定量分析方法与验证.ppt

1、第4章：药物定量分析及分析方法验证，第1节：定量分析样品的预处理方法，第2节：定量分析方法的特点(自学)，第3节：药物分析方法的验证，第4节：生物样品分析方法的基本要求，第1节：定量分析样品的预处理方法，第1节：含卤素有机药物的分析，第1节：概述，含卤素有机药物是指那些在药物分子结构中卤素直接与芳香环或脂肪链相连的药物， 结构特征：CX(1)含卤素的有机药物，其中卤素与脂肪链的碳原子相连，卤素与碳原子的结合较弱，可直接测定或水解后测定。 氮芥、氟烷、1个卤原子连接到脂族链的碳原子上、碘代芬酸、泛酸、药物与卤原子连接到芳环上、卤原子牢固地连接到碳原子上，因此不能直接测定，而只能在处理后测定。卤素

2、是与碳原子相连的芳香环，碘代苯酯，诺氟沙星，磺溴苯酞钠，(2)含金属的有机药物，含金属的有机药物，2。有机金属药物：的金属原子通过共价键与碳原子直接相连，它们牢固地结合在一起，并且通常不能在溶液中解离成离子状态，这需要在有机破坏后进行分析。金属原子不与碳原子直接相连，而是以有机酸和金属酚的盐或配位化合物的形式存在，如酒石酸锑钾、富马酸亚铁、葡萄糖酸钠锑等。富马酸亚铁，硫柳汞，卡波松，两种无有机破坏的分析方法，直接测定法，还原分解后测定法，水解后测定法，(1)直接测定法，如碘量法测定葡萄糖酸钠锑，适用于金属原子不直接与碳原子相连或其CM键不牢固的有机金属药物。(包括配位滴定和氧化还原滴定)，如：

3、测定富马酸亚铁含量的ChP(2005)铈定量法，以邻菲罗啉为指示剂，稍过量的硫酸铈将红色亚铁络合物氧化成浅蓝色的高价铁。(2)水解后测定，(1)碱水解后测定，适用于卤素与碳原子结合弱的含卤素有机药物，回流法、回流法、福尔哈德法和银含量法。根据终点指示方法，可分为：1莫尔法(莫尔法、铬酸钾指示剂法)2富哈德法(福尔哈德法、硫酸铁铵指示剂法)3法简法配方、指示剂、滴定溶液、被滴定物质、终点变化、莫尔法、K2Cr2O7、AgNO3、卤化物、砖红、原理、法哈德法、硫酸铁铵、NH4CN(KSCN)、银、红、法眼法、吸附指示剂、AgNO3、卤化物、指示剂变色，例如：十一烯酸锌的测定(KIO 3滴定)、硝酸

4、银滴定、冰HAC、曙红钠指示剂、(法詹斯法)、泛酸、有机破坏三种分析方法，(1)湿法破坏，主要适用于含氮有机药物和生物制品分析中氮和磷测定的前处理。 H2SO 4-HNO 3 H2SO 4-HCLO 4 H2SO 4-K2SO 4 HNO 3-KMNO 4，分解器/消化器，辅助分解器，凯氏定氮法，测定含氨基和酰胺结构的药物结构，原理，加热凯氏定氮瓶中的含氮药物和硫酸。药物分子中的有机结构被“消化”成CO2和H2O，有机结合的氮被转化成无机氮，无机氮与过量的硫酸结合形成硫酸氢铵和硫酸铵。碱化后，氨气释放出来，用水蒸气蒸出，用硼酸溶液或定量酸滴定溶液吸收，然后用酸或碱滴定溶液滴定。定氮法的氮含量为

5、2530毫克，半微量法的氮含量为1.02.0毫克，凯氏定氮法，凯氏定氮瓶，K2SO4(提高消解温度)，硫酸铜(加速消解速度)，硫酸，碱液，硼酸(吸收液)，甲基红-溴甲酚绿指示剂，硫酸滴定空白校正，1。高温灼烧无水碳酸钠、硝酸镁、氢氧化钙和氧化锌经常被添加用于辅助灰化。(2)干法销毁，氧气瓶燃烧法：将有机药物放入装有氧气的密闭燃烧瓶中燃烧，将燃烧产生的待测物质吸收到合适的吸收溶液中，然后根据待测物质的性质采用合适的分析方法进行鉴别、检验或含量测定。2氧瓶燃烧法，(1)原理，适用于含卤素、硫、氮、硒等有机药物的分析。(3)特点：该方法简单、快速、完全无损，特别适用于痕量样品的分析，(2)适用范围：

6、(4)装置、燃烧瓶：5000固体样品：无灰滤纸液体样品：纸袋软膏样品：先用蜡油纸包裹，再用无灰滤纸包裹；(5)操作方法：制样，取适量样品，精确称量后按规定方法包装，并固定在铂丝下端的网或螺旋内。燃烧前，准备好燃烧的瓶子。用洗液冲洗后，按每种药物下的规定加入吸收液，小心快速吸氧1分钟，并立即用观察镜盖住瓶口。样品燃烧时，点燃包裹有测试品的滤纸尾部，迅速将其放入燃烧瓶中，压紧瓶塞，加入少量水封闭瓶口，燃烧结束后(不应有黑色碎片)，充分摇动，使产生的烟雾完全被吸收到吸收液中，放置15分钟。用少量水冲洗瓶塞和铂丝，用同样的方法再做一次空白试验。(6)吸收液，功能：定量吸收卤素、硫、氮、硒等。它们是由样

7、品的燃烧分解产生的，并将它们转化为便于测定的某些价态。实施例：通过ChP置换碘量法测定碘苯酯，2碘苯酯，o，I2，naionai，1/3 naio3 2/3 nai，5/3 nai，自动氧化和还原，溴乙酸，5/3 naio3，2 naio3，2 hio3 10ki12h，6 I2，第三节药物分析方法的验证，目的：证明所采用的分析方法适合相应的检测要求，方法验证的过程和结果应记录在药物标准的起草和修订说明中。用途：1 .起草药品质量标准时，应对分析方法进行验证。2.当药物合成方法发生变化时，制剂的组成也发生变化，原有的分析方法需要修改，需要对分析方法进行验证。验证内容、准确度、精密度、特异性、检

8、测限、定量限、线性和范围持久性，1。准确度，1。定义：指测量结果接近真实值的程度。通常用回收率试验来表示。2.方法：回收率试验法(API):测定已知量A的空白对照品(或标准品)，测定值为m，制剂可采用在空白辅料中加入API对照品的方法。还应进行个别辅助材料的空白测定。样品回收试验(中药)用已知量的对照品(或标准品)测定了药物含量P准确的真实样品，测定值为M。要求M、紫外和高效液相的回收率在98102%范围内。容量分析的回收率要求在99.7100.3%的范围内。中药分析的回收率一般要求在95-105%的范围内，当操作步骤较多时，有些方法可能要求在90-110%的范围内。相对标准偏差一般在3%以内

9、。在数据要求规定的范围内，至少应使用9次测量结果进行评估，如制备三个不同浓度的样品，并分别测量三次。(2)精度，定义：指在规定的试验条件下，同一均匀试验样品在多次取样后，结果接近的程度。常用的标准偏差或相对标准偏差。在相同的条件下，由相同的分析员来确定结果的精度。在规定的范围内，至少应使用9倍的测量结果进行评估，例如，应准备三个不同浓度的样品，m当法定标准采用分析方法时，应进行重现性试验。3。再现性是指当其他成分(杂质、降解物、辅助材料等)存在时所采用的方法。)可能存在，其能够准确地确定被测物质的特性，并且能够反映当共存物质存在时该方法对被测物质的准确和唯一的确定能力。它指的是当该方法用于复杂

10、样品分析时相互干扰程度的测量。(3)氧氟沙星乳膏、乳膏基质、样品的特异性、含量测定图，(4)检出限(LOD)，1。定义：指样品中可检测到的被测物质的最小量。没有定量测定。通常用% ppm和ppb表示。它不仅反映了方法和仪器的灵敏度和噪声，还反映了样品处理后的空白(背景)值。2.方法：信噪比法(仪器分析法):高效液相色谱法、气相色谱法：将已知浓度的样品与空白试验进行比较，记录被测药物的实测信号强度S和噪声(或背景信号)强度N，使样品达到SN2或SN3时的最低药物浓度为LOD；紫外或荧光分析：其背景响应的标准偏差通过多次空白试验获得，以三倍空白标准偏差(即3倍空白或3倍空白)作为检测限的目测法(非

11、仪器分析法):通过已知浓度的样品，目测确定能够可靠检测的最低量作为检测限。(5)定量限(LOQ)，1。定义：是指在保证一定准确度和精密度的前提下，可以定量测定的样品中被测物质的最低浓度或含量。%、ppm、ppb通常用于表示杂质和降解产物的定量测定需要确定定量限值。定量限与检测限的区别：定量限应定量测定样品介质中药物的最低浓度，定量限规定的最低浓度应满足一定的精密度和准确度要求。方法：非仪器分析法：与检出限的测定方法相同；仪器分析方法：以信噪比=10时的相应浓度作为定量限的估计值。(6)线性和范围，1。定义：线性：在设计范围内，测试结果与样品中被测物的浓度成正比。线性范围：指在一定的精度、准确度

12、和线性度条件下，适用于测试方法的高、低限浓度或量的范围。它可以用mgL、mgL和gml ugml表示。2.方法：线性和范围的测定可通过作图法(响应值y浓度x)或计算回归方程(Ya bX)来建立。标准曲线的线性用相关系数表示。参考物质的LOQ必须包括线性范围。(7)稳健性，定义：指测量条件发生微小变化时，测量结果不受影响的公差程度。可变因素：溶液稳定性、不同的测试时间、不同的分析温度、不同的测定日期、流动相的组成和酸碱度、商品柱的品牌、柱温等。已验证再现性，但未验证中间精度。如果一种方法不够排他，可以用其他分析方法补充，并根据具体情况进行验证。准确度，精密度，重复性，中间精密度，密度，特异性，检

13、测限，定量限，线性/，范围，耐久性，鉴别，杂质定量，检验项目和验证内容，性能指标1的各种含量测定方法的要求。容量分析法：以精制原料药(含量99.5%)或对照品考察方法的精密度，相对标准偏差为0.2；回收率一般在99.7-100.3之间。2.紫外法：用适当浓度的精制产品测定，其相对标准偏差一般不超过1。制剂的回收率一般应在98102之间。线性度：吸光度a一般为0.30.7，浓度点n5。通过线性回归得到一个线性方程，浓度C、R应大于0.9999(n5)，方程的截距应接近于零。3.高效液相色谱法：要求RSD2，并回收1.原料药分析方法的验证是否需要对所有指标进行验证？2.如何设计回收率测试？体内药物

14、分析：是研究生物样品(如体液、组织、器官和排泄物等)中药物及其代谢物和内源性物质的质量和数量变化的分析方法。)进入人体或动物体内。(1)概述，(1)体内药物分析的概念，(4)生物样品分析方法的基本要求，(2)体内药物分析的意义。因此，体内药物分析为药物研究、制剂质量管理和临床用药提供了数据和信息。此外，在诸如过量、误用或中毒等中毒事件中，为了进行解毒急救或判断情况，还需要进行体内药物分析；还有药物滥用现象，如兴奋剂、致幻剂、镇静剂等。需要在体内进行测试。(3)体内药物分析的特点：1 .干扰物质有很多：生物样品含有大量的内源性物质，如蛋白质、脂肪、代谢物、共轭物等。通常，样品只能在分离和纯化后进

15、行分析。2.样本量小，不能重复采样：大多数生物样本都是在特定条件下采集的，因此不能再次采样，样本量小。3.待测成分浓度低：要求分析方法的灵敏度和特异性。测定前需要浓缩和富集，以满足分析方法的要求。4.药物浓度监测和药物滥用：分析方法简单快速；2.常用样品的类型、收集和储存；1.样本和收集；1.血样；血浆：加入抗凝剂如肝素、柠檬酸盐和草酸盐后，将全血离心，其量约为全血的一半。血清：血液在室温下放置后，通过自然凝固而沉淀的透明液体。全血取样：一般来说，在动物实验中，静脉、指针和耳垂的血液取样可直接取自动脉或心脏。2.唾液：优点：样品容易获得，取样无痛，尤其对儿童。缺点：药物浓度变化很大。服用方法：漱口15分钟，收集自然流出或通过舌头在口中搅动的唾液。物理和化学方法也可以用来刺激唾液流出。尿样测定主要用于研究药物剂量恢复、药物肾清除率和生物利用度，以及确定代谢物类型。优点：服用方便，取样量大，受试者无痛苦。缺点：药物浓度变化很大，因此需要在一定时间内采集尿样。收养：动物应该放在代谢笼中，通过笼下的漏斗接收。(2)样品应在取样后立即储存和分析。如果不能立即分析样品，应将其冷藏一段短时间(4)并冷冻一段长时间(-20)。全血尚未分离，因此不应直接冷冻保存。尿液是一种很好的细菌生长液。如果样品需要收集24小时或更长时间，或不能立即测定，应将其储存在冰箱中或用防腐剂(1%甲苯