实验五血红蛋白含量的测定、血型鉴定.ppt

1、实验五：血红蛋白含量的测定、血型鉴定、实验目的，掌握血红蛋白的测定方法；学习血型鉴定的基本方法，观察红细胞凝集现象，掌握ABO血型鉴定的原理。为了确定血红蛋白的重要性，成年男性的人血红蛋白参考值为13-15g/dl；成年女性：11-14g/dl；儿童：(取决于年龄)12-14g /dl。临床意义：它类似于红细胞的增加或减少。高原居民的血红蛋白浓度普遍高于平原居民，这是机体适应低压环境的一种现象。一般来说，在疾病条件下，血红蛋白的增加或减少与红细胞的变化是平行的，即引起红细胞增多症的疾病也会增加血红蛋白的含量。红细胞减少的疾病也会降低血红蛋白含量。当贫血发生时，血液中的红细胞数量和血红蛋白浓度会

2、有不同程度的下降，但它们的变化比例不一定相同。有时红细胞的数量可以减少很多，但是血红蛋白浓度的减少相对不太明显，这在大细胞贫血中发现，因为单个红细胞中包含的血红蛋白的量大于正常人。相反，有些红细胞减少不多，但血红蛋白浓度明显降低，如缺铁性贫血。这是因为每个红细胞的血红蛋白含量与正常相比显著降低，所以血红蛋白的降低程度比红细胞的更显著。根据检测结果，有必要分析原因，做出准确的诊断和治疗。基本原理，血红蛋白是红细胞的主要成分。正常情况下，每个红细胞都含有一定量的血红蛋白。血红蛋白是由珠蛋白和血红素组成的结合蛋白。血红蛋白可以与氧结合形成氧合血红蛋白，也可以与一些物质相互作用形成各种血红蛋白衍生物。

3、它们具有特定的颜色和吸收光谱，可用于某些变性血红蛋白血症的诊断和临床血红蛋白的定量测定。测定血红蛋白含量的方法很多，实验中常用比色法。原理是在一定量的血液中，血红蛋白被少量的盐酸转化为血红素，呈现稳定的棕色。用水稀释后，与标准颜色进行比较，计算每100毫升血液中血红蛋白的克数。正常成年男性平均每100毫升血液含量为14.4克，女性平均每100毫升血液含量为13.1克。实验原理-血型鉴定，血型一般是指红细胞的血型，它是根据红细胞外表面的特定抗原(红细胞膜中嵌入的糖蛋白和糖脂)来确定的，而红细胞的血型是由遗传决定的。抗体或凝集素存在于血清中，与红细胞的不同抗原反应，产生凝集，最后溶解。由于这种现象

4、，我们必须注意在输血前识别血型，以确保安全输血。一、ABO血型鉴定实验原理，抗原抗体反应在ABO血型系统中，红细胞膜抗原分为抗原甲和抗原乙两种，而血清抗体分为抗体甲和抗体乙两种.如果甲抗原加抗甲抗体或乙抗原加抗乙抗体，就会发生凝集，从而检测受试者的红细胞膜上是否存在甲或/和乙抗原，并判断血型抗体是否在相邻的红细胞膜表面抗原决定簇之间桥接形成肉眼可见的颗粒状凝集块。见图，红细胞IgM抗体凝集示意图，红细胞IgM抗体凝集示意图，盐介质中IgM凝集示意图。、载玻片、刺血针、牙签、一次性采血管、甲、乙型标准血清、生理盐水、酒精棉球等。方法和步骤-血红蛋白测定，向测量管中加入0.1毫升/升盐酸溶液至20

5、%刻度。取20l待测血液，迅速将吸管插入测量管底部的盐酸溶液中，慢慢挤出血液，吸取上清液，反复清洗吸管23次，混合均匀，静置10分钟。沿管壁加入蒸馏水，逐渐稀释至从标准系统的转换：血红蛋白(克/升)=血红蛋白(克/分升)10，方法和步骤-血红蛋白的测定。血红蛋白仪包括一个标准比色框架，框架两侧有两个棕色标准玻璃柱。方形和圆形血红蛋白稀释管。两边都有刻度，一边以G为计数单位，另一边以百分比为单位。根据中国的情况，每100毫升血液中的血红蛋白含量是100%。20mm3血红蛋白吸管、玻璃棒和滴管。用滴管向血红蛋白稀释管中加入0.1摩尔/升的氯，滴管的刻度为10。用刺血针刺破你的指尖来采血。血滴应该更

6、大。用血红蛋白吸管的尖端接触血滴，吸取血液至20微升(0.02毫升)的刻度。方法和步骤-血红蛋白测定：用滤纸或棉球擦拭吸管口周围的血液，将吸管插入血红蛋白稀释管中的盐酸中，轻轻将血液吹至管底，反复吸入并吹掉稀释管上层的盐酸，并清洗吸管几次，使吸管中的血液完全冲洗到稀释管中。摇匀或用小玻璃棒搅拌均匀，然后放置10分钟，使盐酸和血红蛋白充分发挥作用。将稀释管插入标准比色架两个色柱中间的空间，使无刻度的两边位于空间的前后，便于透光和比色分析。用滴管将蒸馏水逐滴加入稀释管中(搅拌每滴)，滴下时观察颜色，直到颜色与标准玻璃柱相同。稀释管上液位的校准读数是每100毫升血液中血红蛋白的克数。从指尖或耳垂处取

7、一滴血，加入含1毫升生理盐水的小试管中，混合均匀，得到约5个红细胞悬液。采血时，应注意用75度酒精对指尖或耳垂进行消毒。取少量红细胞(约0.20.5毫升)，用生理盐水洗涤3次，然后加入适量生理盐水，使浓度为5%。方法和步骤-血型鉴定，方法和步骤-血型鉴定，(1)取一个双凹面载玻片，用干净纱布擦拭干净，在载玻片两端用标记物标记甲和乙，分别滴一滴甲和乙标准血清。(2)用滴管吸收红细胞悬液，并将每一滴都滴在载玻片两端的血清上。小心不要让滴管接触血清。(3)将竹签的两端分别混合，搅拌均匀。使用两种标准(4)分别混合a型和b型，观察结果。如果有凝集反应，可以看出凝集块呈红点或片状。先用肉眼观察凝集。如果

8、肉眼难以分辨，请在低倍显微镜下观察。如果有凝集反应，可以看到红细胞聚集。(5)判断血型根据受试者的红细胞是否被甲、乙型标准血清凝集，判断血型。血型测定、注意事项，在将血液吹入稀释管和清洗吸管时，不要用力过大。蒸馏水应逐滴加入，并应多次进行颜色比较，以避免过度稀释。每次比较颜色时，都要把用来搅拌的玻璃棒拿出来，以免影响颜色的比较。当由于长时间的操作过程导致吸管中的血液凝结和管孔堵塞时，应该按照以下溶液顺序反复冲洗吸管，即水95%醇醚或丙酮。应标记五个预防措施、载玻片和试管！A和B标准血清不得混合，并且不要依赖于用染料标记血清。努力形成自己的习惯！实验前必须清洗所用的载玻片和试管，以避免假凝集。红细胞悬液滴管头不能接触到标准血清水平，竹签