免疫检验实验室常用仪器设备的使用和维护.ppt

1、免疫检验实验室常用仪器设备的使用和维护,湖南省临床检验中心 王松华,加样器-类型,单道连续可调式移液器 多通道连续可调式移液器 单道连续移液器 单道移液管配合使用的移液器,加样器-使用及注意事项,根据所需取液量选择 相应的移液器及吸头， 连续可调式移液器不 可在无吸头时使用， 吸头有液体时不可平 放或倒置。,加样器-型号和取液范围,型号所用量程范围（L） GILSON eppendorf P10 0.5 -10 0.5 -10 P20 2 -20 2 -20 P100 20 -100 10 -100 P200 20 -200 20 -200 P1000 200 -1000 100 -1000,

2、P型移液器的应用范围,P2，P10: 超微量计量及移液，应用于DNA定序及酶分析等。 P20，P100，P200和P1000应用于一般水溶液、酸、硷的计量和移液。 P5000和P10ML 大体积移液和计量。,P型移液器技术指标(1),型号 容量 准确度（标准误差） 精度（重复性）2 (L) 绝对误差(L) 相对误差(%) 标准误差(L)相对离差(%) P2 最小 0.2 0.024 12 0.012 6 0.5 0.025 5 0.012 2.50 最大 2 0.030 1.5 0.014 0.70 P10最小 1 0.025 2.5 0.012 1.25 5 0.075 1.5 0.030

3、0.60 最大 10 0.10 1 0.040 0.40 P20 最小 2 0.1 5.0 0.03 1.50 5 0.1 2.0 0.04 0.80 10 0.1 1.0 0.05 0.50 最大 20 0.2 1.0 0.06 0.30,P型移液器技术指标(2),型号 容量 准确度（标准误差） 精度（重复性）2 (L) 绝对误差(L) 相对误差(%) 标准误差(L)相对离差(%) P100 最小 20 0.35 1.8 0.10 0.5 50 0.4 0.8 0.12 0.24 最大 100 0.8 0.8 0.15 0.15 P200最小 50 0.5 1 0.2 0.40 100 0.

4、8 0.8 0.25 0.25 最大 200 1.6 0.8 0.30 0.15 P1000 最小 200 3.0 1.5 0.6 0.3 500 4.0 0.8 1.0 0.2 最大 1000 8.0 0.8 1.5 0.15,P型移液器技术指标(3),型号 容量 (L) 不准确度(%) 不精密度(%) P10 最小 0.5 5.0 2.8 1 2.5 1.8 最大 10 1.0 0.4 P20最小 2 5.0 1.5 最大 20 1.0 0.3 P100 最小 10 3.0 1.0 最大 100 0.8 0.2 P200 最小 20 2.5 0.7 最大 200 0.6 0.2 P1000

5、 最小 100 3.0 0.6 最大 1000 0.6 0.2,加样器-使用及注意事项,一个完整的移液循环，包括吸头安装容量设定预洗吸头吸液放液卸去吸头等六个步骤。每一个步骤都有需要遵循的操作规范。,枪头（吸液嘴）的装配 在将枪头（pipette tips）套上移液枪时，很多人会使劲地在枪头盒子上敲几下，这时错误的做法，因为这样会导致移液枪的内部配件（如弹簧）因敲击产生的瞬时撞击力而变得松散，甚至会导致刻度调节旋钮卡住。正确的方法是将移液枪（器）垂直插入枪头中，稍微用力左右微微转动即可使其紧密结合。枪头卡紧的标志是略为超过O型环，并可以看到连接部分形成清晰的密封圈。,加样器-使用及注意事项,加

6、样器-使用及注意事项,加样器-使用及注意事项,在调整取液量的旋钮时，不要用力过猛，并应注意计数器显示的数值不要超过其可调范围。,加样器-使用及注意事项,量程的调节 在调节量程时，如果要从大体积调为小体积，则按照正常的调节方法，逆时针旋转旋钮即可；但如果要从小体积调为大体积时，则可先顺时针旋转刻度旋钮至超过量程的刻度，再回调至设定体积，这样可以保证量取的最高精确度。 在该过程中，千万不要将按钮旋出量程，否则会卡住内部机械装置而损坏了移液枪。,加样器-使用及注意事项,把按钮压至第一停点垂直握持 加样器，使吸嘴浸入液样中， 浸入液体深度视型号而定： P2和P10 1mm P20和P100 2-3mm

7、 P200和P1000 2-4mm P5000 3-6mm P10ML 5-7mm,加样器-使用及注意事项,吸取液体时应缓慢匀速吸取，避免液体溅到移液器头上；打出液体后拇指应缓慢松开按钮，避免液体回吸。 前进式 倒退式,两种移液方法 前进式移液法：用大拇指将按钮按下至第一停点，然后慢慢松开按钮回原点。接着将按钮按至第一停点排出液体，稍停片刻继续按按钮至第二停点吹出残余的液体。最后松开按钮。 倒退式移液法：此法一般用于转移高粘液体、生物活性液体、易起泡液体或极微量的液体，其原理就是先吸入多于设置量程的液体，转移液体的时候不用吹出残余的液体。先按下按钮至第二停点，慢慢松开按钮至原点。接着将按钮按至

8、第一停点排出设置好量程的液体，继续保持按住按钮位于第一停点（千万别再往下按），取下有残留液体的枪头，弃之。,加样器-使用及注意事项,加样器-使用及注意事项,操作时要慢和稳，吸嘴浸入液体深度要合适，吸液过程深度尽量保持不变； 改吸不同液体、样品或试剂前更换新吸嘴 发现吸嘴内有残液时必须更换；新吸嘴使用前应先质检。 为防止液体进入移液器套筒内，注意以下几点：压放按钮时保持平稳；移液器不得倒转。 使用了酸或有腐蚀蒸气的溶液后，最好拆下套筒，用蒸馏水清洗活塞及密封圈。,加样器-使用及注意事项,连续可调式移液器在取样加样过程中应注意 移液嘴不能触及其他物品，以免被污染； 移液嘴盒（架子）、废液瓶、所取试

9、剂及加样的样品管应摆放合理，以方便操作过程、避免污染为原则。 连续可调式移液器在使用完毕后应置于以液器架上，远离潮湿及腐蚀性物质。 在取液之前，所取液体应在室温（15-25C）平衡；液体温度与室温有异时，将吸嘴预洗多次再用；移液温度不得超过70。 如不使用，要把移液枪的量程调至最大值的刻度，使弹簧处于松弛状态以保护弹簧。,如何判断移液器是否漏气呢？这就需要我们对它做一个简单的测试，首先，取一个透明的容器，装上水，将需要测试的移液器装上吸头，吸上水，如果是P2、P10、P20、P100、P200的移液器，请将吸头浸入液面12毫米，静待20秒，观察吸头内部液面是否下降，如果下降了，就说明您手中的移

10、液器出现了漏气的情况；如果是P1000、P5000、P10ML的移液器，请将吸头朝下悬垂20秒，观察是否有液体下滴，如果有，说明您手中的移液器也出现了漏气的情况。 如果漏液，原因大致有一下几方面： 1、枪头是否匹配； 2、弹簧活塞是否正常； 3、如果是易挥发的液体（许多有机溶剂都如此），则可能是饱和蒸汽压的问题。可以先吸放几次液体，然后再移液。,加样器-使用及注意事项,加样器-清洁维护,清洁频率：日维护、月（季）维护 严重污染时 方法 1一般维护可用中性洗涤剂（如洗餐具用的洗涤灵）清洁，或者用60%的异丙醇。然后用蒸馏水反复洗涤，去除洗涤剂或异丙醇，晾干。清洁后活塞处可使用一定量的润滑剂。 2

11、如果有液体进入加样器内的严重污染，可以将加样器拆开后进行清洁，具体拆开步骤参照加样器说明书（不同的加样器的拆开方式有所不同）。 3高压消毒，有的加样器的吸管部分可高压消毒（121及1巴压力下消毒20分钟），如Eppendor的Research单道可调加样器。但消毒时不可超温超时，也不能挤压放置，以免造成变型。 4各区（试剂准备、样本提取、扩增和产物检测）的加样器应有各自的标识，清洁和消毒 时，应分别处理。,加样器-清洁维护,加样器-校准,校准方式 计量局 厂家 自校 时间 视使用频率定(6个月-1年）,加样器-校准,型号 P1000 出厂编号 L26069L 发证日期 2002-7-4 本移液

12、器已按照国际ISO标准，以吉尔森原厂零配件进行维修及校准， 达到吉尔森产品说明书规定的性能指标，并自发证日起免费担保六个月 （易损零配件不包括在内）。 测定次数 4 次 低点校准 设定值 200 ul 平均容积 198.6 ul 绝对误差 - 1.4 Ul 相对误差 -0.7 % 标准离差 0.101 ul 相对离差 0.202 % 高点校准 设定值 1000 ul 平均容积 999.37 ul 绝对误差 - 0.63 Ul 相对误差 -0.063 % 标准离差 0.783 ul 相对离差 0.078 % 更换部件 O型密封圈 测试环境: 温度 25 C 湿度 38 % 测试液体： 蒸馏水 测

13、试用吸嘴：吉尔森Diamond标准盒装吸嘴,加样器的校准,校准环境和用具要求： 室 温：2025，测定中波动范围不大于0.5。 电子天平：放置于无尘和震动影响的台面上，房间尽可能有空调。称量时，为保证天平内的湿度（相对湿度60-90%），天平内应放置一装有10 ml蒸馏水的小烧杯。 小烧杯： 510 ml体积。 测定液体：温度为2025的去气双蒸水。,选定校准体积： 拟校准体积； 加样器标定体积的中间体积； 最小可调体积（不小于拟校准体积的10%）。 如为固定体积加样器，则只有一种校准体积。 校准步骤： 将加样器调至拟校准体积，选择合适的吸头； 调节好天平； 来回吸吹蒸馏水3次，以使吸头湿润，

14、用纱布拭干吸头 垂直握住加样器，将吸头浸入液面23 mm处，缓慢（13秒）一致地吸取蒸馏水；,加样器的校准,将吸头离开液面，靠在管壁，去掉吸头外部的液体；将加样器以30角放入称量烧杯中，缓慢一致地将加样器压至第一档，等待13秒，再压至第二档，使吸头里的液体完全排出； 记录称量值； 擦干吸头外面； 按上述步骤称量10次； 取10次测定值的均值作为最后加样器吸取的蒸馏水重量，按附表所列蒸馏水Z因子计算体积。按校准结果调节加样器。,加样器的校准,离心机,使用离心机首重安全，离心力失控可能造成很大的破坏。因此要注意离心管是否平衡，转速是否超过设置，转子是否有腐蚀等。,离心机-使用方法,离心机放置： 水

15、平坚固的地板或平台上，以免离心时造成机器震动 打开电源开关，按要求装上所需的转头，将预先平衡好的样品放置于转头样品架上（离心筒须与样品同时平衡），关闭机盖。 按功能选择键，设置各项要求：温度、速度、时间、加速度及减速度，带电脑控制的机器还需按储存键，以便记忆输入的各项信息。 待离心机完全停止转动时打开机盖，取出离心样品，用柔软干净的布擦净转头和机腔内壁，待离心机腔内温度与室温平衡后方可盖上机盖。,离心机-注意事项,外接电源系统的电压要匹配，并要求有良好的接地线 开机前应检查转头按装是否牢固，机腔有无异物掉入 更换转头或清洁转头时，应注意安装牢固。 一人负责到底。 样品应预先平衡。 离心机运行时

16、，离心机周围30cm范围内不能有人和危险物品。 挥发性或腐蚀性液体离心时，应使用带盖的离心管，并确保液体不外漏以免腐蚀机腔或造成事故。,离心机-注意事项,易燃易爆以及易与其他物质发生反应的物质不能离心。 在没有相应的防护措施时，不能离心有毒的、放射性的物质或病原微生物。 离心机运行时不可人为地打开盖子。 如果转头和盖子有可见的腐蚀或磨损的痕迹，则应立即停止使用。 使用的玻璃或塑料离心管应能承受相应的离心力并大小合适。非金属转头不可用紫外照射。 如果被离心的物品密度大于说明书的规定范围，应根据RCF计算公式，减小离心体积。,离心机-维护和清洁,清洁频率： 日维护、月（季）维护、严重污染时 清洁方

17、法： 中性洗涤液清洁，然后用清水清洁。 必要时使用含0.5%有效氯的消毒液擦拭污染部位，然后用清水擦洗。 离心机腔时动作要轻，以免损坏机腔内温度感应器。 使用消毒液处理时，温度不可超过25，时间不可超过规定时间。 可以用高压消毒的转头，应在清洗后，121 消毒20分钟，转头务必平放，并不受挤压，以免变形。,洗板机,洗板机选购应注意以下几个方面 1关键指标：残留量2uL/孔。 这是洗板机的一个关键指标，残留量大的洗板机其洗板效果相对较差。目前大多数洗板机的残留量为5uL，设计良好的洗板机可达2uL。 2能否提供可选择的洗板环境 建议选择具有底部冲洗、两点吸液等功能的仪器；因为底部冲洗有利于减小微

18、孔板底部的干扰性吸附；两点吸液可大大降低微孔液体残留量。这对改进洗涤效果很有效。而洗板次数、条数、浸泡时间等是洗板机的基本参数，一般均可满足。,3考察仪器的可靠性与洗涤效果的可靠性： 一是仪器自身的可靠性，即仪器设计经得起长时间的使用，保证仪器在使用寿命期内可以工作，包括显示、精确运动等，建议用户考查仪器生产厂商的技术与生产实力；洗涤效果的可靠性，即洗得干净，真正达到代替手工洗涤、甚至优于手工洗涤的目的，建议用户咨询使用该仪器的上级单位或典型用户。 4售后服务是否及时、价格是否合理： 洗板机是使用率相对较高的仪器，单从运动角度对比，其频率是酶标仪的几十倍，有的医院使用两年就报废，主要原因在于没

19、有售后服务或售后服务价格太高，有的仅因为缺少一个配件而使整机报废，十分可惜。及时的售后服务与相对合理的服务价格，是购买洗板机应考虑的因素。,5配件是否充分 ； 是否可以提供常用的、可替换的配件。 6是否符合中国国情：对国产试剂盒要有兼容性与扩展性； 兼容性主要是对于国内不同规格、尺寸略有差异的微孔板的兼容，仪器应具有对微孔板的位置调节功能，适应国内试剂的实际情况。扩展性主要是为了适应新出现的一些应用情况，如上海科华新增加的86式的微孔板，许多洗板机无法清洗。由于国内生产酶标试剂的厂商有一百多家，各生产厂商所使用的酶标板规格略有差异，还存在大量的48孔、32孔酶标板，使用进口洗板机往往不能达到好

20、的效果。洗板机位置调节功能，并配有适应不同板条孔板的附件。 7 人机界面是否友好，最好是中文显示。,酶标仪,酶标仪的使用注意事项1. 工作环境酶标仪是一种精密的光学仪器，因此良好的工作环境不仅能确保其准确性和稳定性，还能够延长其使用寿命。a.仪器应放置在无强磁场和干扰电压的位置。b.仪器应放置在噪音低于40分贝的环境下。c.为延缓光学部件的老化，应避免阳光直射。d.操作环境温度应在15C40C之间，环境湿度在15%85%之间。e.操作时电压应保持稳定。f.操作环境空气清洁，避免水汽、烟尘。g.保持干燥、干净、水平的工作台面，以及足够的操作空间。,2.操作注意事项a.使用移液器加液，移液枪头不能

21、混用。b.洗板要干净，避免交叉污染。c.严格按照试剂盒的说明书操作，反应时间准确。d.请勿将样品或试剂洒到仪器表面或内部，操作完成注意做好清洁工作。e.不要在测量过程中关闭电源。f.对于因试剂盒问题造成的测量结果的偏差，应根据实际情况及时修改参数，以达到最佳效果。g.使用后盖好防尘罩。出现技术故障时应及时与厂家联系，切勿擅自拆卸酶标仪。,酶 标 仪 主 要 技 术 指 标,酶标仪性能评价与鉴定方法,滤光片波长精度检查及其峰值测定 1.方法及其衡量的标准：用高精度紫外可见分光光度计（波长精度0.3 nm）对不同波长的滤光片进行光谱扫描，检测值与标定值之差即为滤光片波长精度，其差值越接近于零且峰值

22、越大表示滤光片的质量越好，波长精度越高。 2.理论基础：酶标仪的滤光片质量好坏，直接影响仪器的灵敏度高低，而滤光片的质量又是以其波长精度及其峰值指标来衡量的，因此滤光片波长精度及峰值是衡量酶标仪的重要参数之一，通过检查可以发现滤光片的波长标定值与实测值的符合程度，可以发现滤光片的质量是否符合要求。,滤光片波长精度检查,灵敏度和准确度的监测 方法1 ： 灵敏度：精确配制6 ug/ml重铬酸钾（干燥）溶液（0.05 mo1L硫酸溶解），加入200 ul重铬酸钾溶液于小孔杯中，以0.05 mo1L硫酸溶液作空白，于450 nm（参比波长650 nm）测定，其吸光度应 0.01 A。 准确度：准确配制

23、：1mmo/L对硝基苯酚（提纯品）水溶液，然后以10 mmo1L氢氧化钠溶液25 倍稀释之，加入200 ul稀释液于小孔杯中，以10 mmo1L NaOH溶液作空白，于405 nm（参比波长650 nm）检测，其吸光度应在0.4 A（0.3950.408 A）左右。,方法2： 选用405，492和620 nm波长，以空气为参比，分别测定标称值为05和10A的光谱中性玻璃滤光片，用专用测试板代替酶标板，按仪器说明连续测定3次，按下式计算准确度：AA13(A、+A。+A3)A：(A：为标准值)。,通道差与孔间差检测 1方法及其表达方式： 通道差检测：取一只酶标板小孔杯（杯底须光滑、透明、无划痕、无

24、污染）以酶标板架作载体，分别加入三种不同浓度的甲基橙溶液 200 ul先后置于8个通道的相应位置，蒸馏水调零，采用双波长（测定波长490nm，参比波长630或650nm，以下均相同）连续测三次，观察其不同通道之间测量结果的一致性可用极差值来表示其通道差。 孔间差的测量：选择同一厂家、同一批号酶标板条（8条共96 孔）分别加入200 ul甲基橙溶液（吸光度调至0.065 0.070 A）先后置于同一通道，蒸馏水调零，采用双波长检测，其误差大小用1.96s衡量。,2理论解释：为了提高酶标仪的检测速度，根据 96孔酶标板的规格特点，目前大多数厂家的中、高档酶标仪均采用8通道的检测器（部分中、低档酶标

25、仪目前仍采用单通道）因而它们每个通道的检测能力是不尽相同的，它是仪器内部的固有误差，与所测溶液浓度成正相关（不同检测器对不同浓度溶液的响应能力不同），所以通道差是衡量酶标仪性能良好与否的重要指标之一；其衡量指标用极差表示，这与厂家推荐的指标是一致的；极差值越接近于零，通道差越小，说明同一样品于不同通道检测结果的一致性越好。,由于不同厂家、不同批号酶标板之间的质量差异，导致孔与孔之间的检测结果也不完全一致，这与水平光路光度计的比色皿质量是否符合要求一样，因此认为孔间差是仪器外部的固有误差，只有准确测知孔间差，并对结果作出相应的校正，才能使检验结果更符合实际情况、更准确可靠；采用的评价指标（士1.

26、96 s）也是有利于结果校正的。另外，在设计孔间差测量的操作方法上，将200 ul甲基橙溶液吸光度调至 0.0650.070 A，是充分考虑到加样器的误差，其目的是使加样误差控制在仪器的分辨率（0.01 A）以下，这样也就避免了孔间差结果不因加样误差而导致假性增高。,零点飘移 方法1：取八只小孔杯，分别置于八个通道的相应位置，均加入200 ul蒸馏水并调零，采用双波长或单波长（490 nm）每隔30 min测定一次，观察8个通道 4h内的吸光度变化。其与零点的差值即为零点飘移。 方法2:选用492nm波长，在吸光度00A处，测定标称值为10A的光谱中性滤光片(测定操作按仪器说明进行)，记录仪器

27、示值或均值，10min后再次记录仪器示值或均值，前后两次测定值之差不应超过0005A。,精密度评价 方法1：每个通道三只小杯，分别加入200 ul高、中、低三种不同浓度的甲基橙溶液，蒸馏水调零，采用双波长作双份平行测定，每日测定两次，连续测定20天。分别计算其批内精密度、日内批间精密度、日间精密度和总精密度及相应的CV值。 方法2：选用405，492和620 nm波长在酶标板第一排加注空白溶液，第二排加入浓度为200rigml的重铬酸钾溶液，重复测定5次。记录每次测定的第二排吸光度值，取第二排任一孔吸光度值与各次对应孔吸光度值。按下式计算重复性：,三种浓度甲基橙溶液490 nm处精密度评价结果

28、(方法1),线性测定 方法1：精确称取甲基橙配制5个系列浓度的溶液，采用双波长平行检测8次求其均值。计算回归方程、相关系数r及标准估计误差Sy,x，并用1.96 Sy,x表示样品的95测量范围。 方法2 ：选用540nm波长，将标称值o5，10A中性滤光片分别放入专用测试板样本位置中，以空气为参比，各重复测定3次；然后将以上两片中性滤光片叠加后置于专用测试板的同一孔位中，重复测定3次。线性误差： 式中A1为第一片中性滤光片吸光度均值，A：为第二片中性滤光片吸光度均值，A1，2为两片中性滤光片叠加后的吸光度均值。,双波长评价 方法：在运用酶标仪检测样品时，由于溶液中的小气泡、杯底的水纹印及划痕、

29、小孔杯之间透明度的差异等等，这些都是仪器测定过程中最常见的干扰因素，而标本中的干扰组份（如溶血、黄道）因洗涤而对测定结果影响则较小，双被长评价方法为：取同一厂、同一批号酶标板条（每个通道 2条共24孔）每孔加入200 ul甲基橙溶液（吸光度调至0.0650.070 A）先后于8个通道分别采用单波长（490 nm）和双波长（测定波长490 nm、参比波长630 650 nm）进行检测，计算单波长和双波长测定结果的均值、离散度，比较各组之间是否具有统计学差异以考察双波长清除干扰因素的效果。,为了保证不同仪器之间测定结果的一致性，在测定时应采用双波长法，而且必须采用双波长，这样既能消除干扰组份和干扰

30、因素的影响，又能避免因仪器测量原理不同而造成仪器之间结果的不一致性。 测定速度的检定 选用492nm波长，放人96孔酶标板进行测定，用秒表计测仪器打印出全部数据的时间。,一、酶标仪的选择面对类型如此众多的酶标仪，实验室在选择时往往有难以适从的感觉。一般来说，用于酶免疫测定比色的酶标仪可分为普通酶标仪，多功能全自动酶标仪和全自动酶免疫分析系统等，普通酶标仪的功能基本上相当于一个微板孔比色计，而多功能全自动酶标仪除了有微孔板比色功能外，还有酶标动力学，紫外乃至凝集等多种检测功能；全自动酶免疫分析系统则有试剂“开放”和“限定”之分，所谓试剂“开放”是指不同品牌的ELISA试剂均可用于该仪器，而试剂“

31、限定”则必须使用仪器专用的酶免测定试剂。实验室在选择酶标仪时，一般应遵循这样几条原则：,1根据工作需要去选择。切忌刻意去求功能多，因为一则如果仪器功能过多，易出故障，二则有些功能如酶标动力学或凝集等，可能根本就用不上；如果拟购置的酶标仪主要是用于定性测定，则不必要求完美的定量所需的软件系统。至于全自动酶免疫分析系统则对工作量比较大的血站或大型医院较为适用，对于日常工作量不太大的实验室，就无必要。2根据酶标仪的性能去选择。反应酶标仪性能的指标主要有测定波长范围，滤光片配置，检测速度，吸光度范围，线性范围，分辨率，准确度，精密度等。,3根据自己实验室的财力去选择。酶标仪品种类型多，由于性能不一，价

32、格自然也就相差较大，实验室可根据自己的财力去选择性能价格比较为合适的酶标仪。4根据售后服务去选择。实验室仪器买了以后，就跟我们家里使用的家用电器一样，在使用过程中及使用一段时间之后，很可能就会有保修或维修方面的问题，因此一定要选择售后服务好的公司的酶标仪。5根据实验室人员的外语水平去选择。进口酶标仪现有不少已使用中文人机对话，对于英语上有困难的实验室，应尽可能选用此类酶标仪。,全自动酶免分析系统,全自动酶免分析系统的技术发展与现状 在90年代初期，由于以聚合酶链反应（PCR）技术为代表分子生物学水平技术的发明，人们纷纷预测，酶免试验将被更高灵敏度、数百万级信号放大的、病原体水平检测的核酸放大试

33、验（NAT）所取代。但由于酶免试验具有操作简便、技术可靠，特别是，90年代末期ELISA检测系统的灵敏度和特异性以及检测过程的自动化得到了显著提高与完善，因此，酶免试验再也没人怀疑将被淘汰，而成为传染病血清学标志物（如肝炎、艾滋、致畸病原Torch）、肿瘤标志物及内分泌等各种临床免疫指标检测的主导技术。一方面，侧重酶免试验的光学检测系统酶标仪，到90年代末已达到至臻完美状态；随着纳米技术微量加样的发展，酶标仪将很容易由检测传统的96微孔板，转化为检测384微孔板，甚至1536微孔板，达到更高的检测效率。,另一方面，侧重酶免试验处理过程技术酶标分析系统，到90年代末已充分发展；随着多任务软件，如

34、O/S2，Unix及Windows NT等操作平台的完善，满足现代实验室GMP/GLP要求的全自动酶标分析系统，正在世界各种实验室普及。 目前，由于全面实验室自动化具有标准化、高效率、高质量的自动化与网络化特征，正成为临床实验室发展的新趋势。 酶免试验自动化与网络化的时代已经到来，全面实验室自动化不再是一种模型。,样本处理自动化根据美国临床病理学院（CAP）的调查报告，实验室误差（ERROR）产生原因的79%因素，是因为实验过程中样本处理不当造成的。 酶免试验的样本处理必须基于批量化操作96孔酶标板。为保障正板内各孔标本孵育时间最小差异，必须采用8通道或12通道快速加样。因此全自动样本处理机是

35、提高实验精度、提高实验效率和避免人为误差和差错的关键设备。第一代多功能（Robotic）样本处理机，是由瑞士哈美顿（HAMILTON）公司开发于1985年上市的Microlab 2200。这是一台基于机械臂运动和具有管路系统的稀释分配器（Diluter）原理，采用8或12根固定距离的特弗隆探针，由单任务的BASIC程序控制的样本处理机。,1989年，哈美顿公司独树一帜，开发上市了以专利技术的可抛弃塑料活塞注射器（Micro-syringe）为原理的，无管路批量样本处理机Microlab AT,试图满足更快的加样（12针）、无污染地加样、主动抛弃可能失去精度的加样针、摒弃不可预测的管路污染与稀释

36、等实验室需求。 1997年，AT系列增加改进为Microlab AT plus 2型。这种原理的样本处理机，具有全面的标本质量系统、加样质量保障系统。样本处理自动化的最新技术进步，是以瑞士哈美顿公司于2000年8月推出的，第五代斯达尔全自动随机式批量样本工作站为标志的，这是世界上第一台符合2003年实施的IVD标准的全自动样本处理工作站。,其主要技术特征是：采用专利的压缩导入-O形环扩张（CO-RE）核心技术，实现标准加样的智能化、自动化； 理想的加样体系气动置换加样原理ADP的实现； 实现任意加样动作编程同时使用不同的加样头（抛弃型加样尖和永久型探针）； 实时实现液体双传感（C-P）技术；

37、全方位液面传感应用，特别是解决了酶标板的液面监测世界难题； 活性洗涤工作站进行平行洗涤加样针，是提高加样速度的关键； 模块化、无管路、独立加样通道系统416通道，用户可以根据工作量进行升级； 智能增强的容错纠错系统; 实现全过程控制（TPC），全部步骤都在监控下运行，每个步骤都形成记录文件（TRACE），甚至对加样体积质量进行校验、备份，实现全自动GMP/GLP。,全自动酶标分析仪酶免试验全过程全自化的意义，并非仅仅限于降低劳动强度、减少人为的误差。全自动酶标分析系统可以普遍地、显著地提高酶免试验的特异性，如费米系统可以提高乙肝表抗的特异性由常规设备的87%到91%，丙肝抗体由常规设备的89.

38、1%提高到97.4%。此外，多中心的评价（Multi-center Clinical Trail）实验证明（1-3），费米全自动酶免分析系统也可以显著地提高国产试剂的灵敏度，如费米系统可以将乙肝表抗的灵敏度由常规设备的92%提高到93%，丙肝抗体的灵敏度由常规设备的93.7%提高到98.7%。第一代全自动酶免分析系统基本特征是单/双针加样系统与酶标板处理系统一体化，多数孵育位置少于4块板。由于加标本将占用较长时间（单针每板需15分钟，三块板通常需45分钟完成加标本工作），因此，第一代全自动酶免分析系统，被认为是“节约劳动力而不提高效率”。,第二代全自动酶免分析系统的基本技术特征为非常任务和单一

39、轨道。由于不能同时地处理二种过程（如洗板的同时，不能加试剂等），因此，其工作任务表（或时间管理器TMS）“堵车”现象仍无法避免，而造成处理过程不能严格执行，试验完成时间延长，或单纯执行试验时间表完成实验动作而不论试验效率。不含标本加样装置全自动酶免分析系统，通常也俗称“后处理系统” 第三代全自动酶免分析系统的基本特征是采用多任务、多通道，完全实现平行过程处理。典型产品为瑞士哈美顿公司的FAME（费米）全自动酶免分析系统。费米系统独特品质表现在：硬件上采用了综合模块化设计，广泛采用液体水平检测（LLD）技术、体积与重量传感、光学位置传感等实现了真正全过程控制（TPC），特别是专利的洗板液体传感器

40、，确保了最佳洗板效果，是保障试验特异性的关键。在软件与功能上，目前仍是唯一的全自动GMP/GLP规范符合系统，如全面的系统跟踪记录（Traceability）与系统追溯（Trackability），标本/试剂加样校验（Sample verification）及“自由任务管理”实现随时增加检测板。,全自动酶免分析仪器的开发已经历了十多年历史。与生化分析自动化不同，酶联免疫反应是在预先包被了试剂的96孔酶标板上进行，加样速度越快，每个标本的孵育时间一致性越高，孔间差异越小。因此，医疗器械厂商不得不开发独立的、812通道的全自动样本处理机来满足这一技术要求。这就是“前处理设备”概念的由来。 对比生化

41、分析仪的试验反应过程，酶联免疫试验是十分复杂的。这就要求全自动酶免分析仪具备多任务平行处理能力，特别是要具备自由任务资源管理系统，以保证随时增加任务菜单和急诊插入，并且要求酶免实验过程不受加样处理的影响。也就是说“后处理设备”必须相对独立于“前处理”，以实现最优反应过程（实验质量）和最大化分析生产力（throughput）。,根据全自动酶免分析系统的处理模式，人们通常将全自动酶免分析系统的处理模式，人们通常将全自动酶免分析仪分成二类，即一体机，如Biro、AMP、Alisei、变色龙等；分体机，如AT和费米；斯达尔和费米；RSP和MPP3000；VIVICE和DIAS；RSP和BEP-lll等

42、 2003年，瑞士哈美顿公司采用最新的信息技术和实验工程技术，成功地实现了“前处理”全自动样本处理工作站斯达尔，与“后处理”全自动酶标分析仪费米连体化，即全自动酶免分析连体机“FAME-STAR，辉煌之星”，也创造了全自动酶免分析系统新分类，即连体机。“保持了原来的前处理设备和后处理设备的优秀品质同时，使用一台微机、一套操作系统实现了一人操作，实现由自标本加样、稀释到酶标孵育、洗板、加试剂、读数和结果打印全自动。同时，原来的前处理和后处理也可以独立工作。,仪器的使用环境及保养： 环境温度、尘埃、电源的稳定性对机器的影响很大。环境温度过高或过低，仪器都会报警，因此实验室应安装空调，定期清洗空气过

43、滤器以利散热和除尘。 温度与湿度 加样注射器的外壁与移动杆上的塑料膨胀系数不同，当温度降低时注射器会出现漏水的现象，因此，变色龙的工作温度范围应维持在1O45之间。另外，空气中的湿度大于50 时，线路板容易受潮，仪器不能正常运转，特别是在梅雨季节，应关好门窗并打开除湿机。应严格按说明书要求坚持日保养和月保养，以避免探针和管路堵塞。定期校正和检查样品探针和运行探针的位置。,全自动酶免分析系统的日常维护 一体的综合性分析仪。主机中包括了加样器、振板器、孵育器、清洗器、判读仪及转板机等。即可按已设定程序进行全步骤操作，一气呵成；也可根据需要分步骤完成，操作十分简便灵活。但要保持系统的稳定性，日常维护

44、保养工作至关重要。 1开机后的准备开机后首先要做系统的准备工作。选择洗液瓶冲洗管道数min。每天做好这一步骤非常重要，通过系统准备，仪器的转板机、振板器自动复位；加样探针的内外被自动冲洗；清洗系统中充满洗液；驱逐残存的气泡。观看废液瓶及储液瓶液面的高低，倒掉废液，加满洗液、蒸馏水，为新的一天工作打下良好的基础。开机前查看注射器有无漏水或盐迹，加样针洗槽有无赃物堵塞。开机后，执行相关程序，观察加样针及洗板头是否畅通。,2试验中及试验完毕后的保养挑选一些用过的乙肝标志物阴性微孔条摆好，每当一个试验完毕进入下一个试验前，或全天试验完毕后都要进行冲洗。用蒸馏水反复冲洗，以免洗板时有凝集不充分的检样堵塞

45、针头或残留管道。3每周的保养工作 加样针为锡-包裹TEFLON涂层，虽然每加完一检样系统都会自动清洗，但为了防止检样中的小凝块、高血脂类物质久而久之粘附、堵塞针头，每周要做1-2次加样针外表清洗工作。即可用沾75酒精的棉，仔细擦拭针头和针槽，以保证加样的准确性；洗板用的一排注洗液的针，也需每周1次用75的酒精棉拭擦拭外表面，以防止液体从注针上滴下。,4保持储液瓶的清洁储液瓶分别装有蒸馏水和洗液。废液瓶中可加入一定浓度的84消毒液，工作结束后消毒过夜第2天倒掉将瓶子清洗干净；另外的储液瓶也应勤倒勤消毒，以防冬季气温低洗液瓶中形成结晶，夏季气温高细菌繁殖形成小絮状物堵塞加样针和洗针。5系统内外需保

46、持整洁每天试验前要在工作台面上倒好试剂，不能在试剂架上直接倒，以防终止液等将金属架腐蚀。工作结束后，要用柔软的布沾少量水擦拭系统的里外表面，再用干布擦拭干净，保持系统的干燥、整洁；尽量不要开盖操作，以免灰尘进入操作系统。,堵孔常见的原因如下: 1 纤维蛋白 标本中的纤维蛋白没有完全析出，加样后形成纤维蛋白丝，堵塞洗板头。 2 洗涤液中的漂浮物 洗涤液放置一段时间后会形成沉淀，进人液路系统后，可使洗板机针孔堵塞。因此，应定期清洗洗涤瓶。 3 微孔板潮湿微孔板中注满的洗涤液在洗板架移动时，往往会从微孑L中流出，可能会对仪器读板的结果及电路有一定的影响。,撞针加样针的前端较细，使用或维护不当可能会撞

47、弯甚至撞断。操作者应注意以下几个方面。 1 样品盘应保持清洁 当样品盘底部有白色的盐类结晶时，仪器会误判样品盘的初始位，加样针可能会撞到样品盘。处理办法：用纱布蘸7O 酒精擦拭底座，用记号笔将样品盘底的白色涂黑。 2 试管应垂直放置另外，盘样品盘孔的四周可以用胶布封住，能有效地防止试管晃动并便于试管的取放。试剂槽一定要准确放到位。否则，加样针极有可能被撞断。,加样注射器和硅胶管连接处漏水或脱落。是由于加样针堵塞或者废液管道不通畅，导致管道内压力增高，使硅胶管破裂或脱落而引起。 在试验中或试验完成后发现微孔板内内液体量不足或无液体(加样针或废液管道堵塞)就会出现此类现象。 洗板头堵塞,由于样本中

48、存在纤维蛋白而造成。 更换大瓶试剂时，动作要轻要快，以免空气进入管路：管路中进气泡。,生物安全柜知识简介,湖南省临床检验中心,生物安全柜 biosafety cabinet 防止操作过程中含有危害性或 未知性生物气溶胶散逸的空气 净化安全装置。,生物安全柜知识简介,湖南省临床检验中心,级生物安全柜 用于对人员、受试样本及环境进行保护且能满足 生物危险度等级为1、2、3 级的病原体操作的生 物安全柜。级生物安全柜的前窗开口区向内吸 入的负压气流用以保护人员的安全；经高效过滤 器过滤的垂直气流用以保护受试样本的安全；排 出气流经高效过滤器过滤是为了保护环境不受污 染。,生物安全柜知识简介,湖南省临床检验中心,级生物安全柜 二级生物安全柜是目前应用最为广泛的柜 型，是有前窗操作口的安全柜，操造者可 以通过前窗操