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文档简介

1、微生物基本检验技术,华中科技大学同济医院检验科,致病菌的检验程序,直接涂片镜检 涂片镜检 标本分离培养可疑菌落 生化反应 血清学鉴定 分子生物学技术 药敏试验 动物试验,细菌形态学检查,1、不染色标本检查 2、染色标本检查,显微镜,普通光学显微镜 暗视野显微镜 相差显微镜 荧光显微镜 电子显微镜,普通光学显微镜,最为常用的一种显微镜，普通显微镜用油镜可放大1000倍，可将0.25m的微粒放大到肉眼可见的0.25mm,一般细菌大于0.25m，故用普通光学显微镜可见。,暗视野显微镜,多用于检查不染色的活细菌和螺旋体的形态及运动观察。,相差显微镜,主要用于检查不染色活细菌的形态及内部结构。,荧光显微

2、镜,扫描电子显微镜,放大倍数可达数万至数十万倍，能分辨1nm的物体，可观察细菌表面和内部超微结构。,不染色标本检查,应用：主要用于检查生活状态下细菌的动力及运动状况 常用方法：压滴法、悬滴法、暗视野显微镜检查,不染色标本检查-压滴法,不染色标本检查-动力观察,动力+：可看到细菌自一处移至另一处，有明显的方向性位移 动力-：受水分子撞击细菌呈现布朗运动，只在原地颤动而无位置的改变。,染色标本的检查-常用染料,碱性染料 电离后显色离子带正电荷，易与带负电荷的被染物结合。细菌的等电点在pI25之间，易与带正电荷的染料结合而着色。常用的染料有碱性复红、结晶紫、亚甲蓝等。 酸性染料:电离后显色离子带正电

3、荷，易与带负电荷的被染物结合。 通常用来染细胞质，而很少用于细菌的染色。常用的染料有伊红、刚果红等。 复合染料（中性染料）及荧光染料 复合染料是碱性染料和酸性染料的复合物，如瑞氏染料（伊红亚甲蓝）、姬姆萨染料（伊红天青）等；荧光染料如荧光标记的抗体，荧光素常用异硫氢基荧光素。用于某些特殊的染色技术。 脂溶性染料 如Sudan black。,染色标本的检查,染色方法的种类 单染法:采用一种染料染色 复染法（鉴别染色）:采用两种或两种以上的不同染料进行先后染色，使不同种类的细菌、同种细菌的不同结构，分别染上不同的颜色，以便鉴别细菌。,步骤：,结果: 阳性菌紫色 阴性菌红色,由丹麦医生Hans Christian Gram于1884年创立。,革兰染色法（Gram Stain）,Figure 1 - A Gram stain of Gram + Staphylococcus cells.,Figure 2 - Gram stain of Gram - E. coli cells,Figure,步骤： 涂片固定 酸性复红初染 3%盐酸酒精脱色 美蓝复染 镜检,抗酸染色法,结果: 抗酸菌红色； 非抗酸菌蓝色。,步骤： 涂片固定 金胺O染色 盐酸酒精脱色 复染 镜检,荧光染色,结果: 抗酸菌明亮橘黄色； 非抗酸菌-无荧光,特殊染色,荚膜染色,特殊染色,负染色 （墨汁染色）,特殊染色,

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