五种深海鱼提取蛋白的SDS-PAGE分析-论文

1、第 3 5 卷第 3 期 Vo1 35 N O 3 济宁学院学报 J o u r n a l o f J i n i n g Un i v e r s i t y 2 0 1 4年 6月 J u n 2 0 1 4 文章编号：1 ( )( 1 4 1 8 7 7( 2 0 1 4 ) 0 3 4 3 一( ) 3 五种深海鱼提取蛋 白的 S D S P AGE分析 刘顺湖 ，王瑞韬 ( 济宁学院生命科学与工程系，山东 曲阜 2 7 3 1 5 5 ) 摘 要：为了给深海鱼类提取蛋白质的深加工提供参考，以三文鱼、狭鳕、比目鱼、小黄鱼和带鱼五种 深海鱼为试验材料，采用酸碱法提取鱼肉中蛋 白质，通过

2、 S DS P A GE ( 聚丙烯酰胺凝胶电泳)分析，研究 了提取蛋 白质的亚基构成及其相对含量 结果表明， ( 1 )五种鱼的提取蛋白质电泳图谱差异较大，分别由 不同数量和不同分子量的亚基构成 三文鱼、狭鳕、比目鱼、黄鱼和带鱼的亚基数量分别为 1 4 、1 3 、1 3 、 1 4和 1 2个； ( 2 )五种鱼的提取蛋白质的亚基相对平均含量变异范围为 7 1 58 3 5 ，变异 系数变异范围 为 3 8 1 5 7 8 6 3 亚基相 对含量 大于 1 0 的较 大亚基 的数量和分子 量因鱼的种类而异 五种鱼的提取蛋 白 质亚基数量、分子量和相对含量均存在差异 ，说明其蛋白质构成不同，

3、因而可能有不同的营养价值 关键词 ： 深海鱼 ；提取蛋 白质 ；S DS - P A G E；亚基相对含量 中图分类号：Q5 1 文献标识码：A 中国海洋 鱼类有 1 7 0 0多种 ，经济鱼 类 3 0 0多 种，常见而产量较高的经济鱼类约 7 0多种 ，分 布于 渤海 、黄海 、东海 、南海等海域 其 中，深海 鱼类 是对水深超过 2 0 0 米 的鱼类的总称 ，深海鱼大 多 自然 生 长 ，深 海污 染 少 ，生 长时 期长 ，具 有很 高营养价值 崔芳玲 M 对三文鱼、狭鳕、比目 鱼、小黄鱼和带鱼 五种深 海鱼进 行蛋 白质含量 的比 较研 究 ， 发现 比 目鱼中蛋 白质含量高于其它

4、 四种鱼 类 王可 玲 等对 真鲷 、黑鲷、牙 鲆 、鲈和 小黄 鱼这五种鱼类进行电泳分析，确定同工酶表达的组 织特性 但对于三文鱼、狭鳕、比目鱼、小黄鱼和 带鱼五种深海鱼提取蛋白质的亚基研究尚未见报 道 鉴于此 ，本研 究通过 S D S P A G E方法分析 这五 种深 海鱼提取蛋 白质 的亚基构成及 其相对 含量 ， 为 深海鱼类提取蛋白质的深加工提供参考 1材 料与方法 1 1 试验材料与试剂 1 1 1试验材料 试验材料为三文鱼、狭鳕、比目鱼、小黄鱼和 带鱼等五种深海鱼 ，在青 岛团岛农贸市场购得 1 1 2试验试剂与仪器 试验 试 剂与仪 器 由济宁 学 院生命 科学 与工程 系

5、生命科学实验 中心提供 不连续体系 S D S - P A G E 有关试剂 的配制 ， 电泳贮存 液的配 制参 照参考生物 化 学实验 的方法 试验 所用 M a r k e r为低 分子量 蛋 白质 M a r k e r( 1 4 4 k D a 一 9 7 4 k D a )，购 买于北 京 索莱宝科技有限公司 1 2 试验 方法 1 2 1 鱼蛋 白的提取 方法 参照 陈申如 等人试验 ， ，利用酸碱法提取鱼 肉蛋 白，试验于 2 0 1 3 年 4月在济 宁学院南 四湖湿 地生物 资源研 究所进行 ，平均室温 1 5 2 0 C 其 中 蛋 白质提取 的流程如 下： ( 1 )用分

6、 析 天平 准确 称 取 4 g鱼 肉放于 研钵 中 ( 2 )将研钵中加入 1 0 m o l L的盐酸 2 m L ，研 收稽日期：2 0 1 4 一 O l 一 1 8 作者简介：刘顺湖 ( 1 9 6 0 一 )，男，山东招远人，济宁学院生命科学与工程系教授，博士，研究方向：生物蛋白质深加工 - 43- 碎 鱼 肉并转 移至烧 杯 中 按料 水 比 1 ：9 ( M ：V ， g m 1 )的 比例加入蒸馏水 ( 3 )用 1 0 m o l L N a O t t 调节 P H 到 2 3 9 ，将蛋 白液转入离心管 中 ( 4 ) 将 上述离 心管振 荡器 中振 荡 1 5 h ，

7、 达到时 间后置 于离心机 中离 心 ( 转速 为 4 5 0 0 r m i n ) ， 时 间 1 5 m i n ， 待 离心完毕 ， 将 上清液转移 到另一 只同 样 的离心管 中 ( 5 )取上清 液 ，再 次置 于 4 离心机 中离心 ( 转速为 4 5 0 0 r m i n ) ，时间 1 5 m i n 再次得到上清 液 ，即为待测 鱼蛋白 1 2 2 鱼蛋 白亚基分 析 将 脱 色 后 的 电泳 胶 带 倒 去 脱 色 液 ，放 置 在 A l p h a i m a g e r仪 器 下通 过 连接 电脑 进 行 拍 照 取 样 再用 Q u a n t i t y o

8、n e软件进行分析 1 2 3数据分析 利用 Q u a n t i t y o n e 软件 对 电泳 图片进 行分 析整理数据 ，用 E x c e l 软件进行描述性 统计分析 ， 进行平均值和变异系数 的计算 变异系数的计算公 式为： C V ： 羔 1 o 0 ，其 中 S公式为 S 2试验结果分析 2 1五种 鱼提取蛋 白的 S D S P A G E电泳 图谱 五种鱼提取蛋 白质 的电泳 图谱 见图 1 ，蛋 白质 亚基构成见表 1 图 1五 种鱼提取蛋 白质电泳 图谱 注 ：序 号 1 5分别代 表三文鱼 、狭鳕 、比 目鱼 、 黄鱼和带鱼；S 1 $ 1 4为蛋白质亚基编号

9、表 1五种鱼提取蛋 白质亚基及其分子量 ( K D a ) 一 4 4一 由 图 l 和 表 l 可 见 ，五 种鱼 提 取蛋 白的 电泳 图谱存在较大 差异 其 中，三 文鱼有 1 4个亚 基 ， 亚 基 的 分 子 量 变 异 范 围 为 1 2 5 8 9 2 0 8 K D a ： 狭鳕 有 l 3个亚 基，亚基 的分子 量变 异范 围为 l 4 6 5 9 6 7 2 K D a ：比 目鱼有 1 3 个 亚基 ， 亚基 的分 子量变异范围为 l 2 6 2 9 9 4 7 K D 黄鱼有 l 4 个亚 基 ， 亚基的分子量变异范围为 l 0 8 8 1 0 0 8 8 K D 带

10、鱼有 1 2个 亚基，亚 基 的分子 量 变异 范 围为 1 2 4 8 9 9 4 7 K D a 由此推断 ，五种鱼 的蛋白质种 类不同，其营养价值可能存在差异 2 2 五种鱼提取 蛋白的亚基相对含量 表 2 五种鱼提取蛋白质亚基的相对含量 ( ) 由表 2可见 ，五种 鱼提取 蛋 白质 亚基 的平均 相对含量差异较小，变异范围为 7 1 5 8 3 3 ， 其 中，带鱼 的提取 蛋 白质 亚基平均 相 对含量 最 高 ( 8 3 3 )，三文鱼和黄鱼的最低 ( 均为 7 1 5 ) ；但 变异系数差异较大 ， 变异范 围为 3 8 1 5 7 8 6 3 ， 其 中，带 鱼 的最低 (

11、3 8 1 5 )， 比 目鱼 的最 高 ( 7 8 6 3 )就每一种鱼而言，各个亚基的相对含 量差异较 大 三 文 鱼 各 亚 基 相 对 含 量 变 异 范 围 为 2 6 1 4 7 ，有 4个亚基 的相 对含量大于 1 0 ，7 脬 个亚基的相对含量低于 5 ，较高相对含量的亚基 分 子 量集 中在 l 3 1 4 1 6 1 5 K D a 狭 鳕 亚基 相 对 含量变异范围为 2 8 1 4 5 ，有 4 个亚基的相对 含量大于 1 0 ，3个亚基的相对含量低于 5 ，较高 相对含 量的亚基分子 量集中在 1 4 6 5 1 9 1 7 K D a 比 目鱼亚基相对含量变异范围为

12、 2 3 2 5 7 ， 有 2 个亚基的相对含量大于 1 0 ，5个亚基的相对 含量低于 5 ，较高相对含量 的亚基分子量集中在 1 9 2 8和 1 2 6 2 K D a 黄鱼亚基相对含量变异范围为 2 7 1 3 7 ，有 3 个亚基 的相对含量大 于 1 0 ，5 个亚基 的相对 含量低于 5 ， 较 高相对含量 的亚基分 子量集中在 3 4 8 8 4 1 3 4 K D a 带鱼亚基相对含量 变异范围为 3 9 1 6 0 ，有 3 个亚基的相对含量 大于 1 0 ，2个亚基的相对含量低于 5 ，较高相对 含量 的亚基分子量集 中在 2 0 8 9 2 5 6 9 K D a 3

13、讨 论 通 过对 五种深海 鱼提取 蛋 白质 的 S D S P A G E分 析获得蛋 白质亚基谱 带，这五种鱼 的蛋 白质亚基谱 带共 同点 在于 蛋 白质亚 基在 谱带 中从 高分子 量 到 低分子量分布均匀，即均存在高分子量的亚基，也 存在 低分 子量 的亚 基 ；但 亚基 的相 对含 量差 异 较 大 ，每种鱼都有相对含量较 高的亚 基 ( 大于 1 0 )， 也有相对含量较低 的亚基 ( 低于 5 ) 对于每一种 鱼而言 ，这些亚基 的分子量 不同 这五种鱼 的谱 带 不同点在于每种鱼的谱带含有的亚基数量不同，亚 基的分子量不 同，亚基 的相对含量 也不同 由此 可 见 ，这五种鱼

14、 的蛋 白质种类及构成不 同，因而 五种 鱼的蛋白质营养价值不同， 需要分别进行不同的深 加 工，为此，需要对五种鱼的提取蛋 白质分子构成 和营养价值继续研究，以便开发出相应的新产品， 满 足消费者的更多需求 标 者为生命科 学与工程系2 0 1 j 届生物工程 专业毕业生 参考文献： 1 常志娟 ， 张培旗 酶解海洋生物蛋 白的生物活性物质及开发功 能食品的前景 J 食品工业 ， 2 0 1 0 ， 6 ： 6 3 6 6 2 李莹 深海鱼资源的深层次开发 J j 中国油脂， 2 0 0 1 ， 2 6 ( 4 ) ： 4 3 44 3 邓君明， 麦康 森， 艾庆辉 ， 张文兵， 王小洁 与

15、类蛋白质周转代 谢 的研究进展 J 中国水产科学， 2 0 0 7 ， 1 4 ( 1 ) ：1 6 5 1 7 2 4 崔芳玲 五种深海鱼类蛋 自含 量的比较研 究 D 曲阜市： 济宁 学院学士毕业论文， 2 0 1 2 5 王可玲， 尤锋 ， 徐成 ， 吴谡琦 5种海水鱼同工酶表达的组织特 性及 其电泳 的初步分析 J 海洋与湖沼 ， 1 9 9 6 ， 2 7 ( 6 ) ：6 2 6 6 3 2 6 陈钧辉， 李俊 ， 张冬梅 ， 等 生物化学实验 ( 第四版) M 北 京 ： 科学出版社， 2 0 0 8 7 陈申如 ， 张其标 ， 倪 辉 酸法提取鲢鱼鱼肉蛋 白质技术的研究 J 海

16、洋水产研究 ，2 0 0 4 ， ( 5 ) ：6 1 6 4 8 刘安军， 王莹 ， 等 鳕鱼盐溶蛋 白提取条件优化及其在鱼糜制 品加工中的变化 J J 现代食品科 技 ， 2 0 1 0 ， 2 6 ， ( 1 0 ) ： 1 1 0 7 9 李建 中阁 敏菪琛 ， 等 四倍体鱼促性腺激素a亚基 c D N A的克隆 与序列分析 II 湖南师范大学 自然科学学报， 2 0 0 7 ， 3 0 ( 3 ) ： 8 4 8 8 ( 责任编辑 尹春光) Ana l y s i s o n t he Ex t r a c t e d Pr o t e i n f r o m Fi v e Spe

17、c i e s o f De e p - - s e a b y S DS - PAGE LI U S h u n h u ， W ANG Ru i t a o ( D e p a r t m e n t o f L i f e S c i e n c e a n d E n g i n e e r i n g , J i n i n g U n i v e r s i t y ， Q u f u 2 7 3 1 5 5 ， C h i n a ) Ab s t r a c t ：I n o r d e r t o p r o v i d e r e f e r e n c e f o r d

18、 e e p p r o c e s s i n g o f d e e p - fis h e x t r a c t e d p r o t e i n ，t h e s u b u n i t s c o n t e n t a n d c o mpo s i t i o n s o f e x t r a c t e d p r o t e i n f r o m fiv e d e e p -s e a fis h wh i c h i n c l u d e d s a l mo n， p o l l o c k， h a l i b u t ， y e l l o w c r o a k e r a n d t r i c h i u r u s j a p o n i c a s b y S D S - P A G E T h e r e s u l t s s h o w e d t h a t ( a ) t h e r e e x i s t e d v a r i o u s s u b u n i t s w i t h a mo u n t s a n d m o l e c u l a r i n e l e c t r o p h o r