HPLC高效液相色谱故障排除及解决办法解析.ppt

1、HPLC的故障诊断与解决办法,美国戴 安 公 司,美国戴 安 公 司 美国戴 安 公 司,I. 常见问题 基线噪音,可能的原因：,流动池脏,检测器灯有问题,如果是周期性的，电压或泵的脉冲,温度对检测器的影响,气泡经过检测器,基线漂移, 梯度洗脱 温度不稳定 (示差检测器） 流动相中有污染物 柱中的流动相没有平衡 体系中有污染物流出,可能的原因：,鬼 峰,鬼峰即使不进样也会出现的峰,没有进样,3,7,15,17,问题1- 流动相脏 问题2- 容器污染 问题3- 柱子污染,20% - 100% MeOH,没有进样,峰 型,双 峰,柱 塌 陷,柱中有死体积,过滤片部分堵塞,只有一个双峰组分的共洗脱,

2、可能原因：,样品与溶剂不匹配，溶剂与柱子不匹配,峰 型,所有的峰都展宽,柱效降低柱死体积,大进样量 / 质量,高粘度流动相,部分峰展宽,前次进样后流出的组分,大分子量样品蛋白或聚合物,样品与流动相不匹配,峰 型,原因：,部分峰拖尾,二次保留效应残留硅醇基的反应,小峰紧跟在大峰的后面流出,柱头有污染,金属,所有峰拖尾,额外的柱效应,柱坏/不适当的溶剂,不适当的样品量,峰 型,峰 型,原因: 流动相吸收本底高 进样过程中进了空气 离子对分离中的系统峰 样品组分的吸收(RI或UV)低于流动相,宽 峰,柱外体积增加,* 在进样口到柱或柱到检测器之间，使用细的短的连接管 * 保证所有的管路接头都使用正确

3、 * 用小体积检测池 * 减少进样量或降低样品浓度,HPLC常见问题,系统压力问题 压力高 压力低或没有压力 压力不稳 流路基线噪音问题 基线不稳定(不重复) 长、短程振荡 基线漂移 噪音脉冲尖刺,HPLC常见问题分析,系统压力问题 压力高的原因 温度太低 流速太高 流动相粘度大 管路堵塞 仪器或色谱柱堵塞 压力传感器问题,HPLC常见问题分析(续),系统压力问题 压力低或没有压力 温度太高;流速太低 泵关闭或保险丝断了 泵未输送流动相 储液瓶中无溶剂 低压限设置不当泵未正确排气 溶剂入口过滤头堵 入口管路中有空气泵失效 系统内有渗漏处 所用溶剂不正确 自动进样器在Purge时卡住,HPLC常

4、见问题分析(续),系统压力问题 压力不稳 压力传感器问题 泵排气不充分 泵失效 流动相未正确脱气 所用溶剂不混溶或易挥发,HPLC常见问题分析(续),流路基线噪音问题 短程振荡 泵压不稳 泵入口管松,弯或堵塞 溶剂混合不充分 检测池中有大气泡 泵入口阀脏或失效 泵柱塞杆密封垫磨损 检测器出口溶液成滴状流入废液瓶,判断故障与故障排除的原则,规则一确认问题至少发生两次以上。如果问题不重复 出现，很难证实其确实存在。 规则二一次只变化一个因素，以使你能够确认所变因 素与问题之间的关联。 规则三恢复原状。如果使用更换组件方法来查找问题 之所在,完毕后应将原有完好组件安装回原处。 否则,换下的组件将来很

5、难再利用,会造成浪费。 规则四尝试预测将来可能发生的问题。利用成功的故 障排除经验来改善您目前的预防保养工作,使现 有问题再发率降至最低。 规则五养成记录的好习惯。一个好记录是成功地进行 故障排除的关键。,色谱图常见问题,色谱图常见问题主要有两类: 色谱峰峰形异常问题 例如负峰,宽峰,肩峰,双峰,峰形不对称等 色谱峰保留时间问题 保留时间不稳定等,色谱图常见问题分析(一),色谱峰峰形异常问题: 色谱图中未出峰: 进样问题:未进样或样品分解 流动相问题:泵未输液或流动相不正确 检测器设置不正确,或检测器有问题 一个或几个峰是负峰 流动相吸收本底高 进样过程中进了空气 离子对分离中的系统峰 样品组

6、分的吸收(RI或UV)低于流动相,色谱图常见问题分析(一)(续),色谱峰峰形异常问题: 峰比预想的要小 样品粘度过大 进样器有问题或进样体积有误 检测器设置不正确,定量环(Loop)体积不正确 检测器输出未置零 用了不正确的检测器输出信号 检测池被污染 检测器的灯可能有问题,色谱图常见问题分析(一)(续),色谱峰峰形异常问题: 双峰或肩峰 进样量或样品浓度过大 保护柱或色谱柱进口堵塞 保护柱或色谱柱污染或失效 前伸峰 进样量或样品浓度过大 溶样的溶剂相对于流动相太强 保护柱或色谱柱污染或失效,色谱图常见问题分析(一)(续),色谱峰峰形异常问题: 拖尾峰 保护柱或色谱柱问题:污染或失效(选择合适

7、的柱子) 进样问题 检测器时间常数不正确 平头峰 检测器设置不正确 进样体积太大或样品浓度太高,色谱峰保留时间问题: 保留时间飘忽不定(各次运行之间) 系统不稳定或未达化学平衡 泵压力不稳(泵头里有气泡) 进样体积过大或样品浓度过大 温度波动 流动相混合不均匀 色谱柱被污染,色谱图常见问题分析(二),色谱峰保留时间问题: 保留时间增加或减少(各次运行之间) 系统不稳定或化学平衡不足 泵流速变化 温度变化 色谱柱污染,柱效下降 流动相被污染 溶剂入口过滤器堵或管路堵塞 系统渗漏,色谱图常见问题分析(二)(续),色谱图常见问题分析(二)(续),色谱峰保留时间问题: 保留时间改变到一个新的恒定值 流

8、动相不正确或其组成不正确 泵流速变化 实际输液的流速不正确(泵失灵或故障) 环境温度变化；柱温不正确 色谱柱尺寸或类型不正确 色谱柱被污染 流动相含有稳定剂或稳定剂发生变化 输液系统的梯度滞后体积不正确,色谱图常见问题,色谱图常见问题主要有两类: 色谱峰峰形异常问题 例如负峰,宽峰,肩峰,双峰,峰形不对称等 色谱峰保留时间问题 保留时间不稳定等,色谱图常见问题分析(一),色谱峰峰形异常问题: 色谱图中未出峰: 进样问题:未进样或样品分解 流动相问题:泵未输液或流动相不正确 检测器设置不正确,或检测器有问题 一个或几个峰是负峰 流动相吸收本底高 进样过程中进了空气 离子对分离中的系统峰 样品组分

9、的吸收(RI或UV)低于流动相,色谱图常见问题分析(一)(续),色谱峰峰形异常问题: 所有的峰均为负峰: 信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒 光学装置尚未达到平衡 所有的峰都是宽峰 系统未平衡或未达到化学平衡 溶样的溶剂比流动相强很多 色谱柱类型或尺寸不正确 色谱柱或保护柱被污染或降级 温度变化对色谱柱的影响,色谱图常见问题分析(一)(续),色谱峰峰形异常问题: 较早洗脱的峰呈宽峰 进样体积过大或样品浓度太高 进样器有问题,定量环(Loop)大小不合适 在线过滤器,保护柱,色谱柱或管路堵塞 管路问题:内径不对或切管不正确 管路连接问题:接头或锥箍不正确 检测器时间常数不正确,色谱图常见问题分

10、析(一)(续),色谱峰峰形异常问题: 峰比预想的要小 样品粘度过大 进样器有问题或进样体积有误 检测器设置不正确,定量环(Loop)体积不正确 检测器输出未置零 用了不正确的检测器输出信号 检测池被污染 检测器的灯可能有问题,色谱图常见问题分析(一)(续),色谱峰峰形异常问题: 双峰或肩峰 进样量或样品浓度过大 保护柱或色谱柱进口堵塞 保护柱或色谱柱污染或失效 前伸峰 进样量或样品浓度过大 溶样的溶剂相对于流动相太强 保护柱或色谱柱污染或失效,色谱图常见问题分析(一)(续),色谱峰峰形异常问题: 拖尾峰 保护柱或色谱柱问题:污染或失效 进样问题 检测器时间常数不正确 平头峰 检测器设置不正确 进样体积太大或样品浓度太高,色谱峰保留时间问题: 保留时间飘忽不定(各次运行之间) 系统不稳定或未达化学平衡 泵压力不稳(泵头里有气泡) 进样体积过大或样品浓度过大 温度波动 流动相混合不均匀 色谱柱被污染,色谱图常见问题分析(二),色谱峰保留时间问题: 保留时间增加或减少(各次运行之间) 系统不稳定或化学平衡不足 泵流速变化 温度变化 色谱柱污染,柱效下降 流动相被污染 溶剂入口过滤器堵或管路堵