食品中酸性橙碱性橙和碱性嫩黄的测定征求意见稿

1、ics 67.050x 04备案号：db22地方标准db 22/ t xxxxxxxx食品中酸性橙、碱性橙和碱性嫩黄的测定 determination of orange 、chrysoidine and auramine o in foodsxxxx - xx - xx发布xxxx - xx - xx实施 吉林省质量技术监督局发布前言本标准由吉林省质量技术监督局提出并归口。本标准起草单位：吉林省疾病预防控制中心本标准起草人：刘思洁、方赤光、李青、姜楠、杨大鹏食品中酸性橙、碱性橙和碱性嫩黄的测定1 范围本标准规定了食品中酸性橙、碱性橙和碱性嫩黄的测定方法。本标准适用于腐竹、腐皮、豆腐干、海鱼、

2、辣椒及其制品、花椒及其制品的测定。本标准的检出限： 酸性橙7.0g/kg；碱性橙5.0g/kg；碱性嫩黄5.0g/kg。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。gb/t 6682分析实验室用水规格和试验方法（gb/t 6682-1992， iso 3696：1987，mod）3 原理 以含50%甲醇、1%甲酸的50mmol/l 乙酸铵水溶液作为提取溶液，利用wax弱阴离子交换固相萃取柱（60mg，3ml）对样品进行净化，uplc-ms/ms 测定酸性橙、碱性橙

3、、碱性嫩黄含量。采用基质加标工作曲线外标法定量。4 试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为去离子（符合gb/t 6682规定的一级水要求）。4.1 甲酸：色谱纯。4.2 甲醇，色谱纯。4.3 乙酸铵，分析纯。4.4 氨水，优级纯。4.5 提取溶液：50mmol/l 乙酸铵水溶液含甲醇50%（v/v）、甲酸1%（v/v）。4.6 固相萃取柱平衡溶液：50mmol/l 乙酸铵水溶液含甲酸1%（v/v）。4.7 淋洗溶液：50mmol/l 乙酸铵水溶液含甲醇5%（v/v）、甲酸1%（v/v）4.8 洗脱溶液：5%（v/v）氨水甲醇。4.9 样品稀释液：5mmol/l 乙酸铵水溶液含甲醇5

4、0%（v/v）、甲酸0.1%（v/v）。4.10 标准品：酸性橙钠盐（orangesodium salt）标准品、碱性橙（chrysoidine g）标准品、碱性嫩黄（auramine o）标准品。4.11 标准储备液：准确称取0.0100 克酸性橙、碱性橙和碱性嫩黄标准品，用50%甲醇水溶液溶解并定容至10.0ml。-20以下保存，有效期为一年。4.12 标准工作液：配制酸性橙、碱性橙和碱性嫩黄混合标准系列，浓度为：0.4、0.8、2.0、3.2、4.0g/ml。5 仪器5.1 超高效液相色谱-质谱/质谱联用仪：配备有acquity 超高效液相色谱仪。5.2 冷冻高速离心机（15000 r/

5、min）。5.3 振荡器。5.4 氮吹仪。5.5 固相萃取装置。5.6 oasis wax 固相萃取柱（60mg，3ml；waters 公司 ）。6 分析步骤6.1 试样制备与保存取混合均匀后的供试样品，作为供试试料，取混合均匀后的空白样品，作为空白试料。6.2 提取称取1.0 克试样于50ml 离心管中，加入10.0ml 提取溶液，超声提取30 分钟，10000 rpm 离心10 分钟，上清液转移至另一离心管中；残渣中加入10.0ml提取溶液再次提取，合并两次提取溶液。6.3 净化取5.0ml 样品提取液，用固相萃取柱平衡溶液稀释定容至50.0ml，过wax固相萃取柱（3ml 甲醇、3ml

6、水、3ml 固相萃取柱平衡溶液活化），用2ml 淋洗液、2ml 水淋洗，5ml 洗脱液洗脱，收集洗脱液，氮气吹至近干，用样品稀释液定容至1.0ml，过0.22m 滤膜后超高效液相色谱-串联质谱测定。6.4 基质加标工作曲线的制备称取1.0 克空白样品基质于50ml 离心管中， 称取6 份，分别加入标准系列溶液100l，按6.2 进行操作，制备基质加标标准工作曲线，酸性橙、碱性橙和碱性嫩黄浓度为：0、10.0、20.0、50.0、80.0、100.0 ng/ml。6.5 测定6.5.1 色谱参考条件6.5.1.1 色谱柱： acquity uplc beh c18 (1.7m， 2.1 mm50

7、 mm)。6.5.1.2 柱温：40 。6.5.1.3 流动相：a 相：含0.1%甲酸的5mmol/l 乙酸铵水溶液； b 相：乙腈。梯度洗脱情况见表1。表1 梯度洗脱程序时间（min）流速（ml/min）流动相a流动相b0.00.390105.00.310906.00.310906.50.3901010.00.390106.5.1.4 进样量：5l。6.5.1.5 流速：0.3 ml/min。6.5.2 质谱条件离子化方式：碱性橙、碱性嫩黄，esi（+）；酸性橙esi（-）；扫描方式：多反应监测mrm；毛细管电压：3.5 kv；源温度：110 ；脱溶剂气温度：350 ；脱溶剂气流量650 l

8、/h。质谱分析优化参数见表2表2酸性橙、碱性橙、碱性嫩黄保留时间、定性定量离子对及锥孔电压、碰撞能量。化合物锥孔电压（v）母离子（m/z）子离子（m/z）碰撞能量（ev）酸性橙20329.1155.9127.8*2035碱性橙22213.1121.1*772018碱性嫩黄25269.1148.1*122.02525 * 为定性离子6.5.3 测定在上述仪器条件下测定基质加标标准溶液及样品溶液。各检测目标化合物以保留时间和特征离子与定量离子所对应的lc-ms/ms 色谱峰面积相对丰度进行定性。要求被测试样中目标化合物的保留时间与标准溶液中目标化合物保留时间的相对偏差小于20%；样品特征离子的相对丰度与浓度相当混合标准溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表3 的规定，则可判断样品中存在相应的被测物。表3 定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度50%20%50%10%20%10%允许的相对偏差20%25%30%50%6.5.4 空白试验除不加试料外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。6.5.5 色谱图色谱图参见附录a。出峰顺序为碱性橙、酸性橙、碱性嫩黄。7 结果计算以标准溶液浓度对定量离子峰面积绘制标准曲线，外标法定量。按式（1）计算(1)式中：c