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文档简介
1、实验五 人血清总胆固醇的测定 -化学比色法,一、实验目的,1.了解胆固醇 2.学习胆固醇测定的原理和方法,二、实验原理,(一) 胆固醇cholesterol 是一种环戊烷多氢菲的衍生物。早在18世纪人们已从胆石中发现了胆固醇,它广泛存在于动物体内,尤以脑及神经组织中最为丰富,在肾、脾、皮肤、肝和胆汁中含量也高。其溶解性与脂肪类似,不溶于水,易溶于乙醚、氯仿等溶剂。,是合成胆汁酸,维生素D以及甾体激素的原料,胆固醇是动物组织细胞所不可缺少的重要物质,它不仅参与形成细胞膜。,自然界中的胆固醇主要存在于动物性食物之中,植物中没有胆固醇,但存在结构上与胆固醇十分相似的物质植物固醇。植物固醇无致动脉粥样
2、硬化的作用。,正常人体内血液总胆固醇110220毫克/100毫升。 血液中胆固醇含量过高,表示胆固醇代谢可能发生障碍。冠状动脉粥样硬化患者的血清胆固醇含量往往偏高。因此临床化验上测定血清胆固醇含量将有助于诊断某些疾病。,人体胆固醇来自食物及体内合成两个途径。 1. 2/3由肝脏制造出 2.其余的1/3来自食物,尤以肥肉内脏、蛋黄含量较高。,机体的胆固醇以两种形式存在: 游离的胆固醇 胆固醇酯 胆固醇必须和脂蛋白结合才能运送到体内各部分;脂蛋白又分低密度脂蛋白LDL和高密度脂蛋白HDL。,低密度脂蛋白胆固醇 LDL-C 低密度脂蛋白把胆固醇从肝脏运送到全身组织,过量时,它携带的胆固醇便积存在动脉
3、壁上,久了容易引起动脉硬化。因此低密度脂蛋白被称为“坏的胆固醇”。 高密度脂蛋白胆固醇HDL-C 高密度脂蛋白扮演清道夫角色,它将周边组织多余的胆固醇送回肝脏,排出体外,达到抗血管硬化的目的。它还有维护血管内皮细胞功能,及保护血管免于血栓的形成。高密度脂蛋白增加,动脉壁被胆固醇囤积的机会就减少。因此它是“好的胆固醇”。,(二)血液 组成:血细胞(有形体) 血浆(包含血清及纤维蛋白原) 血浆是血液的重要组成分,呈淡黄色液体,水分占9092,溶质以血浆蛋白为主 。 血浆总胆固醇的1/3以游离形式存在,2/3为与脂肪酸结合之胆固醇酯。,(三)实验反应原理 胆固醇及其酯在硫酸作用下与邻苯二甲醛产生紫红色物质,此物质在550nm波长处有最大吸收。因此,可用比色法作总胆固醇的定量测定。 胆固醇含量在400mg/100mL以内时,与光吸收值呈良好线性关系。,三、实验步骤,1、制作标准曲线 2、样品测定,人血清(已经稀释,直接使用),四、注意事项,1.强酸注意实验安全 2.这次实验选定35水浴锅中显色 3.混合酸自己配制:25毫升浓硫酸缓慢倒入25毫升冰乙酸中,边加边搅 4.混合酸粘度大,要用封口膜混匀。比色前也需要混匀 5.样品测定中对照不做,用标准曲线中的0号管 6.接触血清戴手套一只,实验结束要
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