生化检测系统性能验证

1、生化检验系统的性能检验，为什么要进行性能检验？医疗机构临床实验室管理处理法ISOl5189医学实验室质量和能力可识别标准两方面要求，设备在临床应用前必须进行性能验证：确定设备是否符合要求的性能指标，对检测结果的精准性起着决定性作用。 什么是性能评价？ 为了自己研究和开发检测方法，使方法的检测结果符合临床要求，必须对方法的性能进行详细、全面的实验。 此时的实验是性能的评价。 通常制造商完成。 什么是性能验证？ 证实他人和制造商的评价资料的几个主要性能。 通常由实验室自己完成。 对性能验证试验、对方系统，验证精度(accuracy)-EP15 -A精密度(precision)-EP5-A2线性范围

2、(linearrange )的指标。 什么时候进行性能验证试验？ 1、方法或系统首次在实验室使用2. EQA或PT结果不通过，采取纠正措施后3 .达到文件规定周期，在性能验证时首先建立满足的实验条件，使仪器的维护仪器校准室内质量控制试剂、校准品(有效期、批号等)人员(SOP )保证仪器一、精度验证性实验、基本概念、测量精度1 .测量精度通常用规定测量条件的标准离差、方差、离散系数等不精度的测量值来数字化表现。 2 .所规定的条件可以是测量的重现性条件、测量的中间精度条件或测量的重现性条件。 3 .测量精度用于定义测量重复性、中间测量精度和测量再现性。 基本概念是在相同的测量计程仪程序、相同的操

3、作人员、相同的测量系统、相同的操作条件和场所、重复测量的一系列测量条件下测量测量精度，在短时间内重复测量相同或相似的被测量物。 1 .临床化学上的所谓批内精度。 2 .在做评估体外诊断医疗设备时，再现性条件通常表示几乎不变的测定条件(称为再现性条件)，产生的测定结果为最小变异。 3 .重复信息有助于故障排除的目的。 基本概念、测量重现性：在不同场所、不同操作者、包含不同测量系统的测量条件下，反复测量同一或类似的被测量对象的测量精度。 1 .临床化学上所谓的室间精度。 2 .在做评估体外诊断医疗设备时，通常再现性条件表示最大变化的条件(被称为再现性条件)，在遇到独立的实验室间的比较结果的测定结果

4、的变异、例如室间对照修正图像中发生(例如能力对照)。 基本概念，3 .每个测量系统可以使用不同的测量计程仪程序。 4 .必须实际提出条件变更还是不变更的说明。 基本概念、中间精度一系列测量条件下的测量精度。 这些个条件包括对同一测量计程仪计划、同一地点、同一或类似的被测量对象长时间重复测量，但其他相关条件的变更。 1 .变更和未变更的条件，特别是校准物、试剂批号、设备系统、操作人员和环境条件等变量必须在实际水平上规定。 2 .在体外诊断医疗设备的评估中，一般的中间精度条件代表医疗设备长时间的实际使用条件。 文件是CLSI (原NCCLS )公布的EP5-A2文件定量测定方法的精度性能评价批准指

5、南第二版、实验方法、批内精度在相同的测定条件下，在最短时间内(总是在相同的测定批内)测定20次相同的样品，由此算出批内精度实验方法、批次间精度在一定时间内(一般是连续20个营业日)对同一样品(总是质量管理品)，每天测定1次，每次测定2份，由此算出批次间精度。 如果时间紧迫，则变更为测定5天，每天分2次进行，1次重复测定2次，每次至少以2h间隔，1天可获得4个数据。 由此计算总精度。 实验样品的选择，1 .实验样品必须稳定，其基质组成应尽量与临床样品相似。 一般采用临床实验室收集的稳定和冷冻储藏的血清2 .实验样品的浓度尽可能选择接近厂家宣言性能的浓度或接近本项目医学决定水平的浓度。 3 .通常

6、选择稳定性好的血清基质的质量控制物作为实验样品。 样本浓度的选择如下：1.当与精密度的大小和样本浓度有关的样本浓度高时，标准差的绝对值大，但离散系数往往小。 因此，在做评估精度时，建议做评估高低2浓度的精度。 如果两种浓度的精密度有显著性差异，建议增加到三种浓度。 样品浓度的选择，2 .选择的浓度在测定范围内应该是有医学意义的值，即至少一个浓度应该在医学决定水平左右。 为了获得较小的精度，请不要选择高值的样品或超出测量范围。 也不要选择接近最低检测限的样品。 此时得到的精密度经常变大。 如果没有医学决定水平，参考区间的上限左右可以选择一个浓度。 另外，根据检查项目的性质在线性区间内选择一个值。

7、 试剂和校准品的要求，在所有阶段，尽量使用相同的条件，使用相同种类的相同批号的试剂和校准物，尽可能只进行一次校准。 使用不同批号的试剂和多次校准会增加检查结果的变异程度。质量控制、检验时至少要对云同步测定一个质量控制品。 质量管理品的结果超过规定的失控限制时，无论实验结果是否满意，都必须废弃，再次进行实验取得实验数据。 保存所有的质量管理数据和失控处理履历。 本实验前操作人员必须熟练掌握，1 .操作步骤2 .维护步骤3 .样品准备4 .校准和检查步骤、数据收集、分析前，检查数据是否有偶然的错误造成的离群点(outliers )。 离群值的标准：任意结果和总平均值的差超过4个标准差。 为了能够收

8、集至少20个有效的数据，除了补充由于质量管理的失控而增加的测试，还应该增加由于离群点不能用于精度的补正计算而增加的测试次数。 进行数据收集、批内精度评价实验时，一次只有一个离群值。 如果没有收到两个以上的资料，应该怀疑是方法不稳定，还是操作人员不习惯。 此时，不使用这次的测试数据，在检查问题点解决问题之后，应该重新开始评价实验。 必须保持离群点和室内质量控制失控的记录。 对结果进行分析，修正平均、标准离差、离散系数。 从CLIA 88容许误差表检查评价项目的容许误差范围。 判断标准，批量内精密度CV值要求低于1/4 CLIA 88容许误差。 批量间精度CV值要求低于1/3 CLIA 88容许误

9、差。与CLIA 88容许误差范围无关的项目： EQA的容许误差试剂说明书提供、二.精确度验证性实验、基本概念、精确度(accuracy )是指检查结果与被测真实值的一致度。 精确度(truness )是指从大量的检查结果中得到的平均值和真值的一致度。 通常用统一修正量的“偏差”表示。 偏压(bias )是指测定结果的期待值和容许值的不同。 用修订测量单位或百分比表示，平均值和参考值的差异。 基本概念、误差(error )是指相对于真值或可接受的、与预期的真值或参照值的偏离，分为随机误差和系统误差。 总误差(total error )是某实验室用某方法对多次独立检验样本进行分析的结果值与营销对象

10、值之差在某置信区间内的最大值。包含随机误差和系统误差，是不正确的推定值。 文件依据： CLSI公布的EP15-A文件用户对精度和准确性性能的验证指南、实验方法、卫生部临床检验中心室间质评等参加了有质量跟踪的校准物质、试验方案，对权威机构提供的室间质量控制物进行检验，检验结果与已知的目标值和允许限度进行比较。一定值的参考物来源、1 .参考方法或决定方法中不配合一定值的新鲜冰冻人血清或者其他成分的人物质2 .能力对照试验得到的参考物3 .制造商提供的精准性确认物或者质量管理物4 .实验室间质评价物5 .第三方提供的以几种不同的方法决定了值的物质。 试验方案选择适合评价的检查方法最容易得到的材料。

11、要求测量至少两个水平，所选水平可以表示方法的最低和最高测量范围。 实验前将分析物与一盏茶混合，用实验方法重复测定2次，将检查结果与说明书的显示值或营销对象值对照，补正偏差，以CLIA88的1/2为评价基准，偏差小于CLIA88的1/2，认为检查系统的偏差在临床上是可接受的水平。 三、线性范围和可报告范围验证性实验、基本概念、线性范围作为实验系统的最终分析结果可接受的线性浓度范围，此时的非线性误差应低于容许误差。 线性是在预定测量范围内将测量结果与样本中的分析物体的量直接成比例的能力。 基本概念、分析测定范围是直接测定标本的方法，在稀释、浓缩或其他预处理等过程中，测定结果的总误差不需要达到所要求

12、的分析物浓度范围。 临床可报告范围(clinical reportable range )是指方法可以采用标本稀释、浓缩或其他预处理扩展直接分析测定下的分析物数值的范围。文件依据、CLSI公布的EP6-A文件定量测定方法的线性评价、仪器要求、需要良好的测定精度，不存在明显的手机污染等。 仪器要定期维护和校准，保证正常状态。根据试剂及校准品的要求，试剂必须注意试剂的有效期及批号，采用使不得过期试剂或不同批号的试剂。 校准品可采用评价试剂和定径套校准品。 校准品的使用严格按照产品说明，仪器的校准程序和间隔按照本室的标准操作程序进行。 样品类型的选择，为了避免基质效应对结果的影响，所选样品必须与临床

13、实验样品相似。 不能使用溶血、脂血、黄疸、含有特定药物的样品等含有对测定方法有明确干扰作用作用的物质的样品。 样品浓度应包括试剂厂家提供的试剂可达到的线性范围。 收集临床检验中高样本浓度接近预测上限的患者血清(h )和低样本(l )，若不能收集低样本，可用生理盐溶液或蒸馏水代替。 2 .将h和l的样品以：1L、3L 1H、2L 2H、1L 3H、1H的关系分别调制(可以根据需要改变比例)并混合，形成系列评价样品。 在进行线性范围样品测定、线性范围确立的情况下，进行7-11个浓度水平的样品测定，在对每个样品重复测定24次的线性范围进行验证的情况下，进行5个浓度水平的样品测定，用1个批量测定完成实

14、验，各样品至少重复测定2次，测定顺序为拉如果测量方法本身存在明显的手机污染，请根据情况采取适当的措施，尽量避免对测量结果造成影响。 分析线性范围的结果，以期待值为横坐标，以实测值为纵坐标进行线性回归，得到直线回归方程YaX b，a在0.971.03的范围内，r2 0.95。 报告范围样品的测定，可收集接近线性范围上限的患者样品血清。 实验操作以生理盐溶液或蒸馏水为稀释介质，每稀释浓度测定2次，取平均值与理论值进行了比较。给出试剂盒说明书制造商提出的稀释度时，只需直接验证其提出的稀释度即可，无需验证其他倍数。 如未给予推荐稀释度，则根据工作实际需要进行稀释。范围判定指标及判定基准，判定指标： R

15、=检测平均/期待值*100%判定基准： 80%R120%偏向容许误差范围内。 4 .分析灵敏度验证性实验、基本概念、检测下限(LLD )是对应于样本可以一次检测到的非空白检测响应量的分析物的量。 功能灵敏度(FS )是指检查系统可定量报告分析物的最低浓度。 所谓空白对照限制(LoB )，是在规定的可能性条件下观察到的空白对照样品的最大检测结果。 所谓检测低值(LoD )是指能够在预定可能性条件下检测的样本中的分析物的最小量。 文件根据CLSI公布的EP-17A文件进行灵敏度性能评价。 功能灵敏度试验计程仪程序在稀释校准品或质量控制品后，在机器上分别对不同浓度的样品连续测定20次，补正平均、标准

16、离差和离散系数，将不精度(cv )为20时限制检验样品具有的平均浓度作为功能灵敏度。 5 .选择了抗干扰验证性实验、样品选择、临床混合血清1例。 不能使用溶血、脂血、黄疸或含有特定药物的样品。 样品浓度请尽量选择本项目正常参考区间内的浓度。 根据干扰物的确定、临床样品的特点，实验选取的干扰物可结合胆色素、游离胆色素、脂肪乳、维生素C(Vc )、血色素。 样品制备、各系列的干扰作用样品根据实验要求制备4个不同浓度的样品血清，从低高度、高开始测定5次循环，修正每个浓度的平均值与未添加干扰作用物的样品的相对偏差，求出再现性的离散系数。 另外，在相对偏差为15%以下、重复性离散系数为10%以下的情况下

17、，认为对应的干扰物浓度不对测定结果造成影响。 6 .验证参考区间验证性实验、实验目的：已知参考区间在本实验室中的应用可接受性。 实验方法，1 .从健康者中提取20个参考个体(最好能复盖各年龄层)2.按照实验室的标准操作规程检查样品3 .发现应废除离群值，换成新的参考个体，确认测试结果中不含离群值如果两个或更多示例超过限制，则进一步选择20个参考个体来进行验证，如果一个或更少的检测值超过已知的参考限制，则接受已知的参考时段。 如果两个或更多个样本超过参考限制，应重新评估所用的分析过程，考虑到整个两个样本的生物学特征可能存在差异，应考虑是否按照较大的研究指南建立自己的参考区间。 实验的要点是，只要绝对不需要，筛选“健康者”的参考个体。 可能需要的儿科和老年人的研究等。 7 .实验室内部各仪器的对比实验、文件依据： CLSI (原NCCLS )发布的EP9A文件采用患者样品进行方法学比较和偏倚评估的批准指南、样品的准备；1 .在整个实验中，保证需要比较的仪器处于良好的工作状态； 在全面