第一章+实验室设备和技术.ppt

1、第一章 基本设备和实验技术,准备室,培养室,细胞学实验室,生化分析室,无菌室,一、 实验室设置,基本实验室,辅助实验室,实验准备, 培养基的 配制,洗涤 与灭菌等,离体材料 的无菌操 作,又称 接种室,控制条件 下的离体 培养,常规设备： 天平、冰箱、酸度计、离心机、纯水器,二、实验室所需的设备、用具,灭菌设备：高压灭菌锅、干热消毒柜 过滤灭菌装置,二、实验室所需的设备、用具,培养容器：培养瓶、培养皿等,二、实验室所需的设备、用具,无菌操作设备：超净工作台,二、实验室所需的设备、用具,接种器具：镊子、剪刀、解剖刀等,二、实验室所需的设备、用具,cm,60cm,14cm,定时器,培养设备：培养箱

2、、培养架等,三、常用技术,（一）洗涤技术,新购玻璃器皿的洗涤： 1%HCl浸泡过夜 洗衣粉刷洗 自来水冲洗 蒸馏水漂洗 使用过的玻璃器皿的洗涤： 去除酸洗步骤，其它同上 有污染物的玻璃培养器皿： 高压灭菌 洗衣粉刷洗 自来水冲洗 蒸馏水漂洗 金属器具：用酒精擦洗，并保持干燥。,（二）灭菌技术,1) 接种室的灭菌,接种室灭菌 紫外灯照射(无菌室、超净台)：波长260nm，距离小于1.2m，15-30min。每周一次. 熏蒸灭菌(无菌室):100ml/20m2甲醛+5g/20m2 高锰酸钾；新的实验室或长期不用的实验室.湿度较大的季节要定期进行. 喷雾消毒(超净台;无菌室)：75%酒精或3%来苏儿

3、,2)接种工具、容器的灭菌,干热灭菌：160-180,1.5-2.0h 湿热灭菌：121, 20-30min 在无菌操作时，把镊子、剪刀、解剖刀等浸入95%的酒精中，使用之前取出在酒精灯火焰上灼烧灭菌。冷却后，立即使用。操作中可采用250或500ml的广口瓶，放入95%的酒精，以便插入工具。,3) 培养基的灭菌,高压湿热灭菌：121, 18-20min,4)不耐热类物质的灭菌,过滤灭菌（ Filter sterilization）：某些激素（如天然生长素IAA、玉米素ZT、赤霉素GA等）、维生素、抗生素等不耐热或射线照射的物质。,Filter sterilization-过滤灭菌,滤膜0.45

4、m以下,1.过滤器先灭菌，灭菌温度121，20min。 2.细菌滤膜的网孔直径一般小于0.45m和0.22m,Filter sterilization,灭菌的原则：消毒剂与外植体应接触足够长的时间以除去外植体表面的微生物，但应尽量减少对外植体细胞的破坏。,4)外植体的灭菌,常用外植体灭菌步骤,冲洗植物材料除去泥土等大的颗粒； 切成适宜的大小; 浸入70-75乙醇，0.5-1min； 用2-5NaClO溶液（加1滴表面活性剂）表面 消毒5-30min；或HgCl2 (0.1 0.2%) 2-10 min 用无菌水冲洗至少3遍,每次1-2min; 灭菌的材料可用无菌纸吸干。,（三）无菌接种技术,1. 外植体的选择,常用外植物体的来源,自然环境下 生长的植物,无菌环境下 生长的植物,温室环境下 生长的植物,1.外植体的选择 来源：健壮、无病虫害、发育正常 大小：视培养目的而定 部位（生理状态及发育年龄） 取材季节：生长开始的季节。（苹果）,组织清洗 70%酒精浸1030s 灭菌剂处理 无菌水涮洗,Note:此步骤应在超净台上完成,2、外植体无菌处理,3、无菌接种,接种前的准备,酒精擦拭,旋转灼烧,取外植体,接种,盖好瓶塞,修剪外植体,接种,培养物污染可能的原因,培养容器 培养基本身 外植体 接种室的环境