实验二 微量凯氏定氮法测定总氮量.ppt

1、实验二总氮含量测定凯氏定氮法，一个目的：学习凯氏定氮法蛋白质含量测定原理掌握蒸馏滴定操作技术，二、原理、生物材料氮含量测定对生化研究具有一定意义，蛋白质氮含量约为16，测定氮含量即可推测蛋白质含量。 消化：有机物和浓硫酸供给热量，把有机氮全部转化为无机氮硫酸铵。 为了加快反应，添加硫酸铜和硫酸钾元素的混合物的前者为催化剂，后者能够提高硫酸的沸点。 甘氨酸的消化过程为ch 2n H2 cooh 3h2so 42 co23so 24h2o0nh3n h3so4(nh4 ) 2so 4蒸馏：浓碱分解消化液中的硫酸铵，分离阿摩尼亚，然后将水蒸气产生的阿摩尼亚蒸馏成一定量、一定浓度的硼酸溶液(NH4 )

2、 2 so 42 NaOH2NH 32h2ona 2so 42 NH 34h3bo3(NH4 )2b4o 75 H2O滴定：用标准无机酸进行滴定，由最后使用的标准酸的摩尔数(相当于测定对象物中的阿摩尼亚的摩尔数)计算直到溶液中的原来的氢络离子浓度恢复为止(NH4 )2b4o7h2so 44 3、试剂、1、浓硫酸2、粉末硫酸钾元素硫酸铜混合物K2S04和CuS04.5H20以3:1的配比研磨混合3，30氢氧化纳金属钍溶液4、2硼酸溶液5、标准盐酸溶液(0.0098 molL) 6。 酸性时为紫红色，碱性时为绿色。 变色范围狭窄敏锐。 7 .样本小麦面粉1g、5、操作方法、1 .样本处理后的一些固

3、态样本：中的氮含量由该物质(干重)中所包括的氮的g数100g表示()。 一般的样品干燥的温度采用105度。 因为没有游离的水在100以下不能干燥。 在称量瓶中称量一定量的细样本(例如0.1 g左右的干燥小麦面粉)，放入105的电烤箱中进行4小时干燥。 用坩埚夹子把称量瓶放入甩干机内，降低到室温进行称量，用上述操作继续进行样品的干燥。 每干燥1小时，称量2次，直到称量值不变，即达到一定重量。 样品是血清等液体，可以直接消化一定体积的样品进行测定。 2、消化、凯氏烧瓶取标签条。 加入各种玻璃珠在1和2号瓶中分别加入0.1g样品、200 mg催化剂(k2s 04 cus 04.5 h2o )、5 m

4、L浓硫酸。 分别在3号瓶和4号瓶中加入相同量的催化剂和浓硫酸，作为对照测定试剂中可能含有的微量含氮物质。 在各瓶口装入漏斗，用通风箱内的电炉消化。 放样品时，请直接送到瓶底，以免沾到瓶口或瓶颈。 开始消化时控制火力，避免液体成为瓶颈。 瓶内的水蒸气蒸发结束后，硫酸开始分解放出SO2白烟后，适当加强火力，持续消化，直到消化液变成透明淡绿色。 定容：蒸发制冷后，加入约10 mL蒸馏水。 (请注意缓慢相加，相加后摇晃。) 然后，将瓶中的溶解物注入50或100 mL的容器中，用蒸馏将烧瓶清洗数次，将清扫液装入容器中，用水稀释至刻度，混合准备。 蒸馏：将蒸汽发生器、蒸馏器和冷凝机一体化，以体积小、安装方

5、便、操作简单为特征，改良了改良型笼氮订正的结构。 (1)水蒸气发生器和反应室(2)冷凝机和通气室(3)排水柱牛鼻子：清水管系统、蒸馏器的清洗、冷凝水投入，首先在水蒸气发生器中加入一定量的水(排水口高度好)。 水的自动喷出：将蒸馏水从采样室注入反应室，加入口水密封，用酒精灯加热烧水使酒精灯有会儿分离，反应室内的水自动喷出到蒸汽发生器上，打开蒸汽发生器的出水口，放水。 像这样反复进行35次清洗。 清洗后，在冷凝管下端加入5 mL、2硼酸溶液和12滴指示剂的混合液。 加入冷凝水进行蒸馏，如果不变色3-5min则表示蒸馏设备内部已被漂亮地清洗。3蒸馏过程：准备：取50 mL的3瓶玉米，分别加入2硼酸溶

6、液5ml和指示剂12滴，溶液呈青莲色，用表面皿复盖。 打开冷凝水，换成冷水。 将装有硼酸和指示剂溶液的玉米瓶放置在冷凝机下，将冷凝机下端浸泡在液体内。 样品：用移液器采集消化液(空白对照液和消化液分别制作)5 mL，仔细装入反应室，然后用小量筒装入30NaOH溶液5 mL，关闭自由回形针，在采样漏斗中装入少量的水进行封口。 蒸馏：关闭自由回形针，打开冷凝水(注意不要过急，以免水溢出。 实验中，冷凝水一直打开)。 点燃酒精灯，开始蒸馏，观察锥形瓶中的溶液从青莲色变为绿色时(约23分钟)，开始更正时，蒸馏3分钟，取下锥形瓶，冷凝机的下端离开液面约1cm，云同步，用少量的蒸馏水洗净蒸发制冷管口的外侧

7、，继续蒸馏1分钟，取下锥形瓶，表方法如前所述。 像这样三十五次。 最后将自由回形针打开到云同步，更换蒸汽发生器内的所有废水，继续进行下一次蒸馏。 样品和空白对照消化液一起蒸馏，对云同步进行滴定。 4 .滴定，全部蒸馏结束后，用标准盐酸溶液对收集到的各个玉米瓶中的阿摩尼亚量进行滴定，硼酸指示剂溶液从绿色变成青莲色作为滴定终点。 注意：使用前请检查酸性滴下管有无泄漏如有泄漏，涂抹白凡士林滴定时边滴下边振动滴定不要过多！ 及时的记录读取要求：空白消化液1次、样品消化液2次、5 .修正计算、总氮量(%)=C(V1-V2)0.014 100消化液量(ml) /滴定消耗用液量(ml ) w c是标准盐酸溶液V1是为了滴定样品消化液而除去的盐酸溶液的平均mL数V2是为了滴定空白对照消化液而除去的盐酸溶液的平均mL数w是样品重量(1g )、消化液量500ml、滴定消耗液量5ml。 14是氮的相对原子质量。 样品蛋白质含量()=总氮量6.