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文档简介

1、纸层析法鉴定转氨基作用,目的 1.验证氨基酸的转氨基作用 2.掌握纸上层析法分离和鉴定氨基酸的基本原 理和方法。,原理 在转氨酶的作用下，某一氨基酸去掉-氨基生成相应的-酮酸，而另一种-酮酸得到此氨基生成相应的氨基酸的过程，称为氨基酸的转氨基作用。,层析理论 层析法（色谱法）：是利用混合物各组分物理、化学性质（如溶解度、吸附能力、电荷和分子量等）的差别，使各组分在支持物上集中分布在不同的区域，借以将各组分分离。,固定相滤纸结合的水 流动相乙醇 由于混合物中的有效成分和杂质受固定相的阻力和受流动相的推力影响不同，各组分移动速度不同，有效成分和杂质在这两个相中连续多次地进行分配、吸附和交换作用，最

2、终结果是使混合物得到分离。,步骤 1.制备肝匀浆 2.转氨基反应 取干净试管2支，分别标明测定管与对照管，按下表操作。,3.准备：取直径15cm圆形滤纸1张，用圆规在滤纸正中作一半径为1cm的小圆圈，用铅笔通过圆心作两点互相垂直的线，并在两线外端等距离点4个原点，标明测、对、谷、丙。在滤纸圆心处打一小孔（如铅笔芯粗细），另取同类滤纸小片1.5cm3cm，下三分之二剪成须状。将其卷成圆筒如灯芯状，插入小孔（略突出于滤纸面）,步骤 4.点样 分别用采血管吸取测定管上清液、对照管上清液、谷氨酸溶液、丙氨酸溶液各1滴，依次点在滤纸上标明测、对、谷、丙的点样处。注意点样斑点不可太大。直径应小于0.5cm。必要时可再点一次，每点一滴，用吹风机吹干后方可再点第二滴，并且点样量应力求均匀相等。,5.层析 将滤纸放在培养皿上，灯芯下端浸入层析液中进行层析。约40分钟后，去除灯芯，立即用铅笔划出溶剂前沿，用吹风机吹干。,6.显色 将滤纸平放在培养皿上，用喷瓶向滤纸均匀喷洒0.1%茚三酮溶液，再用吹风机吹干，可见紫红色的同心弧形斑点。,7.计算 按下表记录有关数据，计算Rf值。,将“对”、“测”各色斑的

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