临床病原学检查.ppt

1、林爽病原学检查，致病源(细菌，螺旋，分枝杆菌，放线菌，衣原体，立克次体，病毒，真菌，原虫，蠕虫)直接显微镜下用致病源检查或致病源抗原成分检测分子生物学方法检测致病源核酸。利用免疫学方法检测机体对致病源抗原成分产生的免疫产物。致病源分离和感情。完成致病源检出和鉴定任务后，可以结合患者的病历、症状或体征快速做出诊断。还积极参与临床选择抗微生物药，指导和监控微生物的治疗方案，避免耐药菌的发生。(威廉莎士比亚、微生物、微生物、微生物、微生物、微生物、微生物、微生物、微生物)、标本收集和运输：根据各种致病源引起的传染病的经过，决定标本收集的时间、部位和种类。所有采集的标本都放在无菌或清洁容器里，不能接近

2、消毒剂和抗菌剂。标本应注明姓名、年龄、性别、收集日期、林爽诊断、检查项目等。采集标本后，应按照要求处理，应立即送往医院学实验室，对有毒传染病材料的运输，由专人护送。(a)血液标本怀疑为菌血症、败血症、脓毒症患者，一般在发热初期和旺季采集。已经用抗菌素治疗的人在下一剂药前采集。标本用无菌法在肘静脉中穿刺，成人每次10-20毫升，婴儿和儿童1-2毫升，血液放入抗凝剂聚茴香酸钠无菌瓶进行检查。大部分菌血症是周期性的，因此血液标本也要在24小时内定期收集，通常在24小时内收集2-3次血液标本，并分别培养。(b)脑脊液及其他无菌体液标本无菌采集脑脊液，脑脊液普通离心力10000g lOmin，沉淀物采集

3、显微镜检查。引起脑膜炎的致病源脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌、流感嗜血菌等抵抗力弱，没有耐寒性，容易死亡，因此采集的脑脊液应立即送去保温检查或床边接种。胸水、腹水、心包液等标本含量低，需要采集大量标本，以确保Tc检测；(3)尿液标本外尿道有正常菌群居住，因此采集尿液时要更加注意无菌操作，通常要用中间尿液作为检查标本进行清洁。在厌氧菌培养的情况下，使用膀胱穿刺方法收集，无菌湿氧小瓶。排尿困难的人可以排尿，但要避免多次排尿引起的尿路感染。(4)通过呼吸机标本郑智薰咽拭、痰、气管收集的标本均可作为呼吸机标本。后者可以避免正常菌群污染，诊断下呼吸道感染病原学的理想标本。郑智薰咽拭子和郑智薰咽洗液可用于鼻病毒

4、、呼吸机细胞病毒、肺炎衣原体、溶血性链球菌和其他病原学诊断。不合格痰标本(扁平上皮细胞25个低背景视野)富含上部呼吸机正常菌群，应注意病原学诊断。(5)粪便标本可以将脓、血、粘液粪便放在干净的容器里，以工作棉棒采集难以检查排便的人或婴幼儿。根据细菌种类，携带阳性液提高阳性检出率是适当的。例如，副溶血性弧菌引起的腹泻粪便必须放入碱性蛋白酶或卡1包中携带培养液。一次粪便培养阴性不能完全排除胃肠道病原体的存在，需要对传染性腹泻患者进行三次粪便检查，进行细菌培养。怀疑是寄生虫感染者的人要尽快携带水样，以保持原虫滋养体的活力。如果不及时发送检查，粪便标本将保存在包括10甲醛和聚乙烯醇的小螺丝塑料容器中。

5、(6)泌尿生殖系统标本根据不同疾病的特点和检查目的，徐璐采集不同的标本。例如，变性疾病经常抽取尿道分泌物、外阴烂灶边缘分泌物、阴道宫颈分泌物、前列腺液等。生殖道疱疹常穿刺疱疹液，盆腔脓肿在直肠子宫凹陷处穿刺脓液。疑似衣原体感染的标本用木柄擦拭后渡边杏。因为树木对致病源毒性起作用。除淋病奈瑟菌保温检查外，所有标本收集后保存40个，直到培养。，(7)外伤、组织、脓肿标本损伤范围大的外伤，应在不同部位收集多种标本。采集部位应首先去除污物，用碘、酒精消毒皮肤，防止表面污染菌混入标本，影响检查结果。开放性脓肿采集，无菌棉擦拭脓包和病灶的深部分泌物。封闭性脓肿，用无菌干注射器提取穿刺；如果怀疑是厌氧菌感染

6、者，则在抽取脓液后，立即抽出注射器内的空气，将注射器插入无菌橡胶塞子进行检查。否则，标本接触空气，厌氧菌死亡，林爽分离率降低。用于病毒检测的组织标本应放在具有灭菌盐水纱布的培养皿或病毒运输培养基内搬运，并通过均质管均质、离心、过滤进行病毒分离检测。(8)血清标本用于检查患者的特异性抗体效价，以帮助诊断感染性疾病。采集血液，在无菌试管中自然凝固，血栓收缩后吸收血清，加热56加热30min，停用补体成分。灭活血清保存在20。检查方法由实验技术直接或间接获得致病源及致病源结构成分是诊断感染性疾病的重要依据。林爽实验室中细菌性疾病以培养分离技术为主，以病毒性疾病免疫学方法为主。(a)直接显微镜检查标本

7、直接涂层、干燥、固定后染色或离心浓缩集菌、涂层染色、光学显微镜下致病源形态观察、染色性或宿主细胞内包涵体的特性观察。另一种方法是使用弦杆法或压积法，通过暗视野显微镜或相位差显微镜观察致病源生长、运动方式、螺旋形态和运动。湿涂层有助于检查寄生虫卵。直接经检查结果对医院学诊断有一定的意义。特别是无菌体液的直接警察，可以在脑脊液涂色中调查革兰氏染色阴性肾型双球菌，结合患者发烧、喷雾呕吐、激烈头痛、脑膜刺激征进行流行性脑脊髓膜炎诊断。正常菌群显性强度分泌物、多膜镜检查不能确定诊断，但进一步的检出程序、采用的方法、分离鉴定致病源必需培养器起重要提示作用，组织标本和疱疹分泌物涂片通过打火机染色后，发现多核

8、巨细胞和核内酸性涂片能早期诊断疱疹病毒感染。虽然不按林爽常规应用电子显微镜检查，但通过婴幼儿急性胃肠炎腹泻粪电子显微镜观察蟑螂形状的双层壳病毒颗粒，可以诊断为轮状病毒感染。常用的电子显微镜技术包括超薄切片标本电子显微镜观察、负染色标本电子显微镜观察和免疫电子显微镜技术。(b)致病源分离、培养和情感分离培养是医院学检查中确诊的关键阶段，致病源分离后才能进一步确认致病源和药敏实验。要分离和培养细菌，必须根据可疑细菌的生长培养特性选择适当的培养基，并提供适当的气体条件、温度、pH，以便细菌在体外人工培养基中生长和繁殖，形成菌落。根据菌落性(大小、颜色、气味、边缘、光滑、色素、溶血等)和细菌的形态、染

9、色性，通过细菌生化反应结果和血清学实验，可以确认分离菌。为了尽快得出对分离菌的检查结论，必须选择可靠、适用的特征作为鉴定指标，通过微量鉴定系统快速、轻松地识别分离菌。如果不能手动培养致病源(如病毒、立克次体、衣原体)，可以将标本作为易感动物、鸡胚或行细胞培养接种进行致病源分离。接种动物后，可以根据动物感染范围、动物发病情况及潜伏期等推测为某种致病源。根据接种在鸡胚上的病毒、徐璐不同接种途径的敏感性和形成的特殊病灶，有助于初步检查。由于细胞培养病毒、细胞内病毒增殖，引起细胞病变或红细胞吸附、干涉现象、血细胞凝固性质等，可以缩小病毒感情范围，用血清学方法进行最终检查。(3)通过致病源抗原检查的已知

10、抗体、免疫荧光技术、酶免疫技术、化学发光技术、乳胶凝集实验等技术，检查标本中未知的致病源抗原，这是致病源抗原检查。致病源抗原包括细菌体抗原、鞭毛抗原、毒素、攻击性酶、病毒衣壳蛋白、细胞膜抗原等。致病源抗原成分检查有助于早期诊断传染病，阳性结果表明存在某种感染性致病源，但对于有正常菌群的标本，应考虑联合抗原引起的交叉反应，在有严格的对照试验和排除试验的情况下，对阳性结果做出正确的判断。抗原检查诊断价值往往取决于其他标本。无菌体液、血液等标本中检测出特异性致病源抗原，具有诊断价值。例如，脑脊液中脑膜炎奈瑟菌抗原可以诊断为流行性脑脊髓膜炎。如果在子宫颈棉签或男性尿道棉签上检测出淋病奈瑟菌或沙眼抗原，

11、这是因为这些标本没有其他微生物或几乎没有。肛门棉棒中检测出致病源抗原后，肛门棉棒中存在多种微生物，因此存在交叉抗原，无法确定诊断。使用特异性好、效能高的单克隆抗体尤为重要。在进行严格控制和排除实验的时候，选择并准备完整的细胞标本，只有在活细胞内才能增殖的病毒或立克次体，衣原体，阳性的结果可以进行准确的病原学诊断。(4)致病源核酸检测核酸检测技术主要是聚合酶链反应(PCR)和DNA探针杂交技术。PCR通过细胞分裂液分解检测对象标本后，添加引物、4茄子核苷三磷酸、TaqDNA聚合酶、Mg包含、缓冲体系，然后延长变性、退火、三个茄子其他反应温度，进行多次循环，然后扩增的DNA产物，琼脂糖凝胶电泳染色

12、法、Southern印迹法、Southern印迹法、Southern印迹法感染性疾病的实验室诊断，特别是分离培养不容易的致病源诊断，被广泛应用。PCR的敏感性高，因此影响实验的因素很多，标本处理不当，外源性和内源性蛋白酶，核酸酶，DNA多酶抑制剂等都会引起假阴性反应。在反应体系中，极微量DNA序列的污染都可能产生假阳性结果，因此操作员必须制定严格的工作程序，防止污染，建立女性对比。在标记为放射性核素或郑智薰放射性物质的已知序列核酸单链探针和固定在固相载体上的标本中，将致病源核酸退火形成双链杂交体，通过对杂交标记物的检测确认标本中相应的致病源基因，这是核酸杂交法。杂交方法有很多固相法，其技术包括

13、斑点杂交、Southen印迹法、原位杂交法、Northen印迹法等。杂桥信号的检测一般采用显色法、辐射自现象、放射性核素脉冲数测量和发光法。核酸杂交法适用于还不能分离培养或分离培养困难的微生物检测。(5)致病源抗体检查是指在已知致病源抗原检查患者的血清中，用相应的抗体方法诊断传染病。常用的方法包括凝集实验、沉淀实验、补体结合实验、间接免疫荧光技术、放射免疫测定、酶联免疫吸附试验等。大部分抗体检查实验中使用的抗原是致病源特异性抗原(整体致病源、致病源成分或产物)，部分抗体检查使用致病源共同抗原(如诊断梅毒病时用右心提取的脂质抗原)，这种实验是非特异性实验。，抗体测试的价值通常使用灵敏度、特异性和

14、预测值进行评估。林爽医生应根据其目的要求，实现某些疾病确诊、排除某些疾病或疾病治疗监测效果。理论上，不存在导致所希望的高度敏感的高音调预测值和高度特异性的高阳性预测值的实验。实际上，根据诊断的两个茄子基本目的，敏感性和特异性选择实验项目。为了排除某些疾病，选择高灵敏度、高清晰度预测值的实验。确诊某种疾病时，即选择高特异性、高阳性预测值的实验。细菌感染检查，细菌感染检查1，检查特征各种细菌有一定的形态，染色特性，生化反应，抗原结构。通过标本直接显微镜检查、病原体的分离培养鉴定、病原体的抗原检查、核酸检测、细菌感染后机体免疫反应产物测定及药物敏感性实验，对细菌感染性疾病进行及时准确的病原学诊断。在

15、检查项目中，尤其是以细菌分离培养鉴定为主，在无菌标本中检查细菌的情况下，牙齿细菌是被感染的医院，如血液中的细菌检查、败血症诊断。脑脊液期间发现细菌是细菌性脑膜炎。在有正常菌群的标本中检测到细菌的情况下，应区分正常的牛居菌群或致病细菌，并根据细菌的定量数量判断是否是感染的病原体。例如，如果尿液中分离出革兰阴性杆菌，定量在10毫升cfu菌中形成单位菌数以上，则是尿路感染。项目检查、染色标本显微镜检查1革兰氏染色革兰氏染色和显微镜检查是快速诊断细菌感染的简单方法，用于各种渗出液、提取液、尿液、脑脊液、血液的细菌检查。2.抗酸染色抗酸染色应用于痰标本分枝杆菌检查，对结核病诊断有重要意义。染色色标本显微

16、镜检查l .湿板显微法检测(examination of wet mount)，通过深色视野显微镜或相位差显微镜观察标本中病原体的生长和运动方式，有助于诊断疾病致病源。2.湿片细菌数湿片高倍视野镜检查尿，高倍视野发现1个以上细菌诊断尿路感染致病源。分离培养分离培养是细菌学检验的关键。目的从临床标本中找出活细菌进行鉴定，确认致病性及耐药性，指导抗菌治疗和预测治疗效果。由于细菌培养所需的条件和生长特性不同，因此，根据林爽要求、检验标本的性质和培养目的，培养基、接种方法和培养条件必须不同。鉴定技术鉴定是指将从标本中分离出来的细菌按照分类原则放在特定系统的适当位置，是细菌分类的实验过程。细菌鉴定技术是

17、根据生物化学鉴定、血清学鉴定、常数生物化学鉴定技术开发的数字鉴定技术。serologic identification(数字鉴定)和serologic identification(数字鉴定)而成的，这三种鉴定技术的基础上，还包括：生物化学鉴定、血清学鉴定、血清鉴定、化学鉴定。生长缓慢的细菌(结核杆菌)或林爽症状中多种细菌感染的诊断也可以使用PCR方法。抗体检查抗体检查适用于抗生素治疗后或慢性细菌性感染。因为在牙齿时，致病源分离培养往往是阴性，可以通过抗体检查诊断感染。感染后抗体反应相当复杂，抗体检查结果必须考虑特异性和敏感性。一次性高效抗体不能完全说明问题。双血清(第一部分急性生殖器，第一部分第一周，几周后恢复期)，效价增加4倍，感染。因此血清学诊断更多地适用于流行病学调查诊断。利用血清学方法诊断细菌感染，包括肥料月反应、航海球菌溶血素“0”实验、兔热病和波热的凝集反应检查、检查军团菌病的荧光抗体实验等。细菌毒素检查1外毒素(exotoxin)检查有生物学法、免疫血清学法、PCR法、自动化仪器检查法。2.内毒素(endotoxin)可以检