细菌的分离、接种和培养.ppt

1、实验五细菌的分离、接种和培养，目的是实验原理实验材料实验台阶操作规范工作，一、目的是掌握从环境(土壤、水体、活性污泥等)中分离纯化微生物的方法和原理；反平板细菌纯种分离：稀释混合平板分离法、稀释涂布平板分离法和平板划线法接种技术在无菌操作技术自然段中， 不同种类的微生物大部分混在一起生活，为了满足生产和科学研究的需要，要得到某种微生物，必须从混在一起的微生物群中将其分离，得到只含有这种微生物的纯培养物。 得到这种纯培养物的方法称为微生物的分离和纯化。 为了得到纯粹的种类的微生物，一般来说，该微生物的营养和培养特性(微生物的营养、酸盐基度、氧等的条件)、对某种抑制剂的耐受力不同，或者某种环境条件

2、不同，因此，制作或设置选择性的培养基、或制作选择性的培养条件，来进行稀释涂布平板法、稀释混合平板法、洗涤器精制、二、实验原理、三、实验试剂和器材土壤样品(环境样品)牛肉浆培养基无菌试管、无菌三角瓶、无菌玻璃涂料棒、无菌吸管、接种环、无菌培养皿洁净台、(1)稀释混合平板法、四、实验顺序、1 .土壤稀释液的制备取土样品10g 将无菌水装入装有90ml的三角瓶中，振荡1520分钟，分散微生物细胞球，静置约2030秒，则成为10-1的土壤混悬剂。 另外取出放入了无菌水9ml的试管，作为编号102、103、104、105、106，用无菌吸管吸引无菌吸管101的土壤混悬剂l ml，放入编号102的无菌试管

3、，用喷涂的另一根吸管吸取10-2试管的土壤稀释液1ml，编号轻轻摇动均匀混合，即制成10-3的土壤稀释液时，必须每次更换(连续稀释)一根无菌吸管。 该法依次稀释成10-4、10-5、10-6等一系列稀释度菌混悬剂。 2 .将平板无菌培养皿编织成编号为10-3、10-4、10-5的培养皿，各重复3个编号，用无菌吸管1ml根据无菌操作要求，各吸引1 ml 10-5稀释液，分别放入编号为10-5的3个培养皿中。 用同样的方法分别抽取105稀释液1ml，放入编号104的3个培养皿中。 再各吸取1 ml 10-3稀释液，分别放入编号10-3的3个培养皿。 然后，在9个培养皿中分别放入15ml融化，蒸发制

4、冷到45左右的牛肉糊蛋白胨琼脂培养基，盖上盖子后，轻轻摇动培养皿使培养基均匀分布，放置在桌上，凝固后制成平板，整个操作过程应严格遵守无菌操作。 3、培养和待移植平板完全凝结后，将平板翻转37恒温箱培养2448小时，检测分离结果。 将培养后生长的各个菌落分别采集、接种在牛肉浆培养基的斜面上，放入37个恒温箱中进行培养，菌苔生长后，检查菌苔是否单纯，用显微镜涂片染色，检查是否为单一微生物，如果混入其他杂菌，则再次进行分离纯化，得到单纯的培养。 (二)稀释涂布平板法该方法与稀释混合平板法基本相同，无菌操作也相同，不同之处在于溶解牛肉糊膏培养基，在火焰旁注入培养皿，摇匀制成平板，然后用1ml无菌吸管分

5、别为10-4、10-5、10-6三管土壤稀释液(3)平板划痕分离法，制备土壤稀释液，注入平板，培养，选择菌落，接种和分离工具1的接种针2 .接种环3 .接种钩4.5 .玻璃涂棒6 .接种环7 .接种环8 .小解剖刀，转移到斜面上的常用接种方法；划痕接种点斜面接种时的无菌操作(1)接种灭菌(3) 引起菌苔(5)接种(6)堵塞绵栓，精制(平板划线法)通过逆平板划线培养菌落纯种(纯培养)，(1)斜面接种无菌操作技术(2)逆平板及平板划线接种，(1)斜面接种无菌操作技术，(2)逆平板及平板划线接种，(3)平板划线接种：等2 .建立从土壤中分离细菌的主要实验程序。 3 .如何检查平板上的某个单菌落是否纯粹培养4 .培养时为什么要反转培养培养皿？ 一、网络视频示范二、取出自己