亲免素加载的红细胞作为新药的传递系统.ppt

1、亲免素加载的红细胞作为免疫抑制药的新传递策略,目录,Abstract / 摘要,Introduction /介绍,Materials and methods/ 材料与方法,Results / 结果,Discussion/讨论,Abstract / 摘要,环孢霉素A（CsA ） 他克莫司（FK506 ）,FKBP12,CypA,从FKBP12RBC释放的FK506能被T淋巴细胞吸收，作为自由的药物抑制IL-2在体外表达; 实验结果：扩散性免疫抑制剂可以被红细胞摄取 ,亲免素靶向RBC可以被作为免疫抑制药的潜在传递系统,Introduction /介绍,FK506和CsA阻止了细胞核转录因子的移位

2、， “核因子和活化的T细胞”(NF-AT)。 FK506在体外的效力比环孢霉素大100倍，能经常抑制毒性发生，包括肾毒性、神经毒性、葡萄糖不耐性等 一个基于使用红细胞作为药物输送系统的有趣的策略已被提出，主要是基于两点：1）生理的相互作用在他克莫司或环孢素A与红细胞亲免素之间发生;2）将RBC作为药理学载体的可能性归因于细胞膜的开放和释放的独特能力。,Materials and methods/ 材料与方法,人体FKBP12的和亲环素A重组体形式的生产,1,2,重组蛋白质-药物结合研究,3,重组蛋白质载入人体红细胞,4,原生和FKBP12加载的红细胞的FK506结合能力评价,5,未加载和Cyp

3、A加载红细胞的CsA结合能力的评价,6,KBP12加载红细胞作为FK506传递系统的可行性,7,从FKBP12加载的RBC中释放的FK506 IL-2的表达抑制,Results / 结果,1,重组蛋白-药物结合研究,FKBP12- FK506结合点杂交分析。 FKBP12的不同数量被点在0.2um孔径的的硝酸纤维素膜上，进行点杂交分析。从左到右：FKBP12 10, 5 and 2.5 g/孔。,Results / 结果,2,FKBP12和CypA加载的RBC的特征,加载过程后细胞恢复。在加载过程结束中获得恢复细胞的百分比计算为FKBP12加载（a）和CypA加载RBC（b）。装载20，40和

4、80um的蛋白质细胞的恢复与未加载的细胞进行了比较。所得结果为5次加载实验的平均值。,Results / 结果,2,FKBP12和CypA加载的RBC的特征,细胞内rFKBP12（a）和rCypA（b）进入到工程红细胞中的浓度。125I-FKBP12（a）和125I - CypA（b）被加载到人类红细胞，恢复的放射性物质在不同的负载条件下（20，40和80um）用于估计包埋蛋白量的数量。结果是从3加载实验得出的平均值。,Results / 结果,3,评价原生和亲免素加载红细胞的药物结合能力,FKBP12RBC结合他克莫司的能力。该图显示FKBP12加载RBC与原生红细胞相比，在20，40和80

5、um的蛋白质浓度下他克莫司的结合能力。结果3次个实验所得的平均值。P值被称为原生红细胞。,Results / 结果,3,评价原生和亲免素加载红细胞的药物结合能力,CypARBC结合CsA的能力。在直方图中表示与未加载红细胞相比，加载红细胞在20，40和80um的CypA浓度下，CsA的结合能力。结果3个实验所得的平均值。P值被称为未加载红细胞。,Results / 结果,4,FKBP12的加载红细胞作为FK506的输送系统的适用性,加载细胞的稳定性。装载过程的细胞（加载和卸载RBC）在治疗6天之后被孵育，每个样品的存活曲线都被估计。,Results / 结果,4,FKBP12的加载红细胞作为F

6、K506的输送系统的适用性,FKBP12/FK506-加载红细胞在体外地药物释放。从工程红细胞丸稀释到全血直到60分钟，通过评估药物释放到血浆的片段，来评价FKBP12/FK506加载红细胞释放药物的能力。,Results / 结果,5,从FKBP12加载RBC释放的被FK506抑制IL- 2的表达,3H 胸苷掺入激活淋巴细胞。在表中，cpm值代表了在48小时中，3H-胸苷注入未激活的和分裂激活的细胞的速率。,Results / 结果,5,从FKBP12加载RBC释放的被FK506抑制IL- 2的表达,从PBL的所得RNA的RT - PCR分析显示，32的IL- 2的表达抑制在24小时内，在T细胞暴露到2 107 与他克莫司育培养的FKBP12的加载RBC