浙江大学-刘振伟教授高级培训班-膜片钳技术数据处理与分析.ppt

1、clampfit 10膜片钳实验数据的处理和分析，2014年4月23-25日，膜片钳技术高级培训班，2，1，膜片钳实验数据的处理2，全细胞球记录数据的分析3，单通道记录数据的分析4，突触放电活动数据的分析2014 patch clamp training class、apr. 23-25、2014、膜片钳实验数据的处理、一、基线的调零二、坏处的去除三、过滤四2014、膜片钳实验数据的处理、一、基线单通道开放时间长记录时间短的云同步上开放的通道数多，长时间持续开放决定通道电流的方向：电流方向向上，最负的方向是地面线位置，反之亦然。 如何确定：贴片两侧液体，钳位电位，5，patch clamp t

2、raining class，apr.23-25，2014，贴片钳位实验数据的处理，6， patchclamp基线不在零点的原因封接电阻的变化：漏电流失调电位的存在：片偏移、漂移噪声的干扰作用：交流干扰作用高通过滤烟嘴的影响：影响记录线的起始部位，7，patch clamp training class，apr.23-25 (2) (3)subtract fixed value (固定值去除法):适用于直流片偏移去除。 数值有正负之分。 (4)adjust manually (手动调零法):适合单通道电流的基线或基线漂移不规则。8、patch clamp training class、apr.2

3、3-25、2014、接插钳实验数据的处理、epoch a级、(1)辅助平面()接插钳实验clamp training class、apr.233 膜片钳实验数据的处理，(3)subtract fixed value (固定值去除法) (4)adjust apr.23-25、2014，膜片钳实验数据的处理，基线调零的注意事项(1)相对值(电流幅度的变化值等) 但是，大多数情况下需要调零基线，建议调零基线。 (2)对于基线变动复杂的数据，基线调零可以使用上述几种方法。 (3)对于一部分基线变动，clampfit中的基线调零方法也有可能不能正确地调零。 建议在收集数据时调整基线。11、patch c

4、lamp training class、apr.23-25、2014、补片钳位实验数据的处理、clampfit演示基线调零方法、12、patchclamptrraining电容器二烯烃定瞬时脉冲噪声(glitch ) :来自接通电源开关(荧光灯、设备接通时)的大哥大的来电：暂时性射频波。 人手接近记录探针：高宽度、射频波。 (1)数据值at cursor1: cursor1(2) meanbetweencursor1.补丁钳实验数据的处理，13，补丁钳实验类，apr.23-25，2014，坏点代入(3) meanbetweencursor3.4:cursor3- 4之间的平均值。 (4) st

5、raight-linefitbetweencursor1.2:cursor1- 2之间的直线拟合值。 (5)固定值(pa/mv ) :输入固定的数值。膜片钳实验数据的处理、14、patch clamp training class、apr.2325、2014、膜片钳实验数据的处理、通过clampfit演示去除坏点、15、 (2)如果有坏点持续时间短、持续时间长的坏点，则废弃数据。、膜片钳实验数据的处理、16、patch clamp training class、apr.2325、2014、3、滤波、信号收集前的滤波全细胞球通道电流记录： 12khz全细胞球突触17，patch clamp t

6、apr.23-25，2014，信号收集后的过滤，接插钳实验数据的处理，18，patch clamp training class electrical interference，cclampfit过滤器类型，接插钳patch clamp training class，apr.23-25，2014，lampfit clampfit根据采样定理和nyquist定理自动计算f-3db范围，并显示在该框的底部。 7种类型： (1)8-pole bessel :数据失真小，广泛应用于时域数据。 (2)boxcar :用于时域数据的数字滤波器。 将当前数据点及其前后的几个数据点(取决于smoothing

7、points，取3-99的奇数)的平均值给予当前数据点，并完成过滤。 “smoothing points”的值越大，减少的数据幅度就越大。 (3)gaussian :数字滤波器与boxcar相同，但是当前的数据点在平均值中所占的比例很大。 (4) rc (8-意义轮询) :用于时域数据。 (5)单轮询(rc ) :用于时域数据。 (6) 8轮对接：用于关频率域数据。 (7) 8轮询检查：用于关频率域数据。 接插钳实验数据的处理，20，patch clamp training class，apr.2325，2014，接插钳实验数据的处理，clampfit演示低通过滤，21， clampfit自动

8、计算8极bessel、单极rc为- f-3db、clampfit为f-3db的范围，提供在该框的底部显示的2种。 最常见的是，在对神经元进行细胞球内记录时使用高通滤波器，能够降低膜电位的次低频振动对突触电流的干扰作用。 接插钳实验数据的处理，22，patch clamp training class，apr.2325，2014，接插钳实验数据的处理，clampfit演示highpass过滤，23， 高通滤波器的f-3db不能高于低通滤镜的f-3db。 当要记录的信号的频率单一且固定时，带通滤波器用于过滤其他频率的噪音。 接插钳位实验数据的处理、24、patch clamp training c

9、lass，apr.2325，2014、notch带阻滤波： 50 hz交流等使特定频率减弱的信号。 中心频率： 10-3，000 hz。 频率宽度(3db宽度) :频率宽度。 -3db width越窄，过滤所需的数据点越多，过滤效果越好。膜片钳实验数据的处理、25、patch clamp training class、apr.23-25、2014、膜片钳实验数据的处理、clampfit演示notch过滤、26电子接口可将50 hz及其间谐波(100 hz、150 hz等)的复杂交流干扰去除到云同步中。 harmonics from 1 to :用于设定想要去除的交流间谐波的最高数量，最大数量为

10、20 (支持1 khz )，一般去除第13个即一盏茶。 cycles to average :数量越多，-3db频率幅度越窄，滤波效果越好，但是需要时间。 参考频率：选择50hz。膜片钳实验数据的处理、27、patch clamp training class、apr.23-25、2014、ei所需的最小据点的修正运算例过滤器所需的最小据点(采样频率/50hz)cycleei一个50 hz正弦波周期的太阳如果设定为50 200点cycles to average 10，则必须脚丫子最小采样点数2，000点的采样数据点，才能去除间谐波噪声。、接插钳实验数据的处理，28，patch clamp t

11、raining class，apr.2325，2014，4，数据文件内部/间的数学运算，analyze/averaas请求： clampex软件的fixed-led 重复记录的信号，时间必须一定。 如果接插钳位实验数据的处理、29、patch clamp training class、apr.23-25、2014、用于降低信号噪声的信号频谱与噪声频谱一致或重叠，则无法进行过滤。 平均跟踪原理：如果设有n个跟踪(参照表) :预先全部累积n个跟踪，这时信号幅度会增加到原来的n倍，但是噪声仅会增加到原来的n倍。 然后，按照跟踪条数n进行除法运算时，信号幅度不会有大的变化，噪声幅度会降低为原来的1/n

12、。 接插钳实验数据的处理，30，patch clamp training class，apr.2325， 2014年，补丁钳位实验数据的处理、clampfit演示平均跟踪功能、330分析/分段平均对多个跟踪的相同时段(例如，epoch a )或cursor 1-2之间的时段进行平均，并且取平均值subtract control功能的控制中使用的补丁钳制实验数据的处理、32，patch clamp training class，apr.2325，2014，analyze/arithmetic是文件中的任意translate 此功能(如t3=t1 t2、t3=t1 t2结果窗口)可以计算不同列的数

13、据，从而获得新列的数值。膜片钳实验数据的处理、33、patch clamp training class、apr.2325、2014、analyze/average files对几个文件进行了平均。 例如，进行相同实验时，需要对几个采样文件所对应的每个trace进行平均。 平均化文件自动生成，文件名为average000-999.abf。 仅适用于episodic stimulation、高速oscilloscope模式的数据。 protocol的设定必须一条龙。 同样具有降低噪音的作用。膜片钳实验数据的处理、34、patch clamp training class、apr.2325、2014、膜片钳实验数据的处理、clampfit演示average files功能、35 analyze/subtract 必须以相同的协议收集两个文件(信号数、sweep数和长度、信号单位、采样频率)。 test file