自身免疫病及免疫检验.ppt

1、,免疫学检验,第二十五章 自身免疫病及免疫检验,目录,1.自身耐受(self-tolerance) 正常情况下，免疫系统对宿主自身的组织和细胞不产生免疫应答。 2.自身免疫 (autoimmunity) 当某种原因使自身耐受性破坏时，免疫系统就会对自身组织成分、细胞成分及其产物发生免疫应答。,第一节 概述,一、基本知识,3.自身免疫病(autoimmune disease，AID) 自身免疫应答过强或持续时间过久，表现为质和量的异常，所产生的自身抗体和（或）自身致敏淋巴细胞对表达自身靶抗原的细胞和组织发动攻击，导致损伤或功能障碍，并出现相应临床症状。,二、自身免疫病的分类,1.按病程分为急性和

2、慢性两种 2.按病因清楚与否分为原发性与继发性两种 3.按受累的解剖系统分为结缔组织病、神经肌肉疾病、消化系统病和内分泌疾病等 4.按自身抗原的分布范围分为器官特异性和非器官特异性两类,按发病部位的解剖系统分类,器官特异性自身免疫病,器官非特异性自身免疫病,患者的病变常局限于某一特定的器官，由对器官的特异性抗原的免疫应答引起,全身性或系统性自身免疫性疾病；患者的病变可见于多种器官及结缔组织（结缔组织病或胶原病）,按自身抗原的分布范围分类,三、自身免疫病的共同特点,1. 血清中有自身抗体或自身反应性致敏T淋巴细胞。自身抗体和（或）自身反应性T细胞作用于靶抗原所在的组织细胞，导致组织损伤和功能障碍

3、。 2.可复制出与AID相似的动物模型，并可通过血清或致敏的淋巴细胞使疾病被动转移。 3有一定的遗传倾向。病情转归与自身免疫反应的强度密切相关。 4部分自身免疫病好发于女性，且发病率随年龄增长而上升。 5免疫抑制剂治疗有效但不能根治。,一、自身抗原形成,第二节 自身免疫病的发病机制,1.隐蔽抗原的释放,2.自身抗原改变,交感性眼炎,3.分子模拟,4表位扩展,2.B细胞的多克隆激活,二、免疫细胞和免疫调节功能的异常,3.调节性T细胞的功能异常,1.T、B细胞的异常活化,4. MHC-II类分子异常表达,三、遗传因素,HLA 基因与自身免疫病相关性举例,四、生理因素,五、环境因素,1.自身免疫病的

4、发病率随年龄增长呈上升趋势； 2.自身免疫病的发病也具有明显的性别差异，女性发病率较高,自身免疫病的发生与日晒、潮湿、寒冷等环境因素可能有关。,1.自身抗体介导细胞破坏,六、自身免疫病的病理损伤机制,病理机制：II型超敏反应,常见疾病：新生儿溶贫、重症肌无力、Graves病,自身免疫性溶血性贫血,重症肌无力,Graves病,3.自身反应性T细胞引发炎症性损伤,2.循环免疫复合物介导组织损伤,病理机制：III型超敏反应,病理机制：IV型超敏反应,抗核抗体（antinuclear antibody，ANA) 是以真核细胞的核成分为靶抗原的自身抗体的总称；在某些因素作用下改变细胞核某些成分性质，激发

5、机体产生许多抗不同核成分的抗体。,第三节自身免疫病检验,一、自身抗体的检测,（一）抗核抗体检测,ANA主要是IgG，也有IgM、IgA、IgD和IgE； ANA无器官特异性和种属特异性； ANA主要存在于血清中； 将检出ANA作为AID存在的依据。,抗DNA抗体：抗dsDNA/抗nDNA、抗ssDNA/抗dDNA等 抗组蛋白抗体(AHA)：抗H1、抗H2A、抗H2B、 抗H3、抗H4抗体等 抗非组蛋白抗体：抗nRNP/抗U1RNP、抗Scl-70、 抗SSA、抗Sm、抗SSB、抗Jo-1、抗Rib抗体、 AnuA、抗DNP、抗DM53抗体 抗RANA抗体、抗着丝点、抗Ku抗体等 抗核仁抗体：抗

6、PM-Scl抗体、抗Th/To抗体、 抗U3-RNP、抗4-6-S-RNA抗体等,1.ANA的类型和临床意义,ANA谱,抗天然DNA (native DNA,nDNA) 抗体，又称抗双链DNA (double stranded DNA,dsDNA) 抗体。,抗变性DNA (denatured DNA,dDNA) 抗体，又称抗单链DNA (single stranded DNA,ssDNA)抗体。,对SLE有高特异性;SLE诊断标准之一,缓解期降低,70%90%SLE 活动期增高,药物疗效,抗dsDNA抗体,抗DNA抗体,抗组蛋白抗体（anti-histonic antibody,AHA）： 由

7、H1、H2A、H2B、H3和H4五个亚单位，各自都 有特异性抗体；,AHA,检 出 百 分 率,抗 dsDNA,50,70,90,100,药物诱导性狼疮只能检出此,SLE,AHA,AHA,抗组蛋白抗体,可提取性核抗原 (extractable nuclear antigen，ENA) 是盐水可提取性核抗原的总称，是非组蛋白的核蛋白，属酸性核蛋白抗原，由许多小分子量的RNA和多 肽组成。,抗ENA抗体,对类风湿有特异诊断价值的ENA： 抗nRNP(nuclear RNP,nRNP)抗体； 抗Sm抗体； 抗SSA抗体； 抗SSB抗体； 抗Scl-70抗体； 抗Jo-1抗体； 抗核糖体抗体 。,核蛋

8、白(DNP) 由DNA和蛋白质组成。DNP抗原有不溶性及可溶性两种，分别产生相应的抗体。,检出 百分 率,抗 DNP,20,40,60,80,SLE 非活动期,SLE 活动期,抗不溶性DNP抗体,抗 DNP,抗 DNP,100,RA滑 膜液中,抗 DNP,抗可溶性DNP抗体,（1）抗DNP抗体,抗核小体抗体（anti-nucleosome antibody，AnuA) 核小体是细胞核染色质的基本组成单位; 细胞凋亡致核小体大量蓄积，并诱导B细胞产生AnuA AnuA是SLE特异的标志性抗体。,抗dsDNA抗体,抗核小体抗体,抗dsDNA和抗Sm阴性的SLE阳性 率为60%80%，特异性97%。

9、,（2）抗核小体抗体,2.ANA的检测方法,稀释患者血清可做定量检测，1:80稀释仍呈阳性对诊断SLE有较大参考价值。,（1）间接荧光免疫法,均质型,抗核抗体核型,着丝点型,核仁型,斑点型,用间接ELISA检测抗dsDNA抗体、抗组蛋白抗体和抗核小体抗体。,（2）ELISA法,SDS-PAGE,加待检血清,形成分子大小不同区带,分离,电转移,PVDF膜或NC膜,抗ENA与相应抗原特异结合,抗人IgGHRP,ENA抗ENA抗人IgGHRP,（3） 免疫印迹法,显色并判读结果,类风湿因子(rheumatoid factor，RF): 抗变性IgG的自身抗体，可为19S的IgM，也可为7S的IgG和

10、IgA。 可与人变性IgG结合，但不与正常IgG发生凝集。 RF可在RA患者检出，约70%90%的血清、约60%的滑膜液可检出IgG类的RF；,（二）类风湿因子测定,IgG类抗体与相应抗原结合后发生变性； 炎症过程亦可发生IgG变性，构成自身抗原，刺激机体产生各种抗IgG抗体； 滑膜液中的IgG类RF与变性IgG结合可形成中等大小的免疫复合物，相比血清中的IgM类RF更易致病。,RF检测方法,最常采用的检测方法。 以吸附在聚苯乙烯胶乳颗粒上的IgG作诊断试剂，与待检血清中的RF结合后，出现胶乳凝集颗粒。此法的灵敏度和特异性不高，且只能检出血清中的IgM类的RF。,1.间接胶乳凝集试验,稀释待检

11、血清至一定浓度后，加入定量的变性IgG诊断试剂，即用透射比浊或速率散射比浊仪，检测血清中的RF。此法快速、敏感性高、精密度高、稳定性好、可定量分析，但仍只能检测IgM类RF。,2.免疫比浊法,IgM、IgG和IgA类RF可用ELISA检测，临床上多采用双抗原夹心法或间接ELISA进行测定。,3. ELISA法,（三）其他自身抗体测定,二、细胞检查,（一）淋巴细胞检测,1特异性致敏淋巴细胞,2淋巴细胞数量和比例,如淋巴细胞转化试验或吞噬细胞移动抑制试验,检测淋巴细胞的总数、T、B细胞分类与计数、CD4/CD8亚群比例等进行,（二）狼疮（lupus erythmatosus，LE）细胞试验,LE细

12、胞为胞浆内含有大块状聚合DNA的中性粒细胞。 有7580的SLE病人LE呈阳性，RA、结节性动脉炎、多发性硬化症、硬皮病、部分肝炎、皮肌炎和变态反应病等偶尔亦可呈阳性反应。,三、免疫复合物和补体检测,四、细胞因子检测,1.CK在自身免疫病的免疫病理损伤中有重要作用。 2.检测CK，对研究疾病的发生机制、了解病情、指导治疗均有意义。,对诊断部分自身免疫病和判断疾病的活动情况有一定的意义。,1.筛选试验与确诊性试验的合理组合。 2.结合临床症状选择性检测相关的自身抗体。 3.切忌盲目的全面检测自身抗体。 4.通常以抗核抗体作为筛选试验，ANA在许多AID中 可呈阳性。 5.ANA阳性时，再进行针对特异性靶抗原成分的自身 抗体的检测，达到明确诊断的目的。,第四节 自身抗体的检测实验选择的原则,一、自身抗体检测的一般原则,二、实验室方法的选择及结果的确认,IIF法,筛选试验,ANA,抗dsDNA,IB法 ELISA法 IFA法,特异性实验,抗原基质片(如Hep-2、小鼠肝印片/切片)，加入自身抗体后与抗原相结合，再与