DNA重组工具简化.ppt

1、人民教育版选择了现代生物技术的三个主题，并讨论了一些问题：苏云金杆菌含有一种可以合成有毒蛋白质的基因。通过在棉花细胞中表达细菌的毒素蛋白基因，可以培育抗棉铃虫的抗虫棉。普通棉花抗虫棉，1.1 DNA重组技术的基本工具，想想看：需要做哪些关键工作？基因工程育种抗虫棉的简要过程：普通棉(无抗虫特性)、苏云金杆菌、抗虫基因的提取、与载体DNA的拼接和导入、棉花细胞(含抗虫基因)、棉花植株(有抗虫特性)，上述抗虫棉育种的关键步骤是什么？1.1 DNA重组技术的基本工具，基因工程育种抗虫棉的关键步骤：关键步骤1:从苏云金芽孢杆菌细胞中提取抗虫基因，关键步骤2:将抗虫基因与载体DNA拼接，关键步骤3:将抗

2、虫基因导入受体(棉花)细胞，1.1 DNA重组技术的基本工具，解决抗虫棉育种的关键步骤需要哪些工具？“分子手术刀”限制性内切酶、“分子缝合针”DNA连接酶、“分子转运体”基因载体进入受体细胞，1.1 DNA重组技术的基本工具，1。限制性内切酶“分子手术刀”，来源：主要从原核生物中分离和纯化。从近300种微生物中分离出约4000种限制性内切酶。功能：1 .它能识别双链DNA 2的特定核苷酸序列。它在每个链的特定位置破坏两个核苷酸之间的磷酸二酯键。具体来说。限制性酶只能识别特定的核苷酸序列，并能在特定的切割点切割脱氧核糖核酸分子。功能特征：大多数限制性酶识别序列由6个核苷酸组成，少数识别序列由4、

3、5或8个核苷酸组成。限制性酶识别序列：1。限制性内切酶的“分子手术刀”，形成两种末端，EcoRI限制性内切酶切割：SmaI限制性内切酶切割，2.16能产生多少粘(平)端？切割两个切口，产生四个粘性(平的)末端。如果用同一种限制性酶切割两种不同的DNA来源会发生什么？会产生同样的粘(平)端，然后让这两个粘(平)端粘在一起，看来重组DNA分子是可以合成的。思考？脱氧核糖核酸连接酶和脱氧核糖核酸聚合酶一样吗？为什么？1)只有单个核苷酸可以与现有的核酸片段连接形成磷酸二酯键；1)在两个脱氧核糖核酸片段之间形成磷酸二酯键；2)以脱氧核糖核酸链为模板，通过磷酸二酯键将单核苷酸连接成互补的脱氧核糖核酸链；2

4、)脱氧核糖核酸双链上的两个间隙在没有模板的情况下同时连接；2)脱氧核糖核酸连接酶分子，2，类型：大肠杆菌脱氧核糖核酸连接酶，T4脱氧核糖核酸连接酶，来源，功能，大肠杆菌，T4噬菌体，恢复磷酸二酯键，只能连接粘端，可以连接粘端和平端(低效率)，异同点，2，脱氧核糖核酸连接酶“分子缝合针”可以“缝合”粘端之间的缝隙，ECO即恢复被限制酶切割的两个核苷酸之间的磷酸二酯键，T4脱氧核糖核酸连接酶也可以“缝合”平端之间的缝隙，但效率低。T4脱氧核糖核酸连接酶，3。基因进入受体细胞的载体“分子转运体”。如果目标基因在被导入受体细胞后不能复制呢？导入受体细胞的靶基因不能复制，将在细胞增殖中丢失。2.如果没有

5、切割位点作为载体呢？3.目标基因是否进入受体细胞，你如何检测它？如果载体上有遗传标记基因，可以通过载体进入受体细胞后标记基因的表达来检测。4.如果载体对受体细胞有害呢？如果你不能分开会怎么样？该载体对受体有害，会影响受体细胞的代谢，进而使转移的靶基因无立足之地。如果载体不能分离，就不能获得更多的含有靶基因的载体。该载体没有切割位点，因此不可能插入外源靶基因。作为载体的必要条件，存在插入外源DNA片段(基因)的切割位点。它可以自我复制，并且可以复制带有插入的目标基因的遗传标记基因，用于重组DNA的鉴定和选择。载体脱氧核糖核酸必须是安全的，对受体细胞无害，或者不能进入受体细胞以外的其他生物细胞。载

6、体DNA的分子大小应适合体外提取和操作，如果太大，操作不便。事实上，天然存在的质粒DNA分子并不完全满足上述条件，只能在人工修饰后用于基因工程操作。质粒：一种裸露、结构简单、小的双链环状脱氧核糖核酸分子，它独立于细菌的类核脱氧核糖核酸，具有自我复制的能力。3。用于基因进入受体细胞的载体“分子转运体”，质粒，质粒：可以与插入的靶基因一起复制和复制，具有切割位点，并且具有标记基因，其可以通过含有氨苄青霉素的培养基来鉴定。第三，基因进入受体细胞的载体“分子转运体”表明没有危害，大肠杆菌是一种非致病性细菌，它分裂迅速，也容易从大量复制的个体中分离出来。质粒噬菌体的衍生物、动植物病毒等。向量的类型：3。

7、基因进入受体细胞的载体，“分子转运体”，概要，课堂练习，1。在关于限制性内切酶的陈述中，正确的是：(一)限制性内切酶是一种只识别GAATTC碱基序列的酶，乙、乙、丙限制性内切酶一般不切割自己的DNA分子，只切割外源DNA的限制性内切酶只存在于原核生物中，答案是：C2。(多选)在关于基因工程的叙述中，错误在于a、基因工程技术可以定向转化生物体的遗传性状并培育新的生物品种b、重组DNA的形成是在细胞c中完成的，目标基因必须通过载体导入受体细胞d，而质粒可以作为载体，而答案：BD，3。选择不属于质粒作为基因载体的原因有：一、复制(B)、多个限制性内切酶点C、标记基因D，它是环状DNA，答案是：D，磷

8、酸二酯键：磷酸二酯键：一个核苷酸脱氧核糖上的第三个羟基和下一个核苷酸脱氧核糖上的第五个磷酸羟基脱水并缩合成酯键，称为3，BACK，切割DNA分子时产生两个不同的末端， 限制性内切酶切：中轴，粘性端，粘性端，在G和A之间，大肠杆菌的限制性内切酶只能识别GAATTC序列，在G和A之间切。大肠杆菌的限制性内切酶能识别GAATTC序列，在G和A之间切。限制性内切酶什么是粘性端？限制酶，什么是粘性末端？什么是粘性末端？由限制性内切酶切割的两条单链脱氧核糖核酸的切口，带有几个突出的核苷酸，是互补的，并且彼此配对。这种切口被称为粘性末端。BACK，中轴线，被SmaI限制性酶切割：平端，平端，只能识别CCCGGG序列并在c和g之间切割，Sma，平端，什么是平端？当限制性内切酶从识别序列的中心轴切割时，两条单链DNA的切割是平的，这种切割称为平端。BACK，三个模拟操作：重组DNA分子的模拟操作，注意：这两个DNA分子的碱基对不是随机写的。首先，每个脱氧核糖核酸分子上两条链上的碱基应该互补配对；第二，在每个DNA分子中有一个G-A-A-T-T-C的碱基序列，它是EcoRI限制性酶的识别序列，并且有一个G-A的切割位点。标记基