岛津LC-10AT型HPLC操作规程.ppt

1、1，第一节纤维状LC-10AT型HPLC操作程序，2，目的使用3360规格纤维状LC-10AT型高效液相色谱法。范围：适用于使用纤维状LC-10AT型高效液相色谱法。责任：经营者对牙齿程序的实施负责。3、1、系统配置、牙齿系统包括一个LC-10ATvp溶剂泵、Rheodyne 7725i手动样品阀、SPD-10Avp紫外可见探测器、N2000颜色频谱数据电脑工作站、电脑等。4，2，准备，1，所需流动相准备，用适当的0.45m滤膜过滤，超声波除气20min。2、根据被检查样品的需要，更换相应的颜色频谱柱(方向注意)和定量环。3.样品和标准溶液配制，用适当的0.45米滤膜过滤。(注意腐蚀性和有机系

2、统的溶剂)4，确保仪器各部件的电源线、数据线和输液管道连接正常。5，打开电源，依次打开不间断电源、泵、检测器，泵和检测器自检结束后，打开打印机、电脑显示器、主机，最后打开色谱电脑工作站。3，启动，6，4，设置参数，1，设置波长：检测器显示初始屏幕时，按func键一次，波长数字键闪烁，输入所需的波长值，然后按Enter键确认。按CE键退出初始屏幕。2，设定流速：泵显示初始屏幕时，按func键，使用数字键输入所需流速(通常为1ml/min或更高)，然后按Enter键确认。按CE键，将终止，7，5，更换流中并排气泡，1:管道中的吸入过滤器放入包含准备好的流相的低液瓶中。2:逆时针旋转泵排水阀180，

3、打开排水阀。3:泵的purge键打开泵指示灯，泵以9.9ml/min的速度高速冲洗，3min(可配置)后自动停止，通常看起来管道没有气泡。4:顺时针旋转排水阀，关闭排水阀。5:如果管路中仍有气泡，请重复以上操作，直到排出气泡。6:如果不能用上述方法排出气泡，请从柱入口移除连接管，将其放入废液瓶，将流速设置为5ml/min，按pump键，冲洗3min，按pump键停止泵，重新连接柱，将流速重置为指定值。8，6，平衡系统，1，基准视图：1.1: N2000按色谱数据电脑工作站操作过程打开联机色谱电脑工作站软件，1.2:输入实验信息和设置各种方法参数后，按“1.3:收集数据”页上的按钮。9，6，平衡

4、系统，2，2.1:按泵上的pump键，泵启动，pump指示灯亮。检查方法规定的流动相清洗系统通常需要至少6倍的支柱体积的流动相。2.2:确保每个管道连接处没有液体泄漏。例如，必须排除泄漏额。2.3:观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动不应超过1MPa。如果超过，可以初步判断柱前管路仍有气泡，检查管道后可以操作。2.4:观察基线变化。如果已显影为基线漂移0.01mV/min，噪音为0.001mV，则系统被视为达到平衡状态，可以获得样品。10，7，采样，1，采样前按探测器零键调整零，在软件过程中按零点校正按钮修改基线零，然后单击基线视图按钮反弹。2.用样品溶液冲洗注射器，去除气泡后，可以提取适量注入

5、。3.含量测定的对照溶液和样品供应溶液各注入至少2次。11，8，频谱判断和结果计算，系统适用性实验：三个茄子主要指标分离度(加强):一般应为1.5。重复性：两种光谱的峰值面积不得超过1%。理论托盘数：需要规定的理论托盘数。尾随因素：0.95T1.05保留时间：对比度和样本的主成分保留时间应大致匹配。RSD: 3%，12，8，光谱的判断和结果计算，1，内表法用包含对照品和内表物质的比较溶液得出频谱峰响应(F)。其中As和Ar分别是内表物质和对照品的峰值或峰值，ms和Mr分别是，13，8，计算频谱判断和结果，2，外部表示法：从包含对照品的对照溶液中获得的频谱最高峰响应值，r=Mr/Ar(其中Mr和

6、Ar分别计算对照品的数量和相应的峰值或峰值)。)然后，根据试用品溶液的颜色频谱峰值响应值，计算试用品中测量成分的含量(MI)。MI=Rai(其中ai是试验品溶液中测量成分的峰值或峰值)。必要时，根据稀释倍数、样品量和显示量换算为显示量的百分位数，或者根据稀释倍数、样品量换算数百分钟的含量。14，9，管道清洗和入口，1，分析完成后，首先关闭检测器和数据处理器，用经过过滤和除气的适当溶剂清洁色谱系统。正常柱一般使用正甲烷，相反，如果柱使用盐流相，首先使用水，然后用甲醇-水冲洗，冲洗前按，然后用水冲洗密封三次。15，9，管道清洗和进水口，2，清洗完成后，流速逐渐降低到0，关闭泵，取样器也可以应用相应

7、溶剂清洗，使用附加到样品阀的专用清洗接头。3、断电、使用登记、内容包括日期、检查品、彩波柱、流动相、柱压、使用时间、仪器通电状态等。16，特殊情况:到泵、取样器、频谱柱、检测桶等频谱流量系统，分析完成后(5.1)要充分冲洗。尤其是使用盐流相的时候，首先要用水，然后使用甲醇。9，管道清理和入口，17，谢谢！18，第2节岛津LC-10AT型HPLC注意事项，19，1，流动相，1 2。水上流动奖经常更换(通常在2天以下)，防止肠道菌变质。20，2，样品，1，过滤器或离心方法处理样品，以确保样品不包含固体颗粒。2、比流动相或流动相弱(对于相反的柱，极性大于流动相)。在正常柱的情况下，用极性小于流动相的

8、溶剂准备样品溶液，可能的流动相准备样品液。3，在手动注入时，样品量尽可能小，使用定量管定量时，样品体积应是定量管的35倍。21、3、颜色频谱柱、1、使用前，请仔细阅读颜色频谱柱附带的文档，并注意pH值范围、行程类型等的复盖范围。2、使用符合要求的移动床；3、保护柱的使用；4.如果使用的流化床是含盐流化床，则使用反相色谱柱后，首先使用水或低浓度甲醇水(如5甲醇水溶液)，然后用甲醇冲洗。22，3，频谱柱，5，频谱柱不用时，用甲醇冲洗，去除，两端紧闭，保存。6、不要高压冲洗支柱；7、高温下长期不使用硅胶结合色谱柱。使用中轻轻拿着，轻轻地放。23，4，操作过程，1，启动操作：(1)，打开电源，连接到H

9、arb时注意Harb电源，打开计算机，然后打开BOOTP服务器(正常启动时打开)。(2)，从上到下打开组件电源，Bootp Server显示信号(6行文字)，然后打开电脑工作站(On line)；先打开)；(3)，冲洗泵头，打开10异丙醇溶液的开关(必须用针扎)，控制流量大小(基于可流出的最小流量)。24，4，操作过程，(4)，注意各流动上剩余溶液的容积设置，设定容积低于最小值时自动停止泵，注意泵溶液的体积，及时添加液体。(5)，在使用过程中，要经常观察仪器的工作状态，及时准确地处理各种突发事件。，25，4，操作过程，2，首先使用的流动相冲洗系统一定时间(例如，如果使用的流动相是盐流动相，则必

10、须先用水冲洗20分钟以上，然后换成盐流动相)，在正式样品分析前，应打开30分钟D等或W等，延长灯的使用寿命。3、设置颜色频谱操作方法，保留自己命名的Method，注意不要复盖或删除别人的方法和实验结果。26，4，操作过程，4，使用手动取样器注射时，注射前和样品后都要清洗注射器，唾液一般选择与样品液匹配的溶剂，用样品溶液清洗样品注射器3次以上，并去除注射器中的气泡。5.溶剂瓶中的沙芯过滤头易碎，因此更换流动上要注意保护，发现过滤头脏或长菌的时候不能用超声波清洗，可以用5%稀硝酸溶液浸泡洗涤。27，4，操作过程，6，实验结束后，通常先用水或低浓度甲醇水溶液冲洗整条线30分钟以上，用甲醇冲洗。冲洗时

11、关闭d灯、w灯。7.关闭电源时，关闭泵、检测器等，关闭电脑工作站电源，然后关闭电源，最后关闭色谱仪各组成部分，关闭冲洗泵溶液的开关。28，4，操作过程，8，用户要认真执行仪器使用登记制度，有问题立即向老师报告，擅自拆卸仪器渡边杏。未经操作训练，将渡边杏擅自使用仪器。29，自己总结的12茄子注意事项，以下12茄子注意事项是从自己安装和使用液相色谱仪的经验中得到的，可能有一些片面性。如果有不恰当的地方，请提出很多宝贵的建议。(David aser，Northern Exposure(美国电视电视剧)，30，1，流动相必须使用HPLC级试剂，前过滤器去除其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um以

12、上的薄膜过滤)。2.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后恢复室温使用。31，3，不能将纯乙腈用作流动相。这导致单向阀粘在一起，阻止泵流入。4.使用缓冲溶液时，完成样品后，应立即用离子水冲洗管道和支柱一个小时，用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，充分冲洗离子。在柱塞拉杆外部，完成样品后，也要用去离子水冲洗20ml以上。32、5。长时间不使用器具，要取下柱子，用塞子封好保存，渡边杏用纯净水保存柱子，要使用有机相(如甲醇等)。因为纯净水容易发霉。6.每次完成样品后，要用溶解样品的溶剂(如甲醇)等冲洗取样器。33，7.C18柱子通过输入绝对蛋白质样本、血液样本和生物样本渡边杏。8.堵塞导致压力过大，

13、提前根据柱混合器中的过滤管路过滤器单向阀进行检查和清洗。洗涤方法：用溶剂冲洗异丙醇。放在异丙醇中间，用超声波清洗。10用稀硝酸洗。34，9。泡沫会使压力不稳定，再现性下降，因此要防止使用过程中产生泡沫。10.如果输液管内没有液体，就要使用注射器吸入液。通常在输液前要进行流动相清洗。35，11。要注意柱子的PH值范围，渡边杏注射江珊强碱的样品，尤其是碱性样品。12.在更换流动上，首先要将吸入过滤器部分放入烧杯，清洗振动边，然后插入新流动上。更换不溶性流化床应改用异丙醇。，36，谢谢！37，3节高效液相色谱中常见的问题和处理方法，38，1，保存时间变化，1。柱温变化2。在等度和梯度之间没有达到足够

14、的平衡。3.缓冲液容量不足。4.柱子污染5。柱内条件变化6。柱内条件变化，1 .柱恒温2。最小10倍支柱体积的流动相平衡柱3。25mmol/L的缓冲液，4 .每天冲洗柱子5。流动相调节6。保护柱使用，39，2，缩短保留时间，1。流速增加2。重置样例过载流速2。样品量减少3。流动相PH值保持在37.5检查柱的方向。4.流动相蒸发或防止沉淀5。柱恒温，40，3，延长保留时间，1。流速减小2。硅胶柱的活动点变化3。耦合损耗4。流动相配置变化5。温度下降或碱到钝化柱3 .将流动相PH值保持在37.5检查柱的方向。4.防止流动相蒸发或沉淀。5.柱子恒温，41，4，肩带或分叉，1。样品体积太大。2.样品溶

15、剂太强。3.柱塌缩或短路形成4。柱内烧结不锈钢故障5。总样品体积低于第一棒的15%。2.弱样品溶剂3。更换频谱柱，弱腐蚀性条件4。更换烧结不锈钢，在线过滤器，过滤样品5。更换取样器转子，42，5，鬼峰，1。样品阀门残余峰2。样本中的1。每次使用后用强力溶剂清洗阀门，改善阀门和样品的清洗。2.试样状态3。重新平衡柱子，将流动相用作样品溶剂(尤其是离子色谱法)。4.每天新配，抗氧化剂5。通过变化平衡时间检查水质，HPLC级水，43，6，6 1。气泡(峰值)2。污染(随机噪音)3。探测器等连续噪音4。传记干扰(偶然噪音)5。探测器上有气泡。1.流动相脱气，柱等压2。清洁柱子，净化样品1。柱超载2。峰值干扰3。硅羟基作用4。柱内烧结不锈钢故障5。柱塌缩或短路形成6。死体积或支柱外体积太大。7.柱效率下降，1 .减少取样量并增加柱直径，以获得大容量固定相2。清洁样品，移动曹征3。添加三乙胺在线过滤器，过滤样品5。更换颜色频谱柱，使用弱腐蚀