神经生物学研究方法.ppt

1、神经生物学常用的研究方法,一、结构的研究：形态学方法,二、生理学方法：生理功能的研究,三、对脑功能定位的研究,四、行为学研究方法,1）HE、尼氏染色、免疫组化（荧光） 、原位杂交等 2）神经束路追踪法：轴浆运输追踪法、变性束路追踪法 3）神经组织培养观察 4）影像学检测,一、结构的研究：形态学方法,WT,MU,P7P10P13P15-P21,P7P10-P14,Camk2-cre;foxg1 L1,control,MU,Camk2-cre;foxg1;Rosa-gfp GFP,40000X,PSD/Active zone 宽度、 囊泡数量、 囊泡数量与active zone相对值,150000

2、X,Adult TM7 rest14 Golgi staining,Foxg1f/f,Camk2-creer; Foxg1f/f,WT,MU,Dendrites branch complexity of pyramidal cells in Sensory cortex,示踪,WT,MU,Camk2-cre;foxg1 AD TM5-15 DIL,示踪,报告基因示踪,P2,P6,P17,P4,组织培养,组织培养,ko,wt,影像学检测,二、生理学方法：生理功能的研究,LTP ： 当突触前的传入纤维受到高频刺激时，兴奋性神经递质谷氨酸从突触前膜到突触间隙，和突触后膜上的N M D A受体结合，激

3、活N M D A受体，使阻碍钙离子内流的镁离子被移除，大量钙离子内流，激活细胞内的一系列分子过程，最终形成LTP。 （1） 钙离子（2） NMDA（3） aCaMKII（4） PKA（5） AMPA （6）PSD-95,三、对脑功能定位的研究,脑立体定位技术、手术与电刺激 脑电图与影像学观察,瑞士学者赫斯(W. R. Hess，1881-1973)运用脑立体定位技术对下丘脑功能作了详细、深入的研究，从而开启了进行脑深部研究的大门。 1935年，葡萄牙精神病学家莫尼兹（A.C. Moniz, 1874-1955）设计了双侧前额叶脑白质切断术，结果手术成功并取得令人满意效果，从而开创了真正的精神外

4、科。 以上两项方法学进步，为进一步研究脑功能和手术治疗某些脑部疾病创造了必要条件。赫斯和莫尼兹共同获得了1949年诺贝尔奖。脑立体定向术己成为现代精神外科中最主要的手术方法。,.Moniz, 1874-1955,W. R. Hess，1881-1973,四、行为学研究方法,I am depressed. Me too.,理想的动物模型,Open Field,Elevated Plus Maze,Free exploration for 5 min,Main measurement: Distance moved in the maze, %Time spent in Open Arms: ti

5、me(open)/(total time) Risk assessment, etc.,(anxiety),(EthoVision system),Social interaction test,Tail suspension test (TST),应激模型 小鼠悬尾法（tail suspension test），一种行为绝望法。将小鼠 倒悬 在实验小室内，观察5分钟内不动时间。 抗抑郁药可减少不动时间,Forced swim test (FST),强迫游泳实验(forced swimming test) 动物在恶劣环境下不能逃逸时，便出现行为绝望(behavioural despair)，处

6、于一种不动状态（immobility）是一种有效地评价抗抑郁药的大鼠抑郁模型。,T-maze (Spatial Working Memory),Main measurement: (6 trials/day) %Correct response (Running latency) (Elapsed between the opening of the stem-door and the closing of the arm-door),Object Recognition,The animal is familiarized with two identical sample objects.

7、 Following a retention interval the animal is re-exposed to a third copy of the now familiarized sample object and a novel object in the test phase. The explorative preference towards the novel over the familiar object serves as index measure to assess recognition memory for the identity of objects.

8、,(EthoVision system),Water Maze,B. For working memory,A. For reference memory,Prepulse inhibition, latent inhibition,前脉冲抑制是指机体在先受到一个前脉冲刺激后，对随后受到的强听觉刺激的惊吓反应产生弱化或降低的现象。 潜伏抑制是指机体在受到重复的条件刺激（CS）却又没有配以强化刺激（非条件刺激US）后（即预暴露），机体随后对该条件刺激产生的条件反应将受到弱化或减小。这可以用来评判机体忽略无关刺激的一种能力。 这两种模型都反映了大脑在信息处理过程中，对注意力信息处理的门控机制。在精

9、神分裂症病人身上可见到这些机制受到损害。,ASR:,PPI:,听觉惊吓反射的前脉冲抑制：,听觉惊吓反射(ASR)：当动物受到一个强烈的听觉刺激时就会引起一种惊吓反应，即听觉惊吓反射,前脉冲抑制（PPI）：当动物受到一个强烈的听觉惊吓刺激（刺激脉冲）之前，动物已先受到一个较微弱的刺激（前脉冲），那么此时动物对该惊吓刺激（刺激脉冲）的惊吓反射就会大大减弱。,惊吓反射是哺乳动物的一种最强的全身性反射活动，它可以由突发性的强感觉刺激所引起，并具有潜伏期短、刺激的累加作用强、和反应的动态范围宽等特点,听觉惊吓反射的前脉冲抑制：,那么这个前脉冲又是如何“门控”这个刺激脉冲的呢？当动物受到这个前脉冲刺激时，

10、动物大脑就开始工作并处理这一前脉冲信息，与此同时也会阻止其他的刺激信号进来，就像“门控”一样。这是为了避免感觉信息泛滥，不让太多的感觉信息传入。这反映了机体的一种中枢抑制过程，以便保证正在进行的信息处理过程不受另外刺激的干扰。前脉冲抑制缺损可以理解为机体对前脉冲的信息处理能力减弱。精神分裂症表现出较小的前脉冲抑制（PPI），说明其“门控”机制受损：因此太多的信息进入大脑以致泛滥。,获得性无助法(learned helplessness) 大鼠遭受无法逃避的电击以后，将其放在可以逃避电击的环境下，呈现逃避(escape)行为障碍.,不可予测性长期应激实验（chronic unpredictablc stress） 大鼠在遭受长期应激后出现一系列情绪性行为改变，如自发活动减少、学习能力下降、食欲减退、快感缺失（anhedonia）. 电击、振荡、