免疫分析.ppt

1、,生物分析化学,2020/7/30,2,主要内容,免疫分析基本知识 文献,2020/7/30,3,免疫分析 -抗原抗体,抗原：antigen Ag 刺激机体免疫系统使之产生特异性免疫应答,并能与相应免疫应答产物在体内外发生特异性结合的物质。 抗体：antibody Ab 能与相应抗原特异性结合的免疫球蛋白(Ig)。,甲胎蛋白AFP/癌胚抗原CEA,2020/7/30,4,免疫分析 -抗原抗体,反应原理： 两者存在着结构互补性和亲和性. 抗原抗体结合依靠非共价键的相互作用. 静电引力 范德华力 氢键结合力等,2020/7/30,5,免疫分析 -抗原抗体,反应特点 -可逆性：抗原抗体形成复合物的过

2、程是一种动态平衡。 -最适比例:二者浓度比例适当时才出现可见反应。 -高度特异性：化学结构/空间构型的互补。,2020/7/30,6,免疫分析,免疫分析： 利用抗原与抗体的特异性结合作用来选择性识别和测定可以作为抗体或抗原的待测物. 免疫分析方法,2020/7/30,7,常见的肿瘤标志物免疫分析方法,2020/7/30,8,化学发光免疫分析 Chemoluminescence immunoassay,CLIA是化学发光法与免疫分析法结合的产物. 高灵敏度、高选择性 化学发光酶免疫分析 -以酶标记生物活性物质进行免疫反应，免疫复合物上的酶再作用于发光底物，根据测定的发光信号进行定量分析.,202

3、0/7/30,9,竞争反应,夹心反应,发光底物,化学发光免疫分析反应,2020/7/30,10,主要内容,免疫分析基本知识 文献,2020/7/30,11,文献 -题目,自动化单通道化学发光多元免疫分析,2020/7/30,12,文献 -创新点,为同时定量检测多种肿瘤标记物-多元免疫分析,2020/7/30,13,文献 -创新点,两种抗体分别固定在玻璃管和磁性微球上，两者在外加磁场可实现自动分离。 使用一种标记物，单一通道即可实现多元免疫分析,2020/7/30,14,文献 -实验步骤,4,结合免疫聚合物的磁性微球， 从混合组分中分离,2020/7/30,15,文献 -实验装置,2020/7/

4、30,16,文献 -结果与讨论,孵化时间,2020/7/30,17,文献 -结果与讨论,交互反应,2020/7/30,18,文献 -结果与讨论,本实验选用氨基乙酸-盐酸缓冲液,A : 再生后的CL信号 A0：再生前的CL信号,RE: CEA -97.6% AFP- 98.2%,免疫反应器重复使用10次后，抗体活性并无明显下降,免疫反应器再生后，抗体活性保持得很好,免疫反应器再生,充分快速,2020/7/30,19,线性范围：1.0-60 ng/mL,线性范围：1.0-80 ng/mL,临床诊断: 5.0-25 ng/mL,文献 -结果与讨论,2020/7/30,20,检测装置简单，成本低 重现

5、性好 线性范围宽 灵敏度高,优点：,文献 -结论,有望成为临床诊断肿瘤的有效手段。,使用一种标记物，单一通道实现了对两种 肿瘤标志物的分析。,2020/7/30,22,磁性微球,制备：将磁流体用有机聚合物包裹。 改性：表面经修饰后引进特定功能团，可以和各种 抗体、抗原有效而稳定地键合连接。 特点：-磁性微粒小，易于稳定悬浮在溶液中，提高 分子间反应效率 -具有顺磁性，在外加磁场作用下，可迅速从 溶液中分离,2020/7/30,23,CEA抗体的固定,玻璃管用溶液(H2SO4/30% H2O2, 7:3 in volume) 浸泡12小时,硅烷化 1%(GPTMS甲苯溶液),通入CEA抗体，室温保存2h，4oC overnight,抗体结合后，用含0.1% NaN3的PBS溶液浸泡，4C保存.,2020/7/30,24,AFP抗体的固定,羧基修饰的磁性氧化铁悬浮液,用缓冲溶液活化 -室温下，持续振荡1h。,(30 mg of EDC/