病毒肝炎血清标志物检测.ppt

1、1,哈尔滨医科大学第一临床医学院 实验诊断教研室 （Laboratory Diagnostics Department of The First Hospital of HMU) 关秀茹,2,病毒性肝炎血清标志物检测 (Tests on serum markers of viral hepatitis),3,病毒性肝炎分类 (Classification of Viral Hepatitis) 1、已确定的肝炎：甲、乙、丙、 丁、戊五种。 2、未定论的：己、庚和输血传播病毒（TTV） 引起的肝炎。 3、非甲戊型肝炎,4,5型病毒性肝炎病原体、流行病学和临床特征,5,5型病毒性肝炎病原体、流行病

2、学和临床特征,6,甲 型 肝 炎 (Hepatitis A) HA 由甲型肝炎病毒（HAV）引起的一种以肝脏损害为主的传染性疾病。 一、血清标志物检测及意义 1、 抗HAV-IgM：出现较早，HAV感染后1-2周内血中即可检出，3-6个月转阴，是早期诊断甲型肝炎最简便而可靠的血清学指标。 2、 抗HAV-IgG：出现于急性感染后期和恢复期，可持续多年甚至终身，是一种保护性抗体。 3、 HAV-RNA：PCR法测定。,7,二、流行特征与预后 潜伏期1个月左右，易暴发流行，通过消化道传播，预后较好，一般3个月至半年恢复，不留后遗症。,8,HBV为DNA病毒，球形颗粒，结构包括外壳蛋白（HBsAg，

3、前S1、前S2）和核心颗粒（HBeAg，HBcAg，DNA聚合酶）。,乙 型 肝 炎 (Hepatitis B),9,一、血清标志物检测及意义 1、乙肝表面抗原（HBsAg） 感染乙肝病毒2-11周后血清开始出现HBsAg，尔后出现转氨酶异常和临床症状。 HBsAg阳性：见于急性乙肝，慢性乙肝患者，无症状乙肝病毒携带者。,10,2、前S1和前S2抗原 （1）早期出现：比HBsAg还早，在转氨酶升高 前1-2个月即可出现阳性。 （2）病毒复制的指标：与HBV-DNA，HBeAg 几乎同时出现。 （3）对于评价药物疗效是一项重要的指标。,11,3、乙肝病毒表面抗体（HBsAb） 是HBsAg刺激机

4、体产生的特异性抗体，是一种保护性抗体，能中和HBV。初感染2-6月出现，抗-HBs阳性见于HBV既往感染者，乙肝恢复期及乙肝疫苗免疫后。 （1）抗-HBs定量测定：抗-HBs含量大于10mIu/ml，表示具有保护性。 （2）抗PreS1和抗PreS2：见于乙肝急性期和恢复早期。抗PreS1和抗PreS2阳性表示病毒正在或已被清除，表示预后好，抗PreS1和抗PreS2迟迟不出现，则意味着预后较差或转为慢性。,12,4、乙肝病毒核心抗原（HBcAg）和核心抗体（抗HBc） （1）构成病毒核心颗粒部分，HBcAg活性部分位于颗粒内部，外周血没有游离的HBcAg，经过特殊处理后HBcAg可释放出来。

5、HBcAg阳性表示病毒在复制，传染性强。 （2）抗-HBc：不是中和抗体，有IgG和IgM两种形式。IgM在早期出现，而IgG在恢复期出现，可持续多年或终身存在。,13,对抗-HBc单独阳性的解释： l首先排除假阳性结果。 l急性感染后的恢复早期（窗口期）：在HBV急性感染消退时，HBsAg减少甚至消失，抗-HBs尚未出现，称为窗口期。 抗HBc-IgM阳性，有传染性。 抗HBc-IgG阳性，恢复期，可持续多年，甚至终身。,14,5、乙肝病毒e抗原和e抗体 HBeAg为可溶性，可分泌到细胞外，是病毒复制的标志。HBeAg刺激机体产生抗-HBe抗体。 （1）e抗原可作为急性乙肝辅助诊断和预后的指

6、标。 HBeAg在乙型肝炎潜伏期后期出现，晚于HBsAg，它随着HBsAg的消失而消失，若急性肝炎发病3-4个月后HBeAg转阴，则预后良好。,15,（2）HBeAg存在于HBsAg阳性的病人和携带者的血液中，其中大多数伴有HBV-DNA，DNA多聚酶阳性。HBeAg阳性说明病毒复制，具有很强的传染性。抗-HBe阳性者传染性较低。 （3）对HBsAg阴性而HBeAg阳性原因分析： l检测HBsAg的方法不够灵敏。 l 血清中RF的干扰（用热聚IgG处理） lHBsAg与抗-HBs形成复合物。,16, HBsAg的浓度过高，抗原、抗体比例不合适，出现HBsAg假阴性。 试剂盒的质量和操作原因，可

7、导致e抗原假阳性。 6、HBV-DNA：PCR法,17,经典的乙肝血清标志物时象曲线图,18,19,20,常见乙肝病毒标志物检测模式,21,常见乙肝病毒标志物检测模式,22,常见乙肝病毒标志物检测模式,23,二、流行特征与预后 60%感染，10%发病，农村多于城市，男性多于女性，主要经血液传播，潜伏期1-6个月无症状携带者和隐性感染，亚临床感染和急、慢性临床感染。 急性乙肝，一般持续1-3个月，最多半年，80-90%可以治愈，10-20%转为慢性肝炎，少部分转为肝硬化和肝癌。,24,丙 型 肝 炎 (Hepatitis C) 一、血清标志物检测及临床意义 1、抗-HCV：非保护性抗体，只是HC

8、V感染指标，可终身携带。 2、HCV-RNA：比抗-HCV出现早，可作为早期诊断和献血员筛查的指标。 二、流行特征及预后 目前，输血后丙型肝炎占70%，潜伏期1-6个月，临床经过较轻，与乙肝比较，转氨酶和胆红素水平较低，但发展为慢性肝炎的比例较高。,25,丁 型 肝 炎 (Hepatitis D) 一、血清标志物检测及临床意义 HDV是一种有缺陷的病毒，在许多方面需要嗜肝DNA病毒（主要是乙肝病毒）的辅助，所以认为HDV不单独存在，通常与乙肝伴存。 1、抗HDV-IgM，感染早期出现，抗-HD-IgG，感 染后期和恢复期。 2、HDV-RNA：PCR法 二、流行特征与预后 潜伏期4-20周，人

9、感染HDV后可表现为HBV/HDV联合感染或重叠感染。,26,戊 型 肝 炎 (Hepatitis B) 一、血清标志物检测及临床意义 1、抗HEV-IgM：出现于感染早期，3个月内转阴。 2、抗HEV-IgG：感染后期和恢复期。 3、HEV-RNA：PCR法 二、流行特征及预后 经消化道传播，易暴发流行。潜伏期10-60天，不发展为慢性，4-6周症状消失，肝功能恢复正常。,27,血清病毒标志物的检测方法 1、ELISA方法（酶联免疫吸附试验） 2、RIA法 3、胶体金法 4、化学发光法,28,ELISA方法 1、特点：敏感性高，特异性好，重复性好，试剂制备容易，结合物高度稳定，有效期长，仪器设备简单，可用肉眼观察结果，操作易于自动化和判断结果客观，成本较低等优点，可用于定性或定量测定可溶性抗原或抗体。,29,2、反应原理：酶能与抗原或抗体结合形成酶标抗原或抗体。酶标抗体具有酶和抗体双重活性。待检标本（含抗体或抗原）与预先包被在固相载体表面相应的抗原或抗体结合，形成免疫复合物。酶标抗体或抗原与此免疫复合物结合，形成酶标记的免疫复合物。当加入酶的相应的底物时，由于