药物分析》芳酸及其酯类

1、第六章芳酸及其酯类药物的分析,Chemical structure & feature Identification Detection of specific impurities in,Analysis of Aromatic carboxylic acids & esters,Assay,Aspirin,Sodium aminosalicylate & Clofibrate,Aromatic carboxylic acids,水杨酸类,水杨酸 SA salicylic acid,阿司匹林aspirin,对氨基水杨酸钠PAS-Na,贝诺酯benorilate,双水杨酯salsalate,苯

2、甲酸类,羟苯乙酯 ethylparoben,丙磺舒 probenecid,苯甲酸benzoic acid,甲芬那酸 mefenamic acid,sodium benzoate,其他芳酸类,氯贝丁酯clofibrate,布洛芬ibuprofen,特点,均有苯环、羧酸或其酯 水杨酸类和苯甲酸类结构中的羧基直接与苯环相连 除了酸性基团外，各自具有本身的官能团 分子中苯环、羧酸和取代基的相互影响，使芳酸的酸性强度各有不同,紫堇色,赭色,米黄色,鉴别,三氯化铁反应,碱式苯甲酸铁盐（赭色沉淀） 加稀HCl，沉淀分解，生成游离,白色,布洛芬,重氮化偶合反应,具体方法见芳香胺类药物的鉴别 氧化反应,异羟肟酸

3、铁反应,甲芬那酸H2SO4深蓝色,随即变为棕绿色,水解产物的反应,分解产物的反应,UV特征吸收 IR吸收光谱,特殊杂质的由来与方法检查,Acetyl Salicylic Acid,副产物,SA,ASA,Aspirin,生产工艺,SA,溶液的澄清度 酚类和酯类,其他副反应产生酯类,易碳化物,炽灼残渣 重金属,PAS-Na,间氨基酚 Ch.P 样品3.0g用乙醚提取，加入H2O， 用HCl滴定液（0.02mol/L)滴定，生成 杂质HCl（转溶入H2O相，甲基橙指示剂）。滴定液不得过0.30ml USP HPLC法 C18 NaH2PO4(0.05mol/L)-Na2HPO4(0.05mol/L)

4、 -CH3OH(含氢氧化四丁基铵1.9g) (425：425：150) 254nm检测内标：磺胺,羟苯乙酯 供试品自身对照法BP（1998）反相TLC 高低浓度对比法 取羟苯乙酯丙酮液1.0%和0.01%，2ul，254nm查荧光，前一个任何第二个斑点的大小和强度不应超过后一个。,a. 杂质对照品法,方法： 供试品供试品溶液 杂质对照品对照品溶液,供试品,对照品,判断：供试品中所含杂质斑点不得超过相应的杂质对照斑点。 优点：同一物质，同一Rf值比较，准确度高、直观性强。 缺点：需要杂质对照品。,b.高低浓度对比法,方法：,判断：,供试品溶液所显杂质斑点不得深于对照溶液的主斑点（或荧光强度）,

5、控制杂质斑点个数，控制杂质种类,氯贝丁酯,对氯酚（0.0025%） 挥发性杂质（0.5%） GC法5%SE-30 2m160， N2FID 杂质以归一化法求得,含量测定,酸碱滴定法 Acid-base titration method 以ASA及其制剂为例 苯甲酸pKa 4.20 水杨酸pKa 2.98酸性较强,羧酸邻位-OH，吸电子基团，使酸性增加；并有氢键，更增加了其极性,因此，可采取直接滴定法,直接滴定法,pKa 36 的药物溶于中性醇,可直接用NaOH滴定 pKa 69 的药物要用非水溶液滴定法,中性乙醇：对指示剂(酚酞)而言为中性， 可消除滴定误差,乙醇作用：溶解ASA；防止ASA在

6、水溶 液中滴定过程易水解,本法特点：简单,注意点：若SA不合格，不宜采用本法,Aspirin 丙磺舒(Ch.P. BP. JP等) 苯甲酸(Ch.P等)均采用本法,水解后剩余滴定法 Residual titration after hydrolysis,USP23方法：取本品约1.5g，精密称定，准确加NaOH液(0.5mol/L)50.0ml，水浴上煮沸15min，放冷，以酚酞为指示剂，用H2SO4液(0.25mol/L)滴定剩余的NaOH，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml的NaOH液(0.5ml/L)相当于45.04mg的C9H9O4,剩余滴定时消耗酸量 V(ml) 同时做空白试验，消

7、耗酸量 V0(ml) Ch.P 00羟苯乙酯的Assay亦采用,反应物质之间的化学计量关系,滴定度计算,0.5,两步滴定法 Two-step titration,用于Aspirin片测定 片剂中有稳定剂,水解产物 水杨酸SA HAc,枸橼酸 Citric acid,酒石酸 Trataric acid,为了避免这些酸类的干扰，采用两步滴定法,Ch.P. 阿司匹林片,取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于阿司匹林0.3g)，置锥形瓶中，加中性乙醇(对酚酞指示剂显中性)20ml，振摇使ASA溶解，加酚酞指示液3滴，滴加NaOH液(0.1mol/L)至显粉红色，再精密加NaOH液(0.1

8、mol/L)40ml，置水浴上加热15min，并时时振摇，迅速放冷至室温，用H2SO4液(0.05mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正 每1ml的NaOH液(0.1mol/L)相当于18.02mg的C9H8O4,第一步：NaOH滴定所有的酸：ASA，CA，TA，SA，HAc,第二步,放冷后，用H2SO4滴定液滴定剩余的NaOH V； 空白滴定消耗H2SO4 V0 ；,(V0-V) H2SO4则为用于中和水解ASA所需的 NaOH,计算：称取10片重 1.8240g,CNaOH 0.1032mol/L,片粉重 0.5312g,C 0.05120mol/L,标示量 0.1g V 3.02

9、ml V0 20.18ml,直接水解后 两步 滴定法 剩余滴定法 滴定法,优点 操作简便 水杨酸干扰少 结果准确， 避免了游离 SA以及片剂 中稳定剂的 干扰,缺点 游离水杨酸 不能完全 不合格时结 排除干扰 果偏高,Ch.P 氯贝丁酯的Assay采用两步滴定法,双相滴定法 Titrimetry in two phases,Ch.P 2005用于苯甲酸钠的测定 苯甲酸钠为芳酸碱金属盐，易溶于水；苯甲酸不溶于水，不利于终点的正确判断 因此，利用苯甲酸能溶于有机溶剂的性质，采用双相滴定法,分出H2O层，置具塞锥形瓶， 乙醚层用H2O 5ml洗涤，洗液并入锥形瓶， 加乙醚20ml，继续用HCl滴定，

10、至水层显持续的橙红色,柱分配色谱-紫外分光光度法Column Partition Chromatogr.,ASA capsule 等制剂除用上述两步滴定法外，最好用色谱法，可以分离酸性杂质和辅料以及稳定剂等，经分离后同时测定ASA与SA 如USP用柱分配色谱-UV测定ASA Capsule,Column Partition Chromatography, CPC 担 体：硅藻土(Celite 545) 固定相：一定pH的缓冲水溶液 流动相：与水不相混溶的有机溶剂 (洗脱前必须先用水饱和),CPC-UV法测定ASA Capsule,SA测定 供试液制备 用CHCl3 50ml洗涤，弃去(洗去AS

11、A) 10ml冰HAc-水饱和乙醚液(110)(使紫色配位化合物被分解，SA析出) 洗脱液收集于已盛有10ml甲醇和2滴HCl的50ml量瓶中，继用30mlCHCl3洗，并稀释至刻度 SA对照品溶液： 75g/ml，取10ml 50ml量瓶中盛有： 10ml甲醇，2滴HCl和10ml冰HAc-水饱和乙醚液(110)，CHCl3至刻度,测定：306nm测定供试液和SA对照品液,SA与试剂生成紫色水杨酸铁配位化合物，在柱上移动慢，带窄，色泽较深 若有Fe3+洗下，黄色影响测定结果 消除干扰方法：迂底部拌有磷酸的硅藻土，生成不溶解的FePO4,A供试液 A对照品液,ASA+SA测定 供试液制备 洗脱

12、 5,25mlCHCl3 ，弃去CHCl3 洗脱 10ml冰HAc-CHCl3(110)*；85ml冰HAc-CHCl3(1100)，并稀释至100ml 对照品溶液 50g/ml 冰HAc-CHCl3(1100),CPC-UV法测定ASA Capsule,测定：280nm 空白：CHCl3,NaHCO3使ASA和SA成盐保留于柱上 用CHCl3洗脱的目的： 去除中性或碱性杂质 冰HAc酸化的目的： 使ASA游离，易被 CHCl3洗脱,含量测定计算公式,所取胶囊细粉中ASA(mg),CPC技术的类型,利用固定相酸碱性的不同进行分离 利用药物和固定相起化学反应而进行分离 利用生成离子对进行层析分离 单纯靠选择流动相进行分离,阿司匹林栓 Aspirin suppositories,测定法 咖啡因乙醇溶液4mg/ml,2.0ml,HPLC,血清中ASA&SA的测定,色谱条件 C18 5m 1504.6mm 甲醇-水-正丁醇(30:20:1) 经0.5 m 滤膜减压过滤后5 l H3PO4 超声脱气 237nm 内标：苯甲酸 血清样品的处理 血清样品100 l 加入HClO4(30%) 50 l 、不同浓度ASA& SA对照品稀释液、内标(各浓度均为10 g/ml混合2min离心进样,血清ASA，SA和内标物对照品色谱图,0.溶剂峰1.AS