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文档简介

1、5.2多聚酶链式反应扩增DNA片段,课程标准 尝试PCR技术的基本操作和应用。 课标解读 1.理解PCR技术的基本原理。 2.知道PCR技术的基本操作过程。 3.讨论PCR技术的应用。,打开DNA双链,提供DNA复制的模板,合成子链的原料,催化合成DNA子链,使DNA聚合酶能够从引物的3端 开始连接脱氧核苷酸,细胞内DNA复制条件,DNA复制方向,DNA热变性,PCR反应过程,PCR反应过程,PCR实验操作,1实验用具 (1)PCR仪：该仪器能自动调控 ，实现DNA的扩增。如果没有PCR仪，可用3个 代替，操作时按程序来回转移PCR反应的微量离心管。 (2)微量离心管：总容积为 ，实际上是进行

2、 的场所。 (3)微量移液器：用于 。,温度,恒温水浴锅,0.5mL,多聚酶链式反应,转移PCR配方中的液体,(将微量离心管放在离心机上，离心约10 s。目的是使反应液集中在离心管底部),3.DNA含量的测定,稀释（50倍）,对照调零（蒸馏水作对照）,测定（取DNA稀释液100uL）,计算,DNA含量（g）50 x (260nm的读数）x 稀释倍数,50：OD260=1相当于50g /ml双链DNA, 概念：PCR全称为_，是一项 在生物_复制_的核酸合成技术,条件：_、 _ 、 _ 、 _,原理：_,方式：以_方式扩增，即_（n为扩增循环的次数）,结果：,聚合酶链式反应,体外,特定DNA片段

3、,DNA复制,已知基因的核苷酸序列（前提）,四种脱氧核苷酸,一对引物,耐热的DNA聚合酶（Taq酶）,指数,2n,使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增,PCR总结,PCR技术扩增与DNA复制的比较,DNA双链复制,四种脱氧核苷酸,模板、能量、酶、引物,高温下变性解旋,解旋酶,体外,细胞核内,热稳定的DNA聚合酶,细胞内的DNA聚合酶,大量的DNA片段,形成整个DNA分子,1.PCR技术是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，有关叙述不正确的是() APCR技术是在实验室中以少量DNA制备大量DNA的技术 B反应中新合成的DNA又可以作为下一轮反应的模板 CPCR技术中以核糖核苷酸为原料，以

4、指数方式扩增 D应用PCR技术与探针杂交技术可以检测基因突变,C,2.(2011江苏)请回答有关问题。 1)利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似(如下图所示)。图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。,从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物A的DNA片段所占的比例为_。 在第_轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段。,15/16,三,2）设计引物是PCR技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物(只标注了部分碱基序列)都不合理(如下图)，请分别说明理由。,引物和引物局部发生碱基互补配对而失效 引物自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效,3)PCR反应体系中含有热稳定DNA聚合酶，下面

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