鸡新城疫的诊断

1、技能训练8 鸡新城疫的诊断,掌握鸡新城疫的临床诊断和实验室诊断的方法,实训目标,疑似鸡新城疫病死鸡、剪刀、镊子、病理剖检记录表、工作服、胶靴、围裙、橡胶手套和来苏儿等。 911日龄SPF鸡胚、恒温箱、照蛋器、蛋盘、接种箱、注射器（15ml）、针头、中号镊子、剪刀、眼科剪刀和镊子、毛细吸管、橡皮乳头、灭菌平皿、试管、吸管（0.5ml、1ml、5ml）、酒精灯、试管架、胶布、蜡、锥子、煮沸消毒器、消毒剂（3%碘酊棉、75%酒精棉、5%石炭酸）、离心机、离心管、生理盐水、96孔V型微量血凝集反应板、微量吸液器、混合振荡器；1%鸡红细胞悬液、鸡新城疫弱毒疫苗、鸡新城疫标准阳性血清等。,仪器材料,方法步

2、骤,（一）ND的临床诊断 （二）ND的实验室诊断,（一）ND的临床诊断,1按家禽尸体剖检程序，首先检查鸡的体表组织，然后检查皮下组织，最后打开体腔，暴露整个胸腔和腹腔器官，检查内部组织器官。鸡新城疫主要检查消化道病变。 2将剖检所见填写于病理剖检记录表内。 3根据剖检记录，归纳分析进行初步诊断。,（二）ND的实验室诊断,1病毒的分离培养 2病毒的鉴定,1病毒的分离培养,（1）病料采集与处理 分离病毒的材料应来自早期病例 病鸡扑杀后应用无菌操作采取脾、脑、肺、肝、肾等器官组织混合 将病料制成15110的乳剂，每毫升加入青霉素10000单位、链霉素10mg，以抑制可能污染的细菌 置冰箱中作用24h

3、，然后离心沉淀，取其上清液作为接种材料。 在这同时，应对接种材料作无菌检查如有细菌生长，应将原始材料再作除菌处理，也可改用细菌滤器过滤除菌。,（2）鸡胚接种 用911日龄的SPF鸡胚（如果没有SPF鸡胚，也可用非免疫鸡胚），将上述处理过的材料，取0.10.2ml接种于尿囊腔内。 接种后以熔化的石蜡将卵壳上的接种孔封闭，继续置温箱内。 每日上下午各照蛋一次，连续观察5d，接种24h内死亡的鸡胚，废弃不用，于24h后死亡的鸡胚，立即取出置4冰箱冷4h以上（气室向上）。 然后用无菌操作吸取尿囊液，并做无菌检查，尿囊液浑浊应废弃。留下无菌的尿囊液置低温冰箱保存，供作进一步鉴定。 在这同时可将鸡胚倾入一

4、平皿内，仔细观察病变。由新城疫病毒致死的鸡胚，胚体全身充血，在胚头、胸、背、翅和趾部有小出血点，尤其以翅，趾部明显，这在诊断上有参考价值。,2病毒的鉴定,（1）微量血凝试验（HA） （2）微量血凝抑制试验（HI）,（1）微量血凝试验（HA）,一方面判断分离病毒是否具有血凝性，另一方面确定HI试验中所用抗原的HA滴度。 用微量移液器向反应板每个孔分别加生理盐水50l，共加12孔。 换一吸头吸取50l待检病毒液，加于第1孔的生理盐水中，并用移液器挤压35次使病毒混和均匀，然后取50l移入第二孔，混匀后取50l移入第3孔，依次倍比稀释到第11孔，第11孔中液体混匀后从中吸出50l弃去。第12孔不加病

5、毒抗原，作对照。 换一吸头吸取1红细胞悬液依次加入112个孔中，每孔加50l。 加样完毕，将反应板置于微型振荡器上振荡1min。并放室温（1820）下作用3040min，或置37恒温培养箱中作用1530min取出，观察并判定结果。,结果判定及记录 “”表示红细胞完全凝集。红细胞凝集后完全沉于反应孔底层，呈颗粒状，边缘不整或锯齿状，而上层液体中无悬浮的红细胞。 “”表示红细胞未凝集。反应孔底部的红细胞没有凝集成一层，而是全部沉淀成小圆点，位于小孔最底端，边缘水平。 “”表示部分凝集。红细胞下沉情况介于“”与“”之间。 新城疫病毒液能凝集鸡的红细胞，但随着病毒液被稀释，其凝集红细胞的作用逐渐变弱。

6、稀释到一定倍数时，就不能使红细胞出现明显的凝集，从而出现可疑或阴性结果。,血凝试验（HA）,HA视频,用上述分离病毒制备4单位病毒，再用标准的阳性血清进行HI试验。 用微量移液器向112号孔中分别加入50l生理盐水。 换一吸头取标准阳性血清50l 置于第孔中，挤压35次混匀，吸出50l放入第二孔中，然后依次倍比稀释至第10孔，并将第10 孔的液体混匀后取50l弃去。第11孔为病毒对照，第12孔为盐水对照。 用微量移液器吸取稀释好的4个血凝单位的病毒抗原，向111孔中分别加50l。然后，振荡1min，将反应板置室温下作用20min， 或在37恒温培养箱中作用510min。 取出血凝板，用微量移液器向每一孔中各加入1红细胞悬液50l，再将反应板置于微型振荡器上振荡1530s，混和均匀。 将反应板置37 温箱中作用1530min 后取出，观察并记录结果。,（2）微量血凝抑制试验（HI）,结果判断和记录 “”表示红细胞凝集抑制。高浓度的新城疫抗体能抑制新城疫病毒对鸡红细胞的凝集作用，使反应孔中的红细胞呈圆点状沉淀于反应孔底端中央，而不出现血凝现象。 “”表示红细胞完全凝集。随着血清被稀释，它对病毒血凝作用的抑制减弱，反应孔中的病毒逐渐表现出血凝作用，而最终使红细胞完全凝集，沉于反应孔底层，边缘不整或呈锯齿状。 “”表示不完全抑