层 析ppt课件.ppt

1、层析，CHROMATOGRAPHY，1，把握：色谱分析法的概念，熟悉一般原理凝胶色谱分析法的基本原理色谱分析法过程以及柱的要求：色谱分析法技术的分类凝胶色谱分析法的特征凝胶的结构和性质了解：凝胶的选择柱，样品，洗脱剂的选择凝胶的保存， 利用混合物中各成分的物理化学性质的差异(溶解度、分子极性、分子大小、分子形状、吸附能力、分子亲和性等)，使各成分集中分布在支撑体上的不同区域，从而分离各成分。 3、库吉卜赛人历史，古罗马人使用混合染料(类似于放射纸色谱分析法)，1903(1906 )年，米歇尔塔什维特使用色谱分析法1931年，Kuhn使用柱色谱分析法类胡萝卜素1941年， Martin和Syng

2、e提出了分配色谱1941年的Martin和James发明了气体色谱法1955年，诞生了第一个商品气体色谱法，显示了现代色谱分析法分析的建立1956年，Stahl系统是薄层色谱法(TLC )，4，1958年， Stein和Moore开发了氨基酸分析修订，确定了核糖核酸的分子构造的Horvvath和Huber等人在高速液相色谱法(high-performanceliquidchromatography，HPLC )修订1975年，Small等人在离子色谱分析20世纪80年代， 超临界色谱分析法20世纪90年代，提出阳离子电泳毛细管的技术并用、大分子色谱分析法分离、色谱分析法制备有望进一步发展，5、

3、色谱分析法进程有两个相，一个称为固定相，另一个称为移动相。 因为各成分受到的固定相的电阻和移动相的推力的影响不同，所以各成分的移动速度也不同，各成分被分离。 6、7、2 .色谱分析法技术的分类，1 .按照两相所处的状态，以液体为流动相的色谱分析法称为液相色谱分析法，以气体为流动相的色谱分析法称为气相色谱分析法。 该固定相可以是以固体为吸附剂的固定相和以涂布在固体载体表面的液体为固定相的两种状态。8、色谱分析法、气相色谱分析法、液相色谱分析法、气固色谱分析法；gas-solidchromatty 液固色谱分析法(liquid-solid chromatography )、液液色谱分析法(liqu

4、id-liquid chromatography )、9、2 .色谱分析法分配色谱(partition chromatography ) -不同成分的流动相与固定相中的分配系数不同10、离子交换色谱(ion-exchange chromatography ) -利用络离子交换剂和各成分间的络离子亲和性的不同进行色谱分析法分离的方法。 凝胶色谱分析法(gel chromatography) -利用不同成分间分子大小的差异，利用通过凝胶介质时受到的块作用的差异进行分离的方法。 亲和色谱法(affinity chromatography) -利用生物大分子间特别有亲和力的不同进行分离纯化的方法。 列

5、色谱分析法(colum chromatography) -将固定相放入色谱分析法列中，将样品移动到单向式中，通过各成分与流动相一起移动进行分离的方法。 12、纸层分析(paper chrmatography) -以纸为液体载体，将样品点展开到纸上直至分离鉴定的方法。 薄层色谱法(thin layper chromatography) -将适当的吸附剂在玻璃板或其他材料薄板上铺上薄层，将样本点向上展开以达到分离鉴定的方法。 13，3 .色谱分析法的一般原理，14，1 .分配系数(Partition chromatography )混合物在色谱分析法过程中色谱分析法技术无论采用哪两种状态的相(流动

6、相和固定相)都能取得分配平衡，一种物质在两个特定相中的分配程度15、分配系数-一种物质被分配到两个特定的相中，特定温度下的该系数的值为一个常数，即固定相中的：溶质的浓度Cs K=溶质的流动相中的浓度Cm，16，有效分配系数：定义为一个相中的化合物的总量除以其他相中的总量时，实际上不同的层析机理不同，吸附层析中k为吸附平衡常数的分配色谱，k为分配系数的离子交换色谱，k为交换常数，17，分配系数k的值大，表明物质在色谱分析法被固定相吸附，流动相移动速度慢，在固定相中残留时间长，洗脱液出现峰。 当分配系数k值小时，该物质在洗脱液中迅速出现峰。 18、从混合物中分离纯化的生物物质的纯度取决于混合物中各

7、成分的k值的差异程度。 如果混合物中的各成分的k值大不相同，则可以比较容易地分离混合物中的生物物质。 相反，k值的差较小，难以分离混合物中的生物物质。 19，2 .探讨层析中的迁移情况采用常规平衡过程研究方法，将层析柱分成几个连续部分，各系统达到平衡。 理论板数(n ) :在色谱分析法柱中连续添加溶剂，化合物在流动相与固定相中不断分配平衡，发生的平衡次数称为理论板数。 20、凝胶色谱分析法Gel Chromatography，21，一、定义、凝胶色谱分析法是通过具有一定孔径的多孔物质根据被分离物质的分子尺寸进行分离的一种方法。 也称为凝胶过滤、分子筛过滤或排阻色谱分析法。 22、主要反应历程为

8、分子筛效应，分离的物质在凝胶柱中流动时，根据各成分的分子大小，凝胶受到的块摇滾乐作用不同，各成分在凝胶柱中的移动速度不同被分离。 23、2 .基本原理、流动相(洗脱液)固定相(凝胶)原理：被分离物质中各成分的分子量不同。 24、进入具有一定孔径的凝胶柱后，大分子不能进入凝胶的空穴，排出到外面，小分子能进入凝胶的空穴，加入洗脱剂后，大分子随洗脱剂从凝胶的空穴洗脱，其流速快，小分子物质从上面凝胶的空穴洗脱26、27、小分子在扩散作用下进入凝胶粒子内部滞留，大分子排出凝胶粒子外，迅速通过粒子间。 28、凝胶色谱分析法过程的数学关系，柱床体积(VT )即凝胶体积及粒子内外间隙体积的总和。 VT=1/4

9、 D2h D其内壁的直径h为凝胶色谱分析法柱地板的高度。 溶出体积(Ve )是欲分离的物质在层析柱溶出所需的洗脱剂的总体积。 外水体积(VO )是存在于柱床内凝胶外面空隙间的水相体积，相当于一般的色谱分析法中流相的体积。 30、内水体积()即凝胶粒子内部所含水相的体积可以由干凝胶粒子重量和吸水重量求出。 凝胶干体积()、31、32、与溶出体积的关系，()、33是样品成分的分配系数，也可以说是分子量不同的溶质在凝胶内部和外部的分配系数。 只与分离物质分子的大小和凝胶粒子的细孔的大小分布有关，与柱的长度和粗细无关，也就是说每种物质是一定的，这与柱的物理条件无关。 可以通过实验求出。 Ve是实际测定的溶出体积。 Vo可以通过用不滞留在凝胶中的大分子物质的溶液(优选Hb、为了观察墨水等而有颜色)进行实测来求出，Vi可以由gWr求出(g为干凝胶重，单位为克，Wr为凝胶的吸水量为ml/g