微生物学检验沙门氏菌属.ppt

1、肠道杆菌,沙门菌属,沙门菌属,是寄生于人类和动物肠道中，生物学性状相似的革兰阴性杆菌,沙门菌属,肠道沙门菌,邦戈沙门菌,肠道亚种 萨拉姆亚种 双亚利桑那亚种 亚利桑那亚种 豪顿亚种 英迪加亚种,致病沙门菌多为 肠道亚种,形态染色,革兰阴性杆菌，无芽孢、无荚膜、有周鞭毛，多数菌株有菌毛,沙门菌,培养特性,兼性厌氧、营养要求不高 在肠道选择培养基上呈无色半透明S型菌落菌落，与志贺菌菌落相似。 SS平板无色菌落，产H2S菌株，菌落中心呈黑色 Mac平板无色菌落 EMB平板无色菌落,生化反应,氧化酶试验（） 分解葡萄糖、不分解乳糖 KIA：KA（伤寒沙门菌产酸不产气KA） MIU： IMViC： 赖氨

2、酸脱羧、鸟氨酸脱羧：,抗原结构,O抗原：化学成分为脂多糖；耐热；与相应抗体结合出现颗粒状凝集；沙门菌分群依据。 H抗原：化学成分为蛋白质；不耐热；与相应抗体结合出现絮状凝集；沙门菌分型依据。 Vi抗原：位于菌体外层；抗原性强，相应抗体可作为筛选带菌者指标；不耐热；能阻止O抗原与相应抗体结合；伤寒沙门菌和丙型副伤寒沙门菌有Vi抗原，有VW变异。,几种沙门菌的抗原组分,变异性,S-R变异： H-O变异： V-W变异： 相位变异： 耐药性变异：,抵抗力,对理化因素抵抗力弱 尤其对酸敏感 对消毒剂敏感 易产生耐药性,临床意义,致病物质：菌毛、内毒素、Vi抗原 所致疾病： 肠热症 食物中毒 败血症 慢性

3、肠炎 免疫性：病后免疫力牢固，以细胞免疫为主,肠热症发病过程,伤寒杆菌和副伤寒杆菌,小肠黏膜,经口,肠壁淋巴组织,被吞噬细胞吞噬,进入血液,菌血症,骨髓,脾,肝,胆囊,肾,小肠,随尿液排出,随粪便 排出,再次侵入 肠壁，引 起并发症,潜伏在胆囊中,随粪便排出,带菌者,沙门菌感染的预防,加强饮食卫生，切断传播途径 发现并及时隔离病人 接种伤寒和副伤寒沙门菌疫苗进行特异性预防,微生物学检验,标本采集：根据不同疾病采集不同标本 肠热症的标本采集 发病第12周：血液 发病第23周：粪便、尿液 肠热症全程：骨髓,检验程序,粪便、尿、残余食物,SS、Mac、血平板,可疑菌落,KIA MIU、IMViC,报

4、告结果,增菌 （GN、SF）,菌落涂片染色,A-F多价血清 玻片凝集,初步鉴定,最终鉴定,系统生化反应,因子血清凝集,血液、骨髓,增菌 （胆盐葡萄糖肉汤）,检验方法培养,血液、骨髓：将待检标本接种胆盐葡萄糖肉汤增菌培养，每日观察，出现浑浊等现象，及时转种 血平板和肠道选择平板。 粪便：接种SS、Mac或EMB分离培养，若标本含菌量少，可先增菌。 尿液：尿液离心后，取沉淀物接种血平板和肠道选择平板。,检验方法生化反应初步鉴定,触酶、氧化酶、硝酸盐还原 苯丙氨酸、葡萄糖酸盐 KIA：K A +/- +/- MIU： 赖氨酸脱羧、鸟氨酸脱羧,检验方法血清学鉴定,首先用A-F多价O诊断血清进行初步鉴定

5、； 再用O因子血清鉴定到群（A、B、C、D、E、F群）； 再用H因子第2相血清辅助鉴定型； 若生化反应符合沙门菌，A-F诊断血清不凝集，应考虑是否有Vi抗原，将待检菌液加热后，再进行A-F多价O血清凝集试验。,A-F多价O诊断血清 凝集试验,凝集,O因子诊断血清 凝集试验,H因子诊断血清 凝集试验,凝集,初步鉴定,鉴定血清群,鉴定血清型,沙门菌鉴定需注意的问题,玻片凝集试验需注意菌液浓度、反应温度 生化反应符合，玻片凝集试验阴性，应考虑是否有Vi抗原的存在 抗原结构相同，生化反应不同，应加做生化反应 生化反应符合，玻片凝集试验阴性，无Vi抗原，应：重新观察生化反应；传代以恢复原有抗原性。,肠热

6、症不同标本细菌培养情况,血清学诊断肥达反应,原理：用已知伤寒沙门菌O、H抗原和甲型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌、丙型副伤寒沙门菌H抗原与病人血清作半定量凝集试验，以测定受检血清中有无相应抗体及其效价。 意义：协助诊断肠热症（伤寒与副伤寒）,肠热症病人血清抗体出现情况,肥达反应结果判定： O效价1：80 H效价1：160 副伤寒H效价1：80 O与H抗体的诊断意义： O、H效价均升高：已感染伤寒 O、H效价均低于正常值：未感染沙门菌或免疫力低下 O升高、H正常：某型沙门菌感染早期 H升高、O正常：以往接种过疫苗或非特异性回忆反应 双份血清的肥达反应： 后一次较前一次抗体效价增高四倍以上，有诊断

7、价值,血清学诊断肥达反应,生理盐水, 待检血清,诊断抗原,1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640,伤寒O效价 1:160 伤寒H效价 1:320 甲型副伤寒H效价 1:20 肖沙门菌H效价 1:20,诊断意义：感染伤寒沙门菌,伤寒O效价 1:80 伤寒H效价 1:20 甲型副伤寒H效价 1:160 肖沙门菌H效价 1:20,诊断意义：感染甲型副伤寒沙门菌,沙门菌鉴定依据,沙门菌鉴定主要依靠生化反应和血清学诊断 肠道选择平板上无色半透明菌落 KIA：KA +/- MIU： / 与A-F多价O诊断血清和相应O因子血清、H因子血清凝集 注意Vi抗原的存在；注意抗原结构相同的

8、菌株，应加做生化反应进行鉴别,伤寒带菌者的检测,从标本中分离出病原菌 血清中检出Vi抗体，效价1：10,几种沙门菌的主要生化反应,沙门菌菌落,耶尔森菌属,鼠疫耶尔森菌,形态染色：革兰阴性球杆菌，两端浓染，有荚膜，无芽孢，无鞭毛。在陈旧培养基或3NaCl中呈多形性。,培养特性,兼性厌氧 营养要求不高 最适温度2530 在肉汤中形成的菌膜可呈钟乳石状下垂。 在血平板形成柔软、黏稠菌落,生化反应,氧化酶 苯丙；葡盐 分解葡萄糖产酸不产气 IMViC： 动力 赖氨酸、鸟氨酸脱羧均 脲酶 明胶液化,临床意义,致病物质：鼠毒素、内毒素、荚膜等 所致疾病：甲类传染病鼠疫，为人畜共患的传染病 传播途径： 鼠鼠

9、 ； 鼠人 ；人人 病后免疫力牢固,微生物学检验,及时上报疫情 专业实验室，需特殊的防护措施 临床标本：血液、痰、淋巴结穿刺液 涂片染色镜检：革兰染色和美兰染色 分离培养：无污染标本可直接接种血平板 初步鉴定： 菌体形态、菌落特征、肉汤中生长特征、 KIA：KA ；MIU 最终鉴定： 噬菌体裂解试验、动物实验、免疫学方法等,小肠结肠炎耶尔森菌,形态染色： 革兰阴性球杆菌 25有周鞭毛，37则无动力 无芽孢，无荚膜,培养特性,兼性厌氧 营养要求不高 440均能生长，最适温度2028 在肠道选择平板上呈无色不发酵乳糖、扁平小菌落,生化反应,脲酶： 鸟氨酸： V-P试验： 25； 37 ,临床意义,致病物质：侵袭力、肠毒素 所致疾病： 经污染的食物、水通过肠道感染，引起小肠和结肠炎。,检验程序,粪便、残余食物,NYE、Mac或SS,乳糖不发酵菌落,KIA MIU,报告结果,菌落涂片染色,温度生长试验 （动力、V-P）,初步鉴定,最终鉴定,系统生化反应,血清学分型,冷增菌,25和372448小时,主要鉴定特征,嗜冷性 4增菌3周可分离纯化 动力：25，37 V-P试验： 25； 37 脲酶： 鸟氨酸