急性毒性试验终结版LC50.ppt

1、急性毒性试验,LD50 与LC50 的测定,急性毒性试验,实验目的及意义： 确定受试物的半数致死剂量LD50/LC50、观察受试物所致的急性中毒症状及其毒性作用特点，为进一步的毒性试验提供重要的参考依据。 急性毒性试验的染毒方式可有多种，包括经口、经呼吸道、经皮及注射染毒方式等。,经口急性毒性试验（LD50）,试验目的 学习急性毒性试验的实验设计原则 熟练掌握经口灌胃染毒操作技术 掌握LD50计算方法和急性毒性分级标准 试验内容 动物选择和性别鉴定 称重、编号和随机分组 小鼠经口灌胃操作技术 毒性症状观察、LD50计算和毒性分级,操作步骤 动物选择及性别辨认 急性毒性实验一般首选哺乳动物，其中

2、又以大小鼠最为常用。大、小鼠主要依据肛门与生殖器之间的距离来区分。远、近。成年鼠：雄性卧位可见睾丸，雌性可见腹部有12个乳头。 动物称重、编号和随机分组 应依据统计学原则进行随机分组。,1,2,3,4,5,6,7,8,9,受试物剂量选择 对于一种新的化学物质，剂量选择可参照同系物的毒性或文献资料加以估计，先用少量动物以组距较大的一系列剂量进行预实验，找出粗略的致死剂量范围，然后再设计出正式实验剂量组 受试物配制 本次试验所用的受试物是80的敌敌畏(DDVP)原液。按照事先设计的剂量分别稀释配制为几种不同浓度的受试物溶液，而各个剂量组的动物均给予相同单位体重体积的受试化学物。,剂量mg/kg 原

3、液量(g) 原液量(ml) 定容量(ml) 原液量 (ml) 36.44 0.1139 0.0813 50 0.0948 51.02 0.1594 0.1139 50 0.1327 71.43 0.2232 0.1594 50 0.1858 100 0.3125 0.2232 50 0.2603 140 0.4375 0.3125 50 0.3642 196 0.6125 0.4375 50 0.5099,敌敌畏（DDVP）配制：（组距1.4，给药量0.2ml/10g）,（4）,（25 ）,灌胃操作 将动物固定成垂直体位，腹部面向操作者，使动物的上消化道固定成一直线 毒性作用/中毒症状和动物死

4、亡情况观察 高剂量组动物的死亡常很快发生，染毒后应即刻密切观 察。观察和记录中毒症状及出现的时间，死亡数量和时间及死亡前的特征。按照实验结果，填写急性毒性实验记录表。 中毒的症状观察：兴奋、流涎、肌震颤、抽搐、管状尾、呼吸减慢、呼吸困难、四肢无力、站立不稳、大小便失禁、大剂量侧卧以致死亡。,改进寇氏法是利用剂量对数与死亡率呈S型曲线而设计的方法，又称Karber法或平均致死量法。本法要求每个染毒剂量组动物数要相同，各剂量组组距呈等比级数，死亡率呈正态分布，最低剂量组死亡率呈80%。,LD50计算（改良寇氏法）,根据实验动物中毒症状、死亡时间、特征和LD50，按受试物种类，分别参照相应的经口急性

5、毒性分级标准进行评定，判断该受试物的毒性大小及毒性特征。,毒性分级及结果评定,健康成年小鼠若干只（按每组56人，每组10只动物，各半）、50 ml容量瓶(每组1个)、加样器（200l、1000l）、加样枪头、DDVP原液、1 ml玻璃注射器、灌胃针头（每组2套）、棉签、染液、LD50记录纸、小鼠笼（每组2个）、电子天平（2台）、搪瓷托盘（每组一个）、受试物、苦味酸酒精饱和液、0.5%品红溶液或其它染色剂。,实验课所需准备的试剂和材料：,经呼吸道急性毒性试验（LC50）,实验目的 学习静式呼吸道染毒操作方法 学习测定和计算LC50的试验步骤和方法。 实验原理（染毒方式） 呼吸道吸入染毒可分为两种

6、方式，一种是动式吸入，一种是静式吸入。,静式呼吸道吸入染毒： 优点：设备简单、操作方便、消耗受试物少、适用于小动物 接触易挥发液 态化合物的急性毒性研究。 缺点：受试物浓度难维持恒定，而且实验动物有经皮吸收的 可能。 动式吸入： 优点：能即时补入新鲜空气和排出污浊空气，氧分压，二氧 化碳分压，温度、湿度，受试物浓度保持恒定。 缺点：设备复杂，消耗受试物多、易污染环境,染毒柜内受试物浓度的计算,注意单位！,试剂和材料 实验动物及器材 健康成年小鼠若干只，（每组10只，各半），小鼠笼（每组2个）。静式吸入染毒柜6个、吸管、动物秤、记录纸。 试剂 受试物（易挥发液体，苯（原液）、苦味酸酒精饱和液、0

7、.5%品红溶液或其他染色剂。,操作步骤 选择健康实验动物，称重（精确到0.1g），编号，随机分组。 剂量分组,呼吸道吸入染毒： 依设计剂量浓度及染毒柜体积，计算需要加入的受试物量。将5、5共10只小鼠放入静式染毒柜内加盖（注：每只小鼠每小时所需要的气积为3L）。将液态受试物经加药孔加到接物蒸发器（纱布、滤纸、蒸发皿或小型加热器）上开启小电扇，计时观察、记录中毒症状和动物死亡情况。染毒结束后，关闭电源，打开盖子，驱走柜内残存的含毒空气，取出动物，存活者归笼继续观察。（症状：呕吐、昏迷、抽搐、呼吸麻痹而死亡） LC50计算：同LD50,急性毒性试验的观察和记录内容主要包括4个方面：中毒体征及发生过

8、程、死亡情况和时间分布、体重和病理形态学变化。 观察和记录中毒症状及出现的时间，死亡数量和时间及死亡前的特征。急性毒性试验观察周期一般为14天，LD50或LC50计算时以观察周期内各组动物的总死亡数为依据。根据观察情况分析中毒特点和毒作用靶器官。按照实验结果，填写急性毒性实验记录表。,中毒症状和动物死亡情况观察,结果评定/结果评价 依据实验动物中毒症状、死亡时间、LC50及急性毒作用带，参考相应的急性毒性分级标准，评价毒物的急性毒性强弱，判断该受试物的毒性大小及其毒性特征。,实验报告,实验动物的种属、品系、性别及来源。实验前动物禁食和健康状况。 实验动物体重和随机分组情况。 受试物的名称、来源、纯度、性状等情况。 详细描述实验观察的中毒表现和死亡情况等。 LD50/LC50的计算方法和结果。 受试物的毒性分级、分级依据和结果评价。,注意事项,敌敌畏溶液灌胃前要摇匀！ 注意染毒柜密闭，保持柜内受试物浓度，防止污染周围环境和影响操作者。 在染毒结束时，应在通风柜内或