第八章 2-4节.ppt

1、病 例,李某，男，16岁，因发烧、浮肿、血尿入院。自幼时常咽喉痛、发烧，曾因心脏杂音卧床一个月。入院前3周又因咽痛发烧而注射青霉素数日，症状消失，入院前两日高热，血尿。查体：T 39，血压稍高，眼睑及下肢浮肿。实验室检查：尿RBC+，尿蛋白+， ASO抗体800单位。 思考题： 1本病怀疑为什么疾病？ 2从微生物学角度应进行哪些检查？ 3. 此致病菌致病物质有哪些？引起本病的机制？,第二节 链球菌属 (Streptococcus）,自然界、人及动物粪便和健康人鼻咽部，G+，是化脓性细菌中常见的一大类，多数不致病，90%感染由A群链球菌引起。,一、生物学性状1、形态与染色 0.6-1m，G+，球

2、形，链状排列 液体培养基中链较长 幼龄期菌有荚膜（透明质酸） 有菌毛样结构，含型特异M蛋白,2、培养特性与生化反应,营养要求高：血平板或含血清、葡萄糖培 养基 需氧、兼性厌氧，液体培养为絮状沉淀 生长 血平板呈灰白色表面光滑小菌落，不同 菌株溶血不一,与溶血,生化反应,分解葡萄糖只产酸 触酶试验（）（与葡萄球 菌鉴别） 不分解菊糖，不被胆汁溶解 （鉴别甲型溶血性链球菌与肺炎链球菌）,3、根据抗原构造分类,群特异性抗原（C抗 原）：细胞壁多糖抗原，可将链球菌分为20群（A-H 、K-T 、U 、V等），引起人类感染的链球菌90为A群。,型特异性抗原（表面抗原）：细胞壁蛋白抗原，有M、T、R、S四

3、种，根据M抗原不同，可将A群分为100型。,荚膜,细胞壁,蛋白质,多糖,肽聚糖,细胞膜,细胞质,核蛋白,4、根据溶血现象分类：,5、抵抗力,不强，加热6030min被杀死 对消毒剂、抗生素敏感 首选药物青霉素。,1、侵袭性酶:利于细菌在局部化脓性炎中扩散,（1）透明质酸酶：扩散因子，分解细胞间透明质 酸，使病菌易扩散 （2）链激酶：使血液中纤维蛋白酶原变成纤维蛋 白酶，溶解血块或阻止血浆凝固 （3）链道酶：降解脓液中高度粘稠的DNA，使脓 液稀薄，促进病菌扩散,二、致病性（一）致病物质,2、M蛋白：抗吞噬 介导细菌与上皮细胞的黏附，抑制吞噬细胞的吞噬作用。与肾小球基底膜、心肌细胞有共同抗原成分

4、，与、超敏反应性疾病有关 3、粘附素：定植 脂磷壁酸（LTA）：细菌定植于皮肤和呼吸道粘膜 F蛋白：与上皮细胞表面纤维粘连蛋白结合，黏附 于上皮细胞，利于定植和繁殖4、荚膜：抗吞噬作用，免疫逃避,5、链球菌溶素（streptolysin）： 溶解红细胞、破坏白细胞和血小板 （1）SLO：对O2敏感，抗原性强，刺激机体产生抗体ASO(抗O)。 测定SLO抗体含量，是风湿热和肾小球肾 炎的诊断指标。 （2）SLS：对O2稳定，无免疫原性，小分子的糖肽，引起 溶血,6、致热外毒素SPE （streptococcal pyrogenic exotoxin）： 红疹毒素或猩红热毒素 A群链球菌溶原性菌株

5、产生，耐热的蛋白质 是引起人类猩红热（scarletfever）的主要毒性物质，为急性呼吸道传染病 该毒素还有内毒素样的致热作用，对细胞或组织有损害作用。,（二）所致疾病：复杂而多样, A群链球菌,淋巴结炎,猩红热 链球菌毒性休克综合征,超敏反应性疾病,侵袭性感染,毒素性疾病,蜂窝织炎 脓疱疮,咽炎 扁桃体炎 丹毒,风湿热,急性肾小球肾炎,脓疱疮,颈淋巴结炎,扁桃体炎,面部丹毒急性期,（由皮肤伤口侵入）,蜂窝织炎,咽炎,猩红热：急性呼吸道传染病，临床特征为发热、 咽峡炎、全身弥漫性皮疹和疹退后的 明显脱屑，口周苍白、草莓舌、杨梅舌,风湿热: 咽炎后发生，以关节炎、心肌炎为主。 发病机制: (1

6、)M蛋白与其抗体结合形成免疫复合物, 沉积于心瓣膜和 关节滑膜引起型超敏反应 (2)链球菌多糖抗原与心瓣膜有共同抗原，引起型超敏反应,急性肾小球肾炎：多见于儿童和少年，扁桃 体炎和咽炎后均可发生， 蛋白尿、浮肿和高血压。发病机制:(1)M蛋白与其抗体结合形成免疫复合物, 沉积于 肾小球基底膜引起型超敏反应(2)链球菌的某些抗原与肾小球基底膜有共同抗 原，机体针对链球菌所产生的抗体与肾小球 基底膜发生反应，引发基底膜损伤，属型 变态反应。,甲型链球菌,人类口腔和上呼吸道的正常菌群，在拔牙或摘除扁桃体时，寄居在口腔、龈缝中的草绿色链球菌可侵入血流引起菌血症。若心脏瓣膜已有缺陷或损伤，本菌可在损伤部

7、位繁殖，引起亚急性细菌性心内膜炎。,D群链球菌,条件致病菌，正常寄居于皮肤、上呼吸道、消化道、泌尿生殖道。可引起尿路感染、腹部感染、败血症、心内膜炎。,B群链球菌,条件致病菌，正常寄居于直肠、阴道、鼻咽部。可引起皮肤感染、心内膜炎、产后感染、新生儿败血症和新生儿脑膜炎。,其它链球菌引起的疾病,三、免疫性,A群链球菌感染后，可产生特异免疫 型别间无交叉免疫，故常反复感染 猩红热患者可建立牢固的同型抗毒素免疫,四、微生物学检查法,脓、痰、咽拭,脑脊液,血液,增菌培养,分离培养,直接涂片染色,观察菌落及溶血现象,触酶试验（）,奥普托辛 （Optochin）试验,肺炎 链球菌,B群 链球菌,马尿酸钠水

8、解试验,胆汁 七叶苷,A群 链球菌,D群 链球菌,肠球菌,6.5 NaCl,血清学分类, ASO test,风湿热,血清学检查,抗“O”试验（ASO test）：链球菌侵入体内产生SLO，刺激机体产生相应抗体ASO，当两者中和后，在加入SLO 乳胶试剂，因病人血清中ASO量很多，未被中和掉的抗体与乳胶试剂反应，产生清晰凝集，为阳性；无凝集，为阴性。 原理：中和试验 方法：间接凝集 结果： 效价大于400单位 意义： 链球菌新近感染的指标、 风湿热及其活动性的辅助诊断,预 防, 对病人和带菌者及时治疗，减少传染源 空气、器械、敷料等注意消毒。 流行期间每月注射长效青霉素 对急性咽峡炎和扁桃体炎患

9、者，尤其是儿童，须治疗彻底，防止变态反应疾病的发生,四、防治原则,治 疗,青霉素、红霉素、磺胺药、林可霉素，青霉素首选。 特殊治疗：外科清创，抗休克，抗毒素。,总结,1、金黄色葡萄球菌与链球菌如何鉴别？ 2、链球菌的致病物质有哪些？ 3、金黄色葡萄球菌与链球菌所引起的化脓性 感染有什么区别？原因是什么？ 4、什么是ASO test？有何意义？ 5、A群链球菌可引起哪些疾病？ 6、链球菌如何分类？,?,有关鉴别试验附加内容,(一)溶血性检查 溶血性是鉴定球菌最常用的项目，也是鉴定过程中重要的一步。1919年Brown对溶血性进行了描述。溶血性的识别可在血平板表面菌落周围和穿刺处通过肉眼观察，也可

10、用显微镜观察。除在分离血平板上观察菌落周围的溶血性外，还可用以下方法确认。 材料：羊血平板。 方法：将标本接种于羊血平板上，用接种针在已接种过的血平板上扎23处，使细菌被接种到琼脂层深处，35孵育过夜。 观察结果：在接种针穿刺过处，羊红细胞完全溶解，形成无色透明区，为溶血。羊红细胞部分溶解或不溶解呈草绿色的环，为溶血。不溶解无溶血环为溶血。 (二)Optochin敏感试验 材料：Optochin(ethylhydrocupreineHCI。)纸片(直径6mm)，每片含5g。血平板。 方法：挑取被检菌落，涂在血平板上，贴Optochin纸片于接种处，35，烛缸孵育18h。 观察结果：抑菌环直径1

11、4mm为敏感，推断肺炎链球菌。 抑菌环直径14mm时参照胆汁溶菌，或为其他草绿色链球菌。 (三)杆菌肽敏感试验 材料：含0.04U片的杆菌肽纸片，血平板。 方法：挑取被检菌落，密涂于血平板上，接种量应大，以免出假阳性。贴上杆菌肽纸片，35过夜。 观察结果：形成抑菌环为敏感，则被检菌推断为A群链球菌。,有关鉴别试验附加内容,(四)CAMP试验 材料：血平板，金黄色葡萄球菌ATCC25923。 方法：在血平板上，用金黄色葡萄球菌划种一条直线，再将被检菌距金黄色葡萄球菌3mm处垂直接种一短线。用同样方法接种阴性和阳性对照菌。35孵育过夜。 观察结果：在被检菌接种线与金葡菌接种线之间有一个矢形(半月形

12、)加强溶血区，此即CAMP试验阳性。阴性无加强溶血区。 (五)胆汁-七叶苷试验(平皿法或斜面法) 培养基：牛肉膏 3g 七叶苷 1g 蛋白胨 5g 枸橼酸铁 0.5g 胆盐 40g 蒸馏水 1000ml 琼脂 1 牛肉膏、蛋白胨和琼脂溶于400ml蒸馏水中，胆盐溶于400ml蒸馏水中，枸橼酸铁溶于l00ml蒸馏水中，三者混合，加热充分溶解后，高压灭菌12115min。七叶苷溶于l00ml蒸馏水，过滤除菌，以无菌手续加到培养基中，倾倒平皿或斜面。 方法：接种被检菌13个菌落，涂划开，置35下，孵育2448h。 观察结果：培养基变黑色或棕褐色为阳性，不变色为阴性。 注意事项：接种细菌量不能过大。本

13、试验是测定细菌在胆盐中生长情况及同时分解七叶苷的能力，如接种菌量过大，细菌不需要生长而本身固有的酶足以造成七叶苷分解，出现假阳性结果。 (六）马尿酸钠水解试验 (1)原理：某些细菌可具有马尿酸水解酶，可使马尿酸水解为苯甲酸和甘氨酸，苯甲酸与三氯化铁试剂结合，形成苯甲酸铁沉淀。 (2)方法：将待检菌接种于马尿酸钠培养基中，置35孵育48h，离心沉淀，取上清液0.8ml，加入三氯化铁试剂0.2ml，立即混匀，经1015min观察结果。 (3)结果：出现恒定之沉淀物为阳性。 应用：主要用于B群链球菌的鉴定。,有关鉴别试验附加内容,(七)七叶苷试验 培养基：蛋白胨 5g 七叶苷 3g K2HPO4 1

14、g 枸橼酸铁 0.5g 蒸馏水 1000ml 将上述成分加热溶解，分装试管，高压灭菌12rClomin。 方法：接种被检菌于培养基中，35过夜。 观察结果：培养基变黑为阳性，不变为阴性。 (八)6.5NaCl生长试验 培养基 NaCl 6.5g 牛肉粉 0.3g 葡萄糖 0.1g 蛋白胨 1g 琼脂粉 1.8g 蒸馏水 l00ml 溴甲酚紫指示剂适量 调整pH7.4，12115min灭菌后制成平皿或斜面。 方法：接种被检菌，35孵育过夜。 观察结果：培养基上生长出菌落并变黄色为阳性，不变色为阴性。 注意点：本试验是测定细菌在高盐中的生长能力，葡萄糖作为是否生长的指示剂。细菌接种量不能过大，否则

15、细菌并不需要繁殖即可使葡萄糖产酸，培养基变色，导致假阳性结果。 (九)色素试验 色素试验在鉴定B群链球菌的几个方法中，特异性最好。这是Noble改良的Islam法。 培养基：淀粉 10g 胨 23.0g NaH2PO4 1.48g Na2HP04 5.75g 琼脂 l0g 水 1000ml 调pH7.4，12115min灭菌后，加入10ml灭活马血清，倾制平板或高层琼脂。接种细菌，35过夜培养。 观察结果：细菌菌落及周围的培养基呈黄色为阳性。,病 例男，20岁，学生。酗酒后遭雨淋，于当天晚上突然起病，寒颤、高热、呼吸困难、胸痛，继而咳嗽，咳铁锈色痰。听诊，左肺下叶有大量湿性啰音；触诊语颤增强；

16、血常规：WBC：17X109/L（4-10X109/L）；X线检查，左肺下叶有大片致密阴影。经抗生素治疗，病情好转，各种症状逐渐消失；X线检查，左肺下叶的大片致密阴影缩小2/3面积。于入院后第7天自感无症状出院。,1、患者发生了什么疾病？2、从微生物学角度应该进行哪些检验以确定诊断？,肺炎链球菌 （S. pneumoniae）,寄居于人的鼻咽腔中，一般不致病。机体免疫力下降时可引起细菌性肺炎。,矛头状：平面相对 尖面相背,一、生物学性状、形态与染色,有厚荚膜,G+双球菌，病变组织中：单个或短链,无芽胞,无鞭毛,分解葡萄糖，乳糖 菊糖（+）,2、培养特性,营养要求较高，常用血培养，菌落灰白色细小

17、半透明，与甲链相似， 周围有溶血，培育时间48小时， 能产生自溶酶，菌落呈脐状,3、生化反应,胆汁溶菌（+）,4、抗原结构：荚膜多糖抗原（型特异性，90型） 菌体抗原（M蛋白、C多糖） 5、抵抗力： 较弱,与甲链鉴别,二、致病性,1、荚膜有荚膜菌株才能引起人致病2、肺炎链球菌溶素O (pneumolysin O):溶解细胞，有助于细菌定植；抑制中性粒细胞的趋化及吞噬作用 3、IgA蛋白酶：促进细菌的黏附与定植3、磷壁酸：粘附,大叶性肺炎侵犯胸膜肺炎双球菌性胸膜炎 入血肺炎双球菌性脑膜炎,建立较牢固的同型免疫,四、微生物学检查方法,直接涂片镜检： 查见G+矛头状双球菌，有荚膜，可作初步诊断。 分

18、离培养与鉴定： 血平板可疑菌落胆汁溶菌试验、菊糖发酵试验、optochin敏感试验 动物试验：有毒力肺炎球菌高度易感小鼠，24h死亡。甲链小鼠不死亡。,肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌鉴别,四、防治原则：,多价肺炎球菌荚膜多糖疫苗（含有23个型别）,根据药敏试验选择抗生素,总结,肺炎链球菌结构特点？培养特点？ 如何区别肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌？ 肺炎链球菌主要的致病物质是什么？ 可引起什么疾病？,?,病 例,男性，2岁，于2天前发热达39，伴哭闹，易激惹，呕吐2次，喷射性，以“发热呕吐”待查收入院。近2天来精神萎靡，二便正常，吃奶稍差。查体:T39.2，右眼结膜及全身皮肤有针头至绿豆大小不等的

19、红色出血点，咽微红，精神差，易激惹，前囟张力稍高，眼神欠灵活，颈硬。脑脊液检查：外观混浊，白细胞总数22109/L，中性多核粒细胞96%，淋巴细胞4%。将脑脊液离心沉淀后取沉渣涂片，革兰染色检查，发现白细胞内外均有革兰阴性双球菌。克氏征(+)。（屈髓伸膝试验，患者仰卧位使膝关节屈曲成直角，然后被动使屈曲的小腿伸直，当膝关节不能伸直，出现阻力及疼痛而膝关节形成的角度不到135时为克氏征阳性）。 1、引起本病最可能的病菌是什么？ 2、该菌是如何传播的？所致疾病怎样进行特异性预防？,脑膜炎奈瑟菌 ( Neisseria meningitidis ),一、生物学性状 1、形态与染色 G- 双球菌，肾形

20、或豆形 无鞭毛，无芽胞 新分离株大多有荚膜和菌毛 在患者脑脊液中多位于中性粒细胞内,2、培养特性与生化反应,专性需氧菌 巧克力色血平板，在5%-10%CO2条件下生长更佳。 最适37 ，30 或 40不 生长； 菌落无色、透明、露滴状、光滑型、不溶血；能产生自溶酶。 分解葡萄糖、麦芽糖，氧化酶和触酶试验（+）,3、抗原构造与分类,荚膜多糖抗原 群特异性，分为13群，我国95%由A群引起 外膜蛋白抗原 型特异性，1-5类，2和3类用于分型 1和5用于分亚型 脂寡糖抗原 外膜脂多糖缺乏多糖侧链，只有寡糖重复单位,4、抵抗力：,很弱，对青霉素敏感，对磺胺普遍耐药,四怕 热力 寒冷 干燥 消毒剂,二、

21、致病性,（一）致病物质,主要是LOS 荚膜：抗吞噬 菌毛：粘附,发热 瘀斑和微循环障碍（小血管和毛细血管） 中毒性休克、DIC,普通型：占90%左右。先有上呼吸道炎症，继而病菌从鼻咽部黏膜入血，突破血脑屏障到达脑脊髓膜，引起化脓性炎症。 暴发型：仅见于少数病人。病菌在血流中大量繁殖，菌体溶解时释放大量内毒素，引起微循环衰竭、内毒素休克和DIC。该型起病急骤凶险，病死率高。 慢性败血症型：不多见，成人患者较多，病程可迁延数日。,（二）所致疾病,流行性脑脊髓膜炎（流脑）传 染 源：病人和带菌者传播途径：飞沫易感人群：5岁以下儿童,三、免疫性,人体对本菌天然抵抗力强 病后有牢固的免疫力,四、微生物学

22、检查,标本,分离培养与鉴定,脑脊液、血液、出血点渗出液、鼻咽拭 保暖、保湿、立即送检，培养基预温,直接涂片镜检,脑脊液检查：中性粒细胞内、 外有G-双球菌，可作出初步诊断。瘀斑检查：制成印片，革兰染色，阳性率80%,巧克力（色）培养基,快速诊断,对流免疫电泳，SPA协同凝集试验,四、防治原则,儿童：注射流脑荚膜多糖疫苗进行特异性预防 （常用A、C二价或A、C、Y和W135混合),治疗采用青霉素、磺胺等抗生素,总结,脑膜炎奈瑟菌形态、培养特点及抵抗力？ 脑膜炎奈瑟菌主要的致病物质？所致疾病？ 感染流行性脑脊髓膜炎的微生物学检查方法？,?,病 例,某男，43岁，来院就诊，一日前无明显原因尿痛、尿频、尿道分泌物增多，伴腰痛，要求检查治疗。经查尿道口红肿，挤压尿道