3.1菊花的组织培养 (1).ppt

1、课题1 菊花的组织培养,指植物的离体部分（包括任何器官、组织、细胞或原生质体），在人工控制的培养基及环境条件（温度及光照）下，得以生长和分化成完整植株的一种无菌培养技术。,1、组织培养,（一）植物组织培养的基本过程,2、植物组织培养的原理,植物细胞的全能性,概念：细胞的全能性是指已分化的细胞具有发育成完整个体的潜能。 原因：是生物体的每一个细胞都含有该物种所特有的全套遗传物质,植物细胞的全能性,植物细胞的全能性,细胞全能性体现在发育完整个体，而不是只发育成部分器官。即“具有”和“体现”全能性是有区别的。,（1）理论上活细胞都具有全能性 （2）只有发育为完整个体，才能体现或表现细胞的全能性,（3

2、）表现条件：离体状态；一定的营养物质；植物激素；其他事宜的外界条件（温度、pH、氧气、光照、无菌等）,（4）细胞全能性的种类：体细胞全能性和生殖细胞全能性。,（5）不同细胞全能性表达的难易程度 受精卵生殖细胞分生组织等薄壁细胞已分化的细胞,3、细胞分化,（1）概念：在植物个体发育的过程中，细胞在形态、结构和生理功能上都会出现稳定性的差异，形成这些差异的过程叫做细胞的分化。,（2）细胞分化的实质：基因选择性表达。,（3）适用对象：多细胞生物。,（4）特点：持久性；稳定性和不可逆性；普遍性。,植物组织培养过程示意图,2、上面的示意图中还有什么地方不够完善的？,没有进行灭菌处理，试管也没有做密封等。

3、,离体的植物器官、组织、细胞,脱分化,愈伤组织,再分化,根 芽,植物体,植物组织培养的基本过程,愈伤组织是通过细胞分裂形成的，其细胞排列疏松而无规则，高度液泡化呈无定形状态的薄壁细胞。（未分化的细胞）,（1）外植体：用于离体培养的植物器官或组织片段等。 （2）脱（去）分化：由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程。 （3）再分化：经脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，可以重新分化成根或芽等器官的过程。,（二）影响植物组织培养的因素,材料的选择、营养成分、激素、一定的外界因素（温度、空气、无菌环境、适合的PH、适时光照等）。,1、外植体的选取,（1）容易进行无性繁殖的植物容易进行组培。 （2）

4、幼龄、保存时间短的植物容易培养成功。 （3）菊花的组培，一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝。,2、培养基的配制 （1）主要成分： 大量元素：N、P、K、Ca、Mg、S等。 微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co等。 有机物：蔗糖、甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素等。,（2）培养基中各成分的作用,思考：为什么在培养基中不直接加入葡萄糖？,MS固体培养基成分及比例,同微生物培养基相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？,微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。,阅读课文，思考以下问题,1.

5、同微生物培养基相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？,2、你认为组织培养过程中，成功的关键有哪些？这些步骤的适宜条件是什么？,组织的脱分化及愈伤组织的再分化。,植物组织培养过程中，影响植物细胞脱分化、再分化的最重要因素是植物激素。,3、植物激素对组织培养的影响,在培养基中需要添加生长素和细胞分裂素等植物激素，其浓度、使用的先后顺序、用量的比例等都影响结果。 高 利于根分化、抑制芽的形成 生长素/细胞分裂素 低 利于芽的形成,适中 利于愈伤组织的形成,生长素/细胞分裂素 高,生长素/细胞分裂素 低,4、pH、温度、光照等条件的影响 不同植物对各种条件的要求往往不同。进行菊花组培时，一般将pH控

6、制在5.8左右，温度控制在1822，并且每日用日光灯照射12h。,（三）菊花组织培养的实验操作,1、实验操作流程 （1）制备MS固体培养基 配制各种母液 配制培养基：琼脂和水加热融化加入蔗糖加入各种母液加蒸馏水定容调节pH分装。 注意：菊花茎段组培容易，因此不必添加植物激素。 灭菌：将分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌。,（2）外植体消毒 取菊花嫩枝加洗衣粉刷洗流水冲洗20min，并用无菌吸水纸吸取水分放入70%酒精中摇动23次，持续67s无菌水清洗，并用无菌吸水纸吸取水分放入质量分数为0.1%的氯化汞中12min无菌水清洗（至少3次）,（3）接种 接种室消毒：70%酒精喷雾消毒空

7、气，用酒精擦拭操作台并用紫外线照射20min。 无菌操作：操作必须在酒精灯火焰附近进行。 材料的切取和接种：小段0.51cm，形态学上端再上，每瓶接种68块外植体。 （4）培养 温度1822，光照12h，外植体上长出愈伤组织后，待其长到11.5cm时，可进行试管苗培养。,（5）移栽 用流水清洗根部培养基，将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境中生活一段时间，待幼苗长壮后在移栽到土壤中去。 （6）栽培 幼苗移栽后，适时观察，浇水、施肥，直至开花。,2、实验结果分析与评价 （1）选材是否恰当 （2）无菌技术是否过关 （3）接种是否成功 （4）是否设置对照组和重复组,污染的预防措施,（一）防止外植体带菌 （二）保证培养基及接种器具彻底灭菌 （三）操作人员严格遵守无菌操作规程 （四）保