02 PCR实验室基本设置要求 张琼ppt课件

1、PCR实验室基本设置要求,张 琼,主要内容,一、实验室生物安全 二、PCR实验室布局设置,严重生物安全事故案例,2003年9月新加坡实验室人员感染SARS病毒 2003年9月台湾实验室人员感染SARS病毒 2004年4月我国国家CDC的SARS实验室研究生感染SARS病毒并传染给别人,实验室生物安全法规,2003年12月实验室生物安全通用要求通过了专家审定，并很快申报国家标准 2003年SARS期间，有关部门制订了传染性非典型肺炎病毒研究实验室暂行管理办法 2004年11月12日我国发布了病原微生物实验室生物安全管理条例,一、实验室生物安全,生物危险度的分级 生物安全实验室分级 生物安全柜分级

2、,1.生物危险（risk）的分级,I 级：个体和群体低危险 II 级：中等个体危险，有限群体危险 III级：高个体危险，低群体危险 IV 级：高度的个体和群体危险,第一级：不引起健康成年人疾病 第二级：可通过破损皮肤、消化道及粘膜暴露等方式引起人类疾病 第三级：本土或外来的微生物，通过吸入途径暴露时可以造成严重或潜在致死性疾病 第四级：可以引起严重且威胁生命的人类疾病，可通过气溶胶传播，或相关的传播危险性不明的微生物 生物安全防护实验室根据不同的微生物和防护要求分为四个生物安全防护级别,美国CDC对微生物指导性分级,我国对病原微生物的分类,第一类：能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及

3、我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物 第二类：能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物 第三类：能够引起人类或者动物疾病；不构成严重危害，传播风险有限；具备有效治疗和预防措施 第四类：通常情况下不会引起人类或者动物疾病的微生物 第一类和第二类病原微生物统称为高致病性病原微生物,2.生物安全实验室分级,生物安全是防范处理微生物及其毒素对人体危害的综合性措施 危害的来源： 对医学实验室 主要是标本,实验室生物安全防护,实验室工作人员所处理的实验对象含有致病的微生物及其毒素时，通过在实验室设计建造、使用个体防护装置、严格遵从标准化的工作及操作程序

4、和规程等方面采取综合措施，确保实验室工作人员不受实验对象侵染，确保周围环境不受其污染,实验室生物安全防护分级,一级生物安全防护实验室，简称BSL1或P1 二级生物安全防护实验室，简称BSL2或P2 三级生物安全防护实验室，简称BSL3或P3 四级生物安全防护实验室，简称BSL4或P4 一级最低，四级最高,典型的一级生物安全水平实验室 （图片由CUH2A ，Princeton ，NJ ，USA 提供）,典型的二级生物安全水平实验室（图片由CUH2A ，Princeton ，NJ ，USA 提供）。 在生物安全柜中进行可能发生气溶胶的操作程序。门保持关闭并贴上适当的危险标志。潜在被污染的废弃物同普

5、通废弃物隔开。,BIOHAZARD 生物危害标识,典型的三级生物安全水平实验室（图片由CUH2A ，Princeton ，NJ ，USA 提供）。 实验室与公共通道分开并通过缓冲间（双门入口或二级生物安全水平的基础实验室）或气锁室进入。处理废弃物前，在实验室内先进行高压灭菌以清除污染。应有非手控的水槽。形成向内气流而且涉及感染性材料的全部工作应在生物安全柜中进行。,四级生物安全水平实验室,在加拿大仅有一个4级实验室(Canadian Centre for Human and Animal Health in Winnipeg, Man.) 设计要求非常苛刻，要把工作人员完全与感染物质隔离开,3

6、.生物安全柜,生物安全柜（biosafety cabinet）是处理危险性微生物时所用的箱型空气净化安全装置,3.生物安全柜分级,I级生物安全柜（class I biosafety cabinet）,至少装置一个高效空气过滤器对排气进行净化，外部空气由操作窗吸进，而不可能由操作窗口逸出；100%由密接排气导管排到室外 （类似于通风厨） 工作状态时保证工作人员不受侵害，但不保证实验对象不受污染。 现已很少使用,I,II,III,至少装置一个高效空气过滤器对排气进行净化，工作空间为经高效过滤器净化的无涡流的单向流空气。工作时柜正面玻璃推拉窗打开一半，上部为观察窗，下部为操作窗口。外部空气由操作窗吸

7、进，而不可能由操作窗口逸出 工作状态下遵守操作规程时既保证工作人员不受侵害，又保证实验对象及环境不受污染,级生物安全柜（class biosafety cabinet）,I,II,III,II 级生物安全柜根据结构以及气流分配不同主要是外排气流不同分为： A1型:（ 0.38m/s， 30%排在室内 ） A2型: （0.5m/s，30% 外排，原B3 型） B1型: （ 0.5m/s， 70%接管道外排） B2型: （ 0.5m/s， 100%接管道外排）,级生物安全柜（class biosafety cabinet）,至少装置一个高效空气过滤器对排气进行净化，工作空间为经高效过滤器净化的无涡流的单向流空气。正面上部为观察窗，下部手套箱式操作口 箱内对外界保持负压可确保人体与柜内物品完全隔绝,I,II,III,隔离器,二、PCR实验室布局设置,生物安全二级实验室,目的,保护操作人员,保护环境,保护样品,P