成分单一的样品为5m粒径、1.8m 3.5m 5m 7m 10m， 通常采用商品化的填料是从2m 30m到现在3m、5m、10m半调制10m、15m调制15m 30m 3m填料、44、交流PPT、粒径的影响、n、F

11、low、3 m的分析中常用的核壳U-HPLC的科学原理，是美国高级内核为1.7 um，因此柱的效果至少相当于UPLC。 外层为0.5um，总粒径为2.7um，因此柱压力接近3.0um柱。 47、学习交流PPT、流速设定、48、学习交流PPT、管柱尺寸和填料粒径的影响、1.c 18.6 * 250，5 um； 242纳米，甲醇15 % (45米)，2.c 184.6 * 150，3.5微米。 242纳米，甲醇15 % (25分钟)，3.c 184.6 * 50，3.5微米。 学习了242nm，甲醇15%(10min )，49，交流PPT，比表面积和孔径，对表面积色谱分析法分离的影响高比表面积对多

12、组分样品的分离有很强的保持能力， 具有柱容量和分离度的孔径-影响色谱分析法分离的大孔填料粒子可以延长溶质大分子在填料表面滞留的时间，实现一盏茶分离，改善峰值样品MW2000，100孔径样品mw2， 选择000，选择300孔径，50，学习交流PPT，进行比表面积的比较，学习52，交流PPT，大孔径填充剂适用于大分子分析，大孔径300全多孔柱适用于蛋白质和多肽的分离，柱填充剂的孔径被测定物分子自由进出填充剂孔， 必须分离分配与孔内表面的结合相，学习53，交流PPT，300孔径改善蛋白质和多肽的峰形，选择合适的填充剂孔径分析大分子就能得到的交流PPT，300孔径能改善大分子的峰形，柱： 4.6 x

13、150 mm， 5 mm流动相： 60% MeOH: 40% 0.1%三氟冰乙酸流速： 0.75 mL/min温度： RT检测器： RT溶液中的分子尺寸决定适当的柱孔径的狭窄的峰宽度表示不阻碍被测定分子进入填充孔， 学习分子量小但体积大的分子、55、交流PPT、柱化学性质，结合型单齿结合相分子、沉积基质单齿结合相分子、沉积基质多点结合碳营销对象模量和沉积基质物质的结合相的量子摇滾乐结合工序后，用短链结合封闭裸体的硅羟基化学基，56、学习交流PPT， 耦合类型、耦合类型对库特格拉夫分离的影响：单齿耦合：传递速度的提高，柱平衡双齿耦合的加速：柱稳定性的增加，柱的载流子量的增加，57，交流PPT的学

14、习，碳量，碳量一般C18、C18的碳量为10%，高的为18 %，58，学习交流PPT、碳量、碳量-对色谱分析法分离的影响高碳量：保留强，提高极限分辨率，分析时间长的低碳量：保留弱， 缩短运转时间对摇滾乐-色谱分析法分离的影响斑点：对于减轻被测定成分和硅凝胶表面残留的酸性硅氧烷羟基化学基反应引起的色谱分析法峰拖尾现象的极性样品和盐化学基性样品， 没被封摇滾乐的色谱分析法和被封摇滾乐处理的色谱分析法在选择性上有显着差别的CH，3，Si，CH，3，CH，3，Si，r，CH，3，R=C8，C18，etc，o， 您可以选择选择、选择、选择、选择、选择、选择、选择、选择、选择、选择。 学习、交流PPT、超临界丁锁定技，传统的丁摇滾乐：固液回流丁摇滾乐，丁摇滾乐试剂和催化剂在有机溶剂中溶解，在结合相和有机溶剂沸腾温度下回流数小时到数天。 小孔很难到