Feulgen反应和Brachet反应.ppt

1、一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料和方法 四、实验结果 五、讨论 六、作业,实验报告格式：,不会写实验原理（乱抄乱写断章取义）。 实验现象、结果的叙述不清楚、不准确。 讨论没有主体，缺乏逻辑性，句子不完整。 作业没有按要求填写。,讨论：至少2次！ 作业：与实验结果内容重复？,负相差物镜（Negativecontrast）用缩写字母“N”表示，正相差物镜（Positive contrast）用缩写字母“P”表示，由于吸收膜对通过它的光线的透过率不同，可分为高、中、低及低低，如Olympus光的透过率分为：7%、15%、20%、40%四个等级，因此分为高（High略写为H），中（Medium

2、略写为M），低（Low略写为L）及低低（LowLow略写成LL）四类，构成了负高（NH）、负中（NM）、正低（PL）和正低低（PLL）四种类型相差物镜，这些字母符号都写在相差物镜的外壳上。可根据被检物体的特性来选择使用不同类型的相差物镜。,实验二 细胞化学,多糖的显示PAS反应 核酸(DNA及RNA)的显示法,细胞化学是利用特殊的试剂与细胞的特定成分其化学变化引起颜色反应，并用显微镜鉴别所示物质成分的性质和位置的方法。,一、多糖的显示PAS反应,（一）实验目的 （二）实验原理 （三）实验操作 （四）作业,（二）实验原理,用具有氧化作用的过碘酸处理使多糖产生游离的醛基， 醛基与Schiff试剂结

3、合可形成紫红色的化合物。因此在有多糖的部位形成紫红色的化合物。,（三）实验操作,1、取马铃薯块茎切成薄片，浸入过碘酸溶液10分钟； 2、用70的酒精冲洗1次； 3、将薄片放入Schiffer试剂中2025分钟； 4、取出放入还原液1分钟； 5、70的酒精冲洗1次； 6、将薄片放在载玻片上吸去酒精，加上盖玻片，镜下观察。,实验结果：块茎组织细胞内可见到紫红色或深红色淀粉颗粒。,（四）作业,1、写出PAS反应的试验原理，绘制实验结果，并描述。 2、对于PAS反应的对照实验，你认为应该怎样设计，请写出完整的实验步骤。,二、核酸(DNA及RNA)的显示法,（一）实验目的 （二）实验原理 （三）实验操作

4、 （四）作业,（二）实验原理,1、Feulgen反应的原理 根据DNA经弱酸水解后，打开了嘌呤碱基和脱氧核糖连接的键，在脱氧核糖的一端形成游离的醛基。这些醛基就在原位与Schiff试剂结合，形成紫红色的化合物。所以凡有DNA的部位，就呈现为紫红色。,2、Brachet反应的原理,利用核酸分子上的磷酸根和碱性染料形成盐键而在原位沉淀显色的原理，根据DNA和RNA对碱性染料的亲合力有差别，用Unna试剂进行选择性染色是显示核酸的方法之一。在Unna试剂中甲基绿与空间构型完整的DNA亲和力高，并且甲基绿分子中的两个含N基团带正电荷正好与DNA分子的负电基团相结合，这样DNA被Unna试剂中的甲基绿染

5、成绿色或蓝绿色。而RNA则被Unna试剂中的派咯宁（Pyronin G ）染成红色。,甲基绿,派洛宁,（三）实验操作,取小麦根尖、蚕豆根尖和洋葱内表皮于浸入预热至60的1N Hcl中水解，时间分别为8分钟、2分钟、10 min。 转入Schiff液中染2025 min，待根尖变为深红色； 在新配亚硫酸水中洗两次，每次 1 min； 水洗 2 min，在载玻片上切下深红色根尖备用； 加一滴45HAc于载片上，将根尖放入，加上盖玻片压片，轻轻敲打，镜下观察。,1、Feu1gen反应,2、 Brachet反应,撕取洋葱鳞茎内表皮一块置载玻片上； 加一滴Unna试剂，染30min； 用自来水冲洗1次，加上盖玻片，用滤纸吸干水分，镜下观察。 在显微镜下可观察到DNA所在的核和染色体染成绿色或蓝绿色，含有大量RNA的核仁呈鲜红色，含有RNA的细胞质呈淡红色。,（四）作业,分别写出Feulgen反应和Brachet反应的原理，并分别绘图描述所观察到的试验结果。 比较洋葱表皮细胞经Feulgen反应和Brachet反应后显色的差异，说明产生差异