新制作∶淋巴细胞亚群与肿瘤淋巴细胞亚群与临床及科研.ppt

1、淋巴细胞亚群临床和科研应用，BD FACScalibur，流式细胞仪原理介绍，淋巴细胞亚群基础知识，t淋巴细胞：主要杀伤病原体感染细胞球和肿瘤细胞球。 表面标记： CD3与TCR形成复合物，t细胞球是识别抗原、传递信号的主要单位。 CD3 /CD4 :辅助性t细胞球CD3 /CD8 :杀伤t细胞球、辅助性t细胞球可以分泌细胞不同的细胞因子，具有辅助(促进和抑制)其他免疫细胞的分化和免疫应答调节的作用。 可分化为th0:th1/th2。 TH1:细胞球偏于分泌细胞IL-2和IFN-r，与TDTH (迟发超敏化作用反应类型t细胞球)和Tc (细胞球毒性t细胞球)的分化发育有关。 TH2 :可以分泌

2、细胞IL-10和IL-10等，参与b细胞球的增殖、成熟、抗体促进，可以增强体液免疫。 TH1和TH2细胞球之间相互牵制，分别分泌细胞的细胞因子对对方发挥负反馈调节作用。CD8 T细胞球也称为细胞球毒性t细胞球、Tc或CTL，在t细胞球的免疫应答中发挥重要的功能。 Tc细胞球识别抗原激活后释放细胞球浆内颗粒毒素：杀伤穿孔素perforin和颗粒酶催化剂granzyme、靶细胞。b淋巴细胞是免疫系统中的抗体生成细胞球。 1 .产生的抗体可与抗原特异性结合，如中和细菌外毒素而丧失毒性作用2 .抗体与抗原结合形成的复合体容易被吞噬细胞球除去3、抗体与抗原结合，与补体结合，除去病原体。 b细胞球专一性标

3、记： CD19、NK自然杀伤细胞：识别在细小病毒感染细胞球表面表达的相应配体，NK细胞球识别细小病毒感染细胞球后施加杀伤作用。 NK细胞表面标记： CD3-/CD16 CD56，目录：一淋巴细胞亚群临床检测和科研淋巴细胞亚群检测内容和临床意义淋巴细胞亚群检测结果和正常值二淋巴细胞亚群检测试剂的选择1)IVD和RUO试剂的区分2)BD试剂的优越性3 ) BD提供的所有检测内容的相应试剂三淋巴细胞亚群检测的质量保证重要性试剂/软件定期室内质量控制，淋巴细胞亚群和临床，一、淋巴细胞亚群的临床检测1 .淋巴细胞亚群的检测内容和临床意义通过淋巴细胞亚群的检测了解不同情况下体内免疫功能状态，辅助临床疾病的

4、诊断目前，主要能够进行以下项目的检查：1)T/B/NK/CD4/CD8/CD4CD8 2 )绝对计数(tru计数)3)激活淋巴细胞的检查(cd69/hla-ddd CD4和CD8 T细胞球是免疫缺乏疾病(例如，SCID AIDS患者体内CD4细胞球亚群百分比相对下降，CD8组百分比相对上升)，自身免疫性疾病(例如SLE患者中CD8淋巴细胞相对百分比多下降，但用甾类化合物药物治疗有上升的可能性。 在急性GVHD和移植排斥中，CD8淋巴细胞所占的比例可能不在正常人的范围内)，CD4 /CD8的比值：做评估自免疫缺乏或怀疑免疫缺乏或已知免疫缺乏的患者的免疫状态，该比值是监视移植骨髓患者的CD4 /C

5、D8，以防止急性GVHD的攻击CD4 /CD8上升CD4/CD8比与肿瘤、罹患癌症患者术前CD4/CD8比低，术后比恢复正常。 癌转移发生后，CD3、CD4细胞球数明显减少，云同步CD8细胞球数明显增加，CD4/CD8比明显降低，提示罹患癌症患者晚期细胞免疫功能更低，预后更差。肿瘤晚期患者CD4/CD8比异常，可以预测患者的生存期，罹患癌症患者t细胞球亚群和SIL22R的变化和意义吕香兰1，李霞1，王巧萍1，李玲2，李艳1 3 4 2中国医科高等院校学报J Chin Med Univ第33卷第3期2004年6月癌组织中浸润淋巴细胞CD4/CD8比越低预后越差的细胞因子IL-2治疗后，浸润淋巴细

6、胞CD4/CD8比增加，prognosticvalueofthecd4/CD8ratioftumourinfiltratinglymphocytesincolorectalcancan 解决方案： Hjelmborg JB、Christensen PB、Zeuthen J、fenger c .生物标签、通用性， Winslow parrk Denmark.a.diederichsendadlnet.dk，neoadjuvantimmunotherapyoforalsquamouscellcarcinomamodulatesintratumoralcd4/光盘8 ratioandtumormic

7、roenvironment : amulticenterphaseiiclinicaltrial.timarj、Ladanyi A、第一个回归c、路由基地m、kas l 分布式照相机控制，分布式照相机控制，分布式照相机控制，分布式照相机控制，分布式照相机控制Semmelweis University，budapersity磷癌和腺癌患者的外周血和癌组织浸润淋巴细胞CD4/CD8比，reversed CD4/CD8ratiosoftumor-infiltratinglymphocytesarecorrelate accepted may 21，1999.1999 americancancerso

8、ciety，淋巴结转移后，节内CD4/CD8比发生变化，有大体积肿瘤的患者CD4/CD8比进一步降低，淋巴瘤患者细胞球穿刺标本CD4/isanincros CD8t-cellratioinlymphnodefineedleaspirationhelpfulfordiagnosinghodgkinlymphoma。 astudyof 85 lymphnodefnaswithincreasedcd4/CD8ratioosvaldohernandez是thairaoweityandsherifibrahim *地址3360 new yorkuniversity 路径部门、纽约、纽约天使城市-美国.欧

9、洲.欧洲.欧洲。 sherifibrahim *-ibra hs 01 med.NYU.edu * corresponding author，NK细胞球(CD3-CD16和/或CD56 )可以介导对一些肿瘤细胞球和细小病毒感染细胞球的细胞球毒性，下表列出了常见疾病的t 疾病t细胞球亚群CD4 /CD8 CD4 CD8类风关(活动期) SLE -或(活动期) Sjogren综合征多发性硬化症重症肌无力膜型血管球肾炎胰岛素依赖性糖尿病乙型肝炎自身溶血性贫血上呼吸道感染传染性单核细胞病(急性期)巨细胞病毒感染乙型肝炎(急性期/慢性肝炎)结核(胸水/重症外周血)麻风疟疾血吸虫病AIDS CD3 CD4

10、 CD8 CD4 /CD8肿瘤再障及粒细胞减少症、巨细胞病毒感染、血小板减少活动性特应性皮炎，2 .淋巴细胞亚群的检测结果和正常参考值目前临床上仅有淋巴细胞亚群百分率结果的BD公司与卫生部临床检测中心合作，目前全国成人淋巴细胞亚群在说明结果时，注意到NK细胞球中也有CD8阳性的细胞球。 少量的单核细胞除了能表达CD4外，还能看到与淋巴细胞的绝对对数相匹配的亚群的百分比变化。绝对对数与百分率的关系是，CD3 T细胞球正常范围为50-84% CD19 B细胞球正常范围增加518细胞球，b细胞球不变的情况下：与血球校正器并用，求出各淋巴细胞百分率乘以淋巴细胞数，求出各淋巴细胞的绝对浓度正常参考值：

11、bdsimultestimk-lymphocyte kit (逆设门法2色淋巴球表型分析)健康中国人参考范围(使用SimunlSET自动软件)，bdtritestcd4fitc/cd8pe/cd3percpwithtrucounttubes(t淋巴细胞三色分析和绝对计数)健康中国人的参考范围(使用MultiSET自动软件)、二淋巴细胞亚群的检测试剂的选择在选择临床检测用的单抗试剂时，BD公司是淋巴细胞亚群检测的试剂盒之一1.IVD和RUO试剂的区分IVD试剂是体外临床诊断用试剂(in vitro diagnosis )，通过美国FDA，生产技术完全符合GMP标准，质量得到保证，可用于临床诊断。

12、 RUO试剂只有研究用试剂(research use only )。 只能用于研究。 2、BD试剂优势BDIS的CD系列单克隆抗体： IVD产品，当RUO产品可全血直接染色、染色细胞数为3.5-9.4106抗体非特异结合水平低时，可在云同步上定径套各种方便的同型对照双色/多色分析试剂，制作预滴定结合定径套产品，简化操作， 降低误差源实验操作重现性好的试剂性价比好，三/四色试剂可通过自动/手动软件外周血直接获取多色荧光分析，获取外周血中淋巴细胞各种亚型细胞球相关信息，进行相对校正数和绝对校正数TruCOUNT无洗衣粉校正，操作简便，减少细胞球缺损质量管理，用户样品新鲜，样品放入前将抗体染色混入一

13、盏茶溶血一盏茶： FACS Lysing Solution采用定径套同型对照进行仪器校准，选择适当的取材条件(InstruSetting) PBS、PMA、蒸馏水和鞘液过滤，MultiTEST IMK 组成： fitcpercpapccd3c d8CD 45 CD4CD 1656 CD 45 cd19，BD公司提供的相关试剂：双色试剂盒：单色试剂盒，340182，imk 50测试单色试剂盒，349217 50测试三色套件： MultiTEST IMK 340503，IVD，50测试multitestimkwithtrucounttru2)绝对计数：采用BD公司的绝对计数技术，即已知数的标准微小试剂可以使用上述3色或4色的试剂，可以用手动或自动软件进行分析。 使用自动软件很方便，可以直接得到淋巴球的绝对计数。 使用手动软件时，淋巴球的绝对计数需要手动修正。TruCOUNT绝对计数： Tr