蛋白质的性质实验(一)

1、蛋白质特性实验(a)蛋白质和氨基酸的着色反应一、目的1.了解构成蛋白质的基本结构单元和主要连接方法。了解蛋白质和一些氨基酸的着色反应原理。3.学习确认蛋白质和氨基酸的几种常用方法。二、着色反应(a)滴定管反应1.原理将尿素加热到180左右，产生双轴向尿素，释放一分子氨。双缩能在碱性环境中与Cu2结合产生紫红色化合物，这种反应称为双缩反应。蛋白质分子有钚结合，其结构类似于双轴向尿素，这种反应也可能发生。可用于蛋白质的定性或定量测定。缩脲反应不是包含两个或多个肽结合的物质所有。包含肽键和-cs-NH2、-CH2-NH2、-CRH-NH2、-CH2-NH2-CSNH2-ch2oh或-chohch 2

2、 NH 2等群体的物质所有蛋白质或二肽以上的多肽都有缩脲反应，但有缩脲反应的物质不一定是蛋白质或多肽。2.试剂3.工作取少量尿素结晶，放入干燥试管。用小火加热溶解尿素。熔化的尿素开始硬化后，停止加热，尿素释放氨，形成双重收缩。冷的时候，加入10%的氢氧化钠溶液，大约1毫升左右，振动均匀混合，再加入1%的硫酸铜溶液，再次振动。观察出现的粉红颜色。要避免过量添加硫酸铜。否则，生成的蓝色氢氧化铜可能会掩盖粉红色。在其他试管中加入1毫升和10%氢氧化钠溶液约2毫升，摇晃得很好，再加入2滴1%硫酸铜溶液，就一起摇晃了。观察紫色玫瑰色的出现。(b)茚三酮反应1.原理所有-氨基酸和所有蛋白质(脯氨酸、羟脯氨

3、酸和茚三酮反应除外)都可以与茚三酮反应一起生成蓝紫色物质。-丙氨酸、氨和许多初级胺呈正反应。尿素、马约酸、睾酮、钚联合的氨基没有这种反应。因此，蛋白质和氨基酸都有睾酮反应，但与睾酮呈阳性反应的不一定是蛋白质或氨基酸。在定性和定量测定中，要严格防止干涉物的存在。这种反应非常敏感，1: 1500000浓度的氨基酸水溶液可以给出反应，是常用的氨基酸定量测定方法。睾酮反应分为两个阶段，第一阶段是氨基酸氧化形成CO2，NH3，醛，水合睾酮还原为圆形睾酮。第二步是通过形成的油毡和另一种水合的油毡分子和氨的缩合，制造有色物质。(约翰f肯尼迪，北方快车)适合这种反应的pH值为5 7，相同浓度的蛋白质或氨基酸根

4、据pH条件颜色深，浓度不同，酸度过高时甚至不会出现颜色。2.试剂3.工作(1)将2个试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶液mL，分别加入0.5毫升0.1%茚三酮水溶液混合，在沸水浴中加热1 2分钟，从粉红色变成紫色，观察变成蓝色。(2)在小滤纸上滴入一滴0.5%甘氨酸溶液，干燥后，将0.1%茚三酮溶液滴入原位，在弱火旁干燥发色，观察紫红斑点的出现。(c)黄色反应1.原理含有酪氨酸和色氨酸等苯环结构的氨基酸，遇到硝酸后可以硝化，在碱性溶液中进一步形成进安镇橙色硝基醌钠。反应式如下：大部分蛋白质分子含有有苯环的氨基酸，因此有黄色反应，苯丙氨酸不易硝化，只有加入少量的进安镇硫酸，才会有黄色反应。2.试剂

5、(1)蛋清溶液100毫升将新鲜鸡蛋的蛋清和水混合在1: 20，然后用6层纱布过滤。(2)大豆提取物100毫升充分吸入大豆后，磨成浆，用纱布滤出。(3)头发(4)指甲(5) 0.5%苯酚溶液50毫升3.工作在7个试管中，每一个都在下表中放入试剂，观察每一个试管的现象，有些试管反应慢或可以用美金加热。当每个管子上出现黄色时，在室温下，将10%的氢氧化钠溶液放入碱性中观察颜色变化。(d)科马斯淡蓝色反应1.原理komas亮蓝色G250有红色和蓝色两种色调。在酸性溶液中，以自由状态呈褐色存在。它通过蛋白质和疏水作用结合后变成蓝色。染色灵敏度高，比氨基黑高3倍。反应速度快，平衡约2分钟，在室温下1小时内稳定。在0.01到1.0mg的蛋白质范围内2.试剂(1)蛋白质溶液(蛋清：水=1:20)5毫升(2)科马斯亮蓝色染料300毫升komas亮蓝色G250100g溶解在50ML 95%乙醇中，混合100mL85%磷酸，配制原液。取任前原液15毫升，将蒸