化学发光免疫(免疫学)

1、.1，612518，造祖国，化学发光免疫技术，2，基于抗原抗体反应的免疫学检测技术，凝集反应沉淀反应补体参与的反应荧光免疫反应放射免疫酶免疫技术化学发光免疫技术金免疫技术。3，化学发光免疫技术，第一节发光和化学发光第二节发光酶免疫测定(cleia)(chemiluminescence enzyme immunoassay)第三节化学发光免疫测定(ECLI)(chemiluminessay)，4，化学发光免疫技术：灵敏的化学发光分析和特异抗原抗体免疫测定为一体的检测技术。特征：特异性高，敏感性高，易于分离，快速，无试剂毒，安全可靠，自动化。概念，5，化学发光免疫技术的类型，根据发光剂1。发光酶免

2、疫测定(cleia)化学发光酶免免疫测定(chemiluminescence enzymeimmunoassay 2)。化学发光免疫测定法(ECLI)化学发光免疫测定法immuno assay 3。电化学发光Electrochemiluminescence Immuno Assay根据分离方法分为1。微粒子化学发光免疫测定2。磁性粒子化学发光免疫测定。6，第一节发光和化学发光剂，1，发光的物质从电子激发态返回基态时释放的能量表现为光的释放，1。照明发光：发光剂被短波长入射光照射后进入刺激状态，在恢复基态时发射长波长的可见光。2 .生物发光：反应器质量在荧光素酶的催化下利用ATP能力生成激发态氧

3、化荧光素，这是在回复基态时以光子形式释放多余能量。3 .化学发光：室温下化学反应生成光的发射。化学发光是一个多阶段的过程。7，lucifer Razer ATP；O2；Mg2，氧化萤火虫荧光素，萤火虫荧光素，生物发光，返回，以牙齿产物分子或中间态分子衰变到基本状态时发射光子的形式发射能量(即发光)。2 .化学发光剂、化学发光剂或发光基质：参与化学发光反应的能量传递，最终以发射光子的形式释放能量的化合物。发光剂分为荧光素、生物发光和化学发光剂。9，可以参与化学发光反应。抗原或抗体偶联后形成稳定的合子试剂；耦合后，保持了较高的杨紫效应和反应动力。标记物的理化特性，特别是免疫活性必须保持不变或几乎不

4、变。化学发光剂必须符合以下几个茄子条件。返回，10，1。酶促反应发光基质是指通过酶的分解作用发光的发光基质。在CLEIA中常用的酶是HRP和ALP HRP的发光体鲁米诺，羟基苯乙酸ALP的发光体是AMPPD，4-MUP(荧光基质)特征：标志物，过氧化物酶的基质，1.1鲁米诺及其衍生物，H2O2/HPA是H2O2，1.2 HPA，H2O2 HRP，荧光，氧化二聚体，12，AMPPD，AMPPD在碱性条件下由ALP生成相当稳定的AMP。、光、ALP/oh-、1.3 360nm PPD、hpo 42-、13，4- MUP，4-MUP，荧光，ALP，1.4 4-MUP，4-mu，360奈米此处光源，1

5、4、2.反应快，背景低，神秘高，发光体量与AE浓度呈线性关系。一般试剂：吖啶酯(acridinium，AE)，CO2光，15，3。电化学发光剂是指在电极表面通过电化学反应发光的物质。特征：电极上的反应；电子载体是三聚氰胺(TPA)化学发光剂：三聚氰胺钌、回收物、三聚氰胺钌分子结构、Ru(bpy3)2-、16，电化学发光结构图。牙齿过程在电极表面反复制造很多光子，产生光。利用发光体和蛋白质之间的氨基、羧基、硫氢羟基等基团形成不可逆转的连接。例如：三联的羟基南瓜酰胺基团可以与蛋白质、抗原激素和核酸结合。18，2节发光酶免疫测定(CLEIA)，1原理是酶免疫测定的一种。但是，最后酶反应中使用的基质是

6、发光体，发光反应发出的光是在特定的仪器中测量的。2 .技术类型取决于酶促反应气质1 .荧光酶免疫测定法2。化学发光酶免疫测定法。19，1)反应模式：1。双抗体三明治法：经常用于大分子检测2。双抗原三明治法：经常用于抗原检查3 1。磁粒子分离法：用抗原或抗体修饰磁性粒子将标记本的相应抗原或抗体及酶的抗体或抗原结合起来，最终通过磁场将酶标记物IC和玻璃酶标记物结合起来的技术。b，f分离技术，磁铁，3。包皮周分离法：聚苯乙烯稀物质制成的珠子作为抗原或抗体载体，抗原抗体反应后状态和自由状态的酶标志物结合分离，24，化学发光酶免疫测定反应电路图，取消清洗，25，3。酶发光反应添加4-MUP，酶抗体ALP

7、将4-MUP分解为4-MU，在360nm刺激光的照射下释放448nm的荧光，经过电脑处理，记录光的强度。3，方法评价1，灵敏度高酶发光增强剂发光稳定剂2，非特异性吸附可导致高本底。如果洗涤不彻底，会导致假阳性。26，第三节化学发光免疫测定法(CLIA)，1，原理化学发光剂，抗原或抗体直接标记，通过与试验标本对应的Ab或Ag，磁性颗粒性的Ag或Ab反应和磁场分离结合状态(沉淀部分)和自由状态的化学发光剂标记物。2，技术类型1。分离方法通常采用磁粒子分离技术。2 .免疫学反应模式酶发光免疫测定技术3。区别在于其标记是吖啶酯，而不是酶。技术要点，2 .分离技术在磁场中洗两三次后，快速冲洗没有组合的不

8、必要的Ag和标签Ab。3 .充分洗涤化学发光反应后，加入H2O2和pH纠正液NaOH，AE在没有催化剂的情况下分解发光，进行仪器检测和分析。28，1.AE背景噪音低，化学反应简单，没有快速催告剂。方法评估，2 .AE和大分子的结合不会减少生成的光量，因此提高灵敏度和灵敏度可能达到10-15g/ml。3 .AE段宜恩试剂有效期，最多1年。，4 .固相分离剂是一种非常精细的磁粉，除了增加包面积，加快反应外，清洗和分离更容易，更快。29，第4节电化学发光免疫测定法(ECLI)，1，原理是在电极表面电化学发生的特异性化学发光反应，实际上包括电化学和化学发光两个茄子过程。ECL是传记启动发光反应，CL通

9、过化合物混合启动发光反应。Ab用化学发光剂三连吡啶Ru(bpy)32表示，通过Ag-Ab反应和磁主分离技术，根据三连吡啶钌在电极上发射的光的强度测量的Ag或Ab进行定量/定性处理。2，技术类型1。分离方法通常采用磁粒子分离技术。2 .免疫学反应模式同工酶发光免疫测定技术3。该标记物不是酶，而是三吡啶钌，30，1。三吡啶钌标记抗体生物素标记抗体测试标本，技术要点，2。添加链霉亲和素(SA)，3 .蠕动泵将RU (BPY) 32-A B-AG-A B-B-A-A-磁珠复合物吸入流动测量室，磁珠被工作电极下的磁铁吸附在电极表面。同时，免费Ab也从测量室中脱落。4 .驱动泵插入TPA，电极电压，开始ECL反应过程。牙齿过程在电极表面反复进行，产生大量光子，光电倍增管检测光的强度，与Ru(bpy)32的浓度呈线性关系，可以测量要测试的Ag的含量。31，原理图，返回，32，方法评估，标记回收，所以发光时间，强度，很容易测量。灵敏