微生物学检验弧菌科及检验.ppt

1、弧菌科常规检验,弧菌科种类,弧菌属 气单胞菌属 邻单胞菌属 发光菌属等,弧菌科共同特征,革兰阴性菌 需氧兼性厌氧 营养要求不高 氧化酶 发酵葡萄糖产酸不产气,弧菌科三个菌属的鉴别,霍乱弧菌,是引起烈性肠道传染病霍乱的病原体 包括古典生物型和ElTor生物型 O139是新的流行菌株,形态染色,革兰阴性 弧形或逗点状 单鞭毛，运动呈“穿梭样”或“流星样” 无芽孢，无荚膜 在新鲜粪便中成“鱼群样”排列,霍乱弧菌,革兰染色,鞭毛染色,培养特性,兼性厌氧 营养要求不高 耐碱不耐酸，常用pH8.49.2碱性培养基 在液体培养基中形成菌膜 菌落圆形、较大、扁平,霍乱弧菌常用培养基,碱性蛋白胨水 碱性琼脂平板

2、 硫代硫酸钠-枸櫞酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平板（TCBS） 庆大霉素琼脂平板（含亚碲酸钾）,生化反应,霍乱弧菌生物型,O1群霍乱弧菌分为古典生物型和ElTor生物型 两种生物型具有相同的抗原结构 两种生物型多数生物学性状相似,霍乱弧菌两种生物型的鉴别,霍乱弧菌分群、型,O抗原是霍乱弧菌分群和型的基础 根据O抗原不同分为139个血清群 O1群包括古典生物型和ElTor生物型 其他群称为非O1群（非凝集弧菌） O1群血清型（见下表）,抵抗力与变异,ElTor型抵抗力较古典型强， 在水中存活时间长 对酸性物质敏感 对庆大霉素耐受 多次传代可失去典型形态而成为杆状,临床意义,致病物质：霍乱肠毒素，导致小肠

3、上皮细胞分泌功能亢进，分泌大量肠液。 所致疾病： 经肠道传染，引起烈性肠道传染病霍乱，为甲类传染病。 典型病人粪便呈“米泔水”样 病后可获得牢固免疫，以SIgA为主。 我国霍乱流行菌株以ElTor小川型为主。,作用机制示意图,微生物检验标本采集,发病早期采集标本 以“米泔水”样便为主，及时送检 卡布培养基保存 严密包装，专人送检,检验程序,标本,增菌培养 碱性蛋白胨水,分离培养（TCBS、碱性平板）,生化鉴定分型,血清学鉴定,确诊报告,初步报告,快速诊断,直接涂片 动力、制动试验,检验方法显微镜检查,涂片染色：标本直接涂片革兰染色，注意形态、排列 动力观察：压滴法或暗视野镜检，注意运动方式 制

4、动试验：O1诊断血清与菌体结合，动力消失,分离培养,标本接种碱性蛋白胨水增菌68小时，转种TCBS或庆大霉素琼脂， TCBS：出现黄色菌落 庆大霉素琼脂：出现中心灰褐色的菌落,鉴定,生化反应：粘丝试验、霍乱红反应 确定血清群：O1群诊断血清与可疑菌落作玻片凝集，以确定是否为O1群 确定血清型：与分型诊断血清作玻片凝集，以确定血清型别 确定生物型： 第组噬菌体裂解试验 多粘菌素B敏感试验 鸡红细胞凝集试验 溶血试验,副溶血性弧菌生物学性状,革兰阴性杆菌，或微弯，单端鞭毛，无芽孢，无荚膜 营养要求 不高，嗜盐性，最适盐浓度3.5NaCl，无盐培养基不生长 TCBS：形成不发酵蔗糖的绿色菌落 神奈川

5、现象：致病性副溶血性弧菌能溶解人或兔红细胞，不溶解马红细胞,副溶血性弧菌临床意义,致病物质：溶血素（耐热直接溶血素和耐热相关溶血素） 所致疾病： 食入副溶血性弧菌污染的盐腌食品，引起食物中毒,气单胞菌属,形态染色： 革兰阴性杆菌，或球杆状、丝状，极端鞭毛，无芽孢 生长条件： 兼性厌氧；营养要求不高 生长温度较宽，045 嗜冷菌37以下生长 嗜温菌1042生长,气单胞菌属,生长现象 TCBS上不生长 血平板：灰白、光滑、凸起菌落 肠道选择平板：形成不发酵乳糖菌落 生化反应 氧化酶、触酶 发酵葡萄糖产酸产气 6.5NaCl不生长 O129不敏感 多数菌株产-内酰胺酶，对青霉素耐药,气单胞菌属临床意

6、义,致病物质：溶血毒素、细胞毒素 所致疾病： 肠道感染：是夏季腹泻常见病原菌 肠外感染：败血症、伤口感染等 多数菌株产-内酰胺酶，对青霉素耐药,检验程序,标本,增菌,分离培养 （血平板、Mac）,全面生化反应,可疑菌落,肠毒素测定,初步生化反应,涂片 染色镜检,血标本,氧化酶 TCBS生长 O/129 耐盐试验,鉴定试验,与肠道杆菌、非发酵菌鉴别 与邻单胞菌属和弧菌属鉴别 气单胞菌属种间鉴别,肠道杆菌、非发酵菌、弧菌科鉴别,鉴定依据,革兰阴性杆菌，丛鞭毛 肠道选择平板上无色透明菌落 氧化酶、葡萄糖发酵 O/129：R TCBS： 6.5NaCl：,邻单胞菌属主要性状,只有一个菌种：类志贺邻单胞

7、菌 革兰阴性杆菌，单鞭毛或丛鞭毛，无芽孢，无荚膜 兼性厌氧，营养要求不高 在SS平板形成不发酵乳糖菌落 氧化酶，葡萄糖发酵 O/129：S TCBS：不生长 6.5NaCl：不生长 赖氨酸、鸟氨酸、精氨酸双水解均 多数菌株产-内酰胺酶，对青霉素耐药,邻单胞菌属临床意义,腹泻、食物中毒，多见于夏季 败血症、脑膜炎等，多见于免疫力低下者，感染率低，但死亡率高。,邻单胞菌属检验程序,标本,增菌,分离培养 （血平板、Mac）,全面生化反应,可疑菌落,初步生化反应,涂片 染色镜检,血标本,氧化酶 TCBS生长 O/129 耐盐试验,邻单胞菌属鉴定,与志贺菌属鉴别：氧化酶、动力、血清学 与气单胞菌属鉴别：

8、O/129，肌醇试验 与弧菌属鉴别：TCBS、6.5NaCl生长试验,弯曲菌属,弯曲菌属是一类呈逗点状或S形的革兰阴性杆菌，广泛分布于动物界，其中有些可引起动物和人类腹泻、胃肠炎和肠道外感染。,形态染色,革兰阴性菌，螺旋形、S形，一端或两端有单鞭毛，无芽孢，无荚膜，运动活泼，暗视野下呈投标样运动，,培养特性,微需氧 最适生长温度随菌种而定 营养要求高，常用改良弯曲菌培养基（Campy-BAP） 两种类型菌落：扁平湿润边缘不整齐，沿穿刺线扩散生长；圆形、突起、湿润、黏液样外观,生化反应,氧化酶阳性 触酶阳性 不分解和不发酵糖 不分解尿素,临床意义,传播方式：经口感染 致病物质：产生肠毒素、细胞毒

9、素、内毒素等致病物质 空肠弯曲菌可引起急性肠炎、格林巴利综合征 胎儿弯曲菌可引起败血症、脑膜炎等,弯曲菌属检验,标本采集：粪便，肛拭，剩余食物，立即送检 镜检： 悬滴法动力检查观察投标样或螺旋动力 染色检查：革兰阴性细小弯曲菌 培养：微需氧、温度,鉴定,动力 形态 菌落 马尿酸钠水解试验（空肠弯曲菌阳性） 醋酸吲哚水解试验（空肠弯曲菌阳性） 不同温度的生长实验,幽门螺杆菌,螺杆菌是一群氧化酶和触酶阳性，微需氧、37能生长，在25 和42 生长不良的革兰阴性弯曲菌 目前研究的最多的是幽门螺杆菌（Hp）,形态染色,革兰阴性 螺旋状弯曲，在胃粘膜环境中，具有典型的形态，在陈旧培养物中，可呈圆球状 单端或双端有多根带鞘鞭毛 无芽孢,培养特性和生化反应,微需氧，营养要求高，需动物血液或血清。 37能生长，在25 和42 生长不良 过氧化氢酶和氧化酶阳性。尿素酶丰富，是鉴定的主要