硕士论文-MPSPLGA微球的制备及其治疗大鼠脊髓压迫损伤的实验研究

1、第三军医大学硕士学位论文MPS-PLGA微球的制备及其治疗大鼠脊髓压迫损伤的实验研究姓名：欧阳忠申请学位级别：硕士专业：外科学（骨外）指导教师：任先军20060501第三军医大学硕士学位论文能评分（评分）均降低，且随时间延长逐渐升高，时仍低于正常水平，各时相点组内存在显著差异（），、三组组与假手术组比较也有显著差异（），、组于术后、明显高于组（），组、时优于组，但差异不显著（）。（）大鼠脊髓损伤后波潜伏期明显延长，随时间增加逐渐恢复。组于天基本恢复正常，组也于天时恢复至正常水平，组天时与组仍有显著统计学差异。（）含量和活性于脊髓损伤后已有升高，打高峰并持续到。、两组明显低于组（），但仍高于组（

2、），且组低于组。（）免疫组织化学染色相对阳性染色面积和平均光密度于伤后达最低点，各时间点、组与组间存在显著差异（），、组间无统计学差异（）。（）免疫组织化学染色阳性细胞百分比和平均光密度在损伤后达高峰，并于时恢复正常水平。在、三个时间点，、组与组间存在显著统计学差异（），组和组间也有明显差异（）。结论：（）型溶剂挥发法是微球很好的制备方法。（）按正交设计优化工艺制备的微球符合药学要求。（）早期应用能够减轻脊髓继发性损伤，促进神经功能恢复。（）微球蛛网膜下腔注射给药治疗脊髓急性损伤的效果不亚于于外周给药。关键词：甲基强的松龙；乳酸羟基乙酸共聚物；脊髓损伤；运动诱发电位；一氧化氦；一氧化氮合酶；第

3、三军医大学硕士学位论文（），】、，锄），印，曲，：。埘露，咖，缸培，五第三军医大学硕士学位论文：（：），：（）（），（），：，锄，：，印，印，衔：“，（），（）（）搬金（）撕（）觚第三军医大学硕士学位论文，（）疏：印叫：蜥巧；一；第三军医大学硕士学位论文英文缩写英文缩写一览表英文全称（）（）蚤：埘、矾一衔曲：巧中文全称脊髓损伤甲基强的松龙甲基强的松龙琥珀酸钠聚乳酸乳酸羟基乙酸共聚物聚乙稀醇磷酸缓冲生理盐水链霉亲和素生物素酶复合物美国联邦食品药品管理局全国性脊柱脊髓损伤研究表皮生长因子纤维生长因子载药量包封率高效液相色谱（法）给药体系水相油相水相二氨基联苯胺一氧化氮一氧化氮合成酶神经微丝苏木素和

4、伊红平均光密度运动诱发电位兴奋性氨基酸中枢神经系统第三军医大学研究生学位论文独创性声明秉承学校严谨的校风和科研作风，本人申明所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名：逮蛰磐日期：第三军医大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解第三军医大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读

5、学位期间论文工作的知识产权单位属第三军医大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为第三军医罨大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论意被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容（保密内容除外，可以采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：指导教师签名：日期：如，；第三军医大学硕士学位论文微球的制备及其治疗大鼠脊髓压迫损伤的实验研究刖罱脊髓损伤一直是医学领域研究的重点和难点，受到国内外医学界的广泛关注，药物治疗，生物治疗都曾尝试用于脊髓损伤的治疗，但效果皆不尽如人意。甲基强的松龙（，）是一种合成的中效糖皮质激素，自世纪年代开始用于

6、临床治疗脊髓损伤，其实验研究及临床效果得到国内外专家的一致认同【，目前已作为脊髓损伤的常规用药，也是唯一被美国联邦食品药品管理局（，）批准的治疗药物【，美国国立急性脊髓损伤研究会予以比较的药物【。美国、年二次全国急性脊髓损伤研究州。）表明，在早期（伤后内）给予大剂量（埏，之后，）能明显改善患者的运动、感觉功能，第三次（）研究则证明后内用者宜使用，内给者宜持续使用【。虽然，大剂量甲基强的松龙冲击治疗急性脊髓损伤的效果得到医学专家的认同，但是作为激素类药物大量应用不可避免引发糖尿病、免疫抑制、继发感染、伤口愈合延迟、应激性溃疡、负氮平衡等全身并发症，其中消化道出血是最常见的并发症【，另外，【】证实

7、急性脊髓损伤后随时间增加，脊髓组织摄入的急剧下降，因此，外周大剂量给药在引发全身副作用的同时还可能降低甲基强的松龙的生物利用率影响疗效。脊髓损伤修复的给药途径包括全身用药、损伤局部注射给药、心室内给药、鞘内注射给药和蛛网膜下腔给药。全身用药包括口服、静脉注射和动脉注射给药，目前甲基强的松龙就是通过该途径治疗脊髓损伤【】，这种给药途径存在药物再分配问题和全身副作用的问题，而损伤局部直接给药则会加重脊髓损伤。目前最常用的给药途径是鞘内微量泵注射给药，该方法能够将药物以恒定的速率注射到鞘膜腔内，维持药物的有效浓度，但是植入的微量泵是一种侵袭性占位，易引起慢性炎症反应。”。蛛网膜下腔注射给药是一种新型

8、、安全、可靠的给药途径【】，其优点之是能够将注射药物（如生长因子、神经保护因子）储备在注射点。蛛网膜下反复注射操作烦琐而且易引发感染，医学专家希望通过次注射达到长第三军医大学硕士学位论文期治疗的目的，这样，药物微球化技术就应运而生。药物微球化技术就是将药物或其他活性成分分散予明胶、聚乳酸（）、乳酸羟基乙酸共聚物（）、壳聚糖等高分子聚合材料中，制成直径的微球，以达到药物缓慢、持续释放的目的。作为囊材的高分子聚合物要求具有很好的生物相溶性和可降解性，在众多囊材中应用的最普遍、最广泛，目前已经成功制备了白介素（）、表皮生长因子（）、纤维生长因子（）【等药物的微球。微球的制备方法有很多，水溶性药物最常

9、用的是型复乳法，用该方法制备的微球形态规整、再分散性好、载药量和包封率较高、药物释放稳定【。本实验以为囊材采用型复乳法制备微球，建立大鼠脊髓压迫损伤模型，通过蛛网膜下腔注射微球给与治疗，探索新的剂型和给药途径对急性脊髓损伤的治疗作用。第三军医大学硕士学位论文第一部分甲基强的松龙琥珀酸钠乳酸羟乙酸共聚物微球的制备和优化材料与方法材料主要仪器设备和试剂型超声波细胞粉碎机型电子天平（精确度）双显双控恒温磁力搅拌器减压真空干燥机光学显微镜及摄像系统高效液相色谱仪（分子量万，：）甲基强的松龙琥珀酸钠（）标准品甲基强的松龙琥珀酸钠（）针剂聚乙烯醇（，平均分子量万万）二氯甲烷（分析纯）甲醇（色谱纯）正庚烷（

10、分析纯）乙酸铵（分析纯）微球的制备生产厂家宁波新芝生物科技公司德国沙多利斯公司北京金北德工贸有限公司日本日立公司德国莱卡公司美国公司中国科学院成都有机化学研究所美国普强江苏制药有限公司比利时卢森堡大药厂美国公司郑州化学试剂厂南开大学精细化学实验厂上海绿源精细化工厂丹东中和化工厂制备方法采用型复乳法制备微球。初乳将水溶液倒入二氯甲烷溶液中，用超声波细胞粉碎机制成初乳液。复乳将初乳液倒入的水溶液中，在磁力搅拌器上搅拌制成复乳液。溶剂挥发将复乳液倒入超纯水，在双显双控磁力搅拌器上搅拌挥发掉二氯甲烷。微球硬化待有机溶剂挥发干净，过滤微球悬浊液，用注射器抽取正庚烷第三军医大学硕士学位论文将滤膜上残存的微

11、球冲入到烧杯中，浸泡瑚。微球洗涤过滤微球正庚烷悬浊液，超纯水冲洗遍，冲洗过程中用注射器轻轻吹打。微球干燥将滤得的微球连同滤膜放入减压真空干燥机内干燥。微球收集保存用小药匙将干燥的微球小心自滤膜上刮下，称重，保存。检测指标形态、粒径取少量干燥微球，加入适量纯净水充分混匀制成悬浊液。吸取少量悬液滴在载玻片上，加盖玻片，光学显微镜下观察微球形态，应用摄像系统测量微球粒径。观察时随机选取个视野，计数个微球。载药量（）、包封率（）称取一定量微球，加入二氯甲烷充分溶解，用高效液相法测微球载药量【，计算包封率。试剂配置：标准溶液，工作液；流动相：甲醇一乙酸铵缓冲液（，乙酸铵浓度，甲醇：乙酸铵：）。甲醇为色谱

12、纯，其他为分析纯。样品检测主要仪器：高效液相色谱仪包括进样器、进样针、泵、检测器、计算机（公司美国）、色谱柱（，柱），用进样针抽取上述样品，加入高效液相色谱仪进样器中对样品中的含量进行检测（检测波长，流动相流速）。计算：以不同浓度的标准稀释液的峰值面积为纵坐标，其相应浓度为横坐标绘制标准曲线。测得样本的峰值面积，从标准曲线上查得该样本的浓度，根据浓度推算微球载药量和包封率。计算公式：。（）堡堑号署，。（）型鬻，。体外释药速度按中国药典释放度测定法第二法（桨法）【，以智能药物溶出仪测定微球体外释药性能。称取适量微球各置于溶出杯中，分别加入生理盐水，恒温于，搅拌速度为叩，分别于第、和取出样品，将样

13、品离心（坤，分钟），取上清液（剩余液体及残渣加水后重新补充到溶出杯中），采用高效液相法测得上清液中浓度（具体方法同测载药量和包封率），推算微球累积释放率。以累积释放率和时间拟合方程，并作出微球的体外释药曲线图。微球制备工艺优化第三军医大学硕士学位论文单因素实验设计通过单因素实验分别考察内水相浓度（内，），内水相和油相体积比（水：油），初乳功率（），初乳时间（），复乳转速（），复乳时间（），溶剂挥发时间（）个因素在不同水平下对微球形态、粒径、载药量（）和包封率（）的影响。实验设计表见表（考察某一因素时，其他因素均固定在水平）。表单因素实验设计表正交实验设计根据单因素实验结果，固定初乳时间为，溶剂

14、挥发时间为，选取浓度（内，）、内水相和油相体积比（水：油）、初乳功率（）、复乳转速（）、复乳时间（）个因素各取个水平（见表）进行正交设计【，进一步优化微球制备工艺，实验设计表见表。按文献【】介绍的统计方法以粒径啪粒子分布百分数、微球的载药量（）、药物包封率（）为指标，对微球制备工艺进行综合考察。其处理公式为：！塑竺：讲】乃式中为三项指标的实验和得值；、为可接受的的最大值、最小值，可根据预试验结果设定；为单个指标的优化指数，当，计作，计作；为三项指标的总优化指数。由每次实验测得的及设定的、可计算出进而求得。三项指标可接受的最大、最小值见表。表正交设计因素水平表表正交实验设计（）表实验号望茎查兰水

15、：油初乳功率（）内（）复乳时间（）复乳转速（）地挖垮第三军医大学硕士学位论文表三指标可接受的最大、最小值根据优化结果制备微球，保存备用。并检测其形态、粒径、载药量（）、包封率（）、体外释药速度和稳定性。微球稳定性检测将优化组合条件下制备的微球放在冰箱中保存，三个月后取出再分散于水中，光学显微镜下观察其形态、测量粒径，采用高效液相法检测载药量和包封率，与制备完成时形状比较有无差异。统计学处理实验结果用均值标准差（）表示，运用软件包处理数据结果。镗甲耋口单因素实验结果考察因素对微球形态、粒径的影响浓度对微球的形态、粒径影响不明显（）。内水相和油相体积比小于：微球形态规则，表面光滑，近圆形，当体积比

16、大于：后，微球形态不规则，表面粗糙；随体积比增加，微球粒径逐渐增大（）。初乳功率、时间过大或过小微球都出现不规则形态。初乳功率对微球的粒径有明显影响（），随功率增加微球粒径逐渐降低；初乳时间低于微球粒径较大，且分布不均匀，初乳时间到达后继续延长对微球粒径影响不大。复乳转速、时间分别低于转分、秒时，微球形态不规则，高于这个值后微球近圆形、表面光滑，且复乳转速、时间再增加对微球形态影响不大。复乳转速、时间对微球粒径影响显著（），随转速增大或时间延长微球粒径减小。有机溶剂挥发时间低于微球形态不规则、粒径较大，挥发时间超过后微球形态规则，粒径分布较均匀，随挥发时间的进一步延长粒径无明显变化（）。（见表

17、和图）第三军医大学硕士学位论文表各因素对微球形态、粒径的影响结果表（，粒径单位：）：微球形态；：微球粒径；优：微球外表光滑，形态规则近圆形；中：微球外表较光滑，形态教规则；差：微球外表粗糙，形态不规则。乍梨兹蘸。因素水平图各因素影响微球粒径的变化趋势图第三军医大学硕士学位论文考察因素对微球载药量（）、包封率（）的影响由表、图和图可得到以下结论：浓度对微球、的影响：浓度对微球载药量有显著性影响（），对微球包封率也有较明显的统计学影响（）。随浓度增加，微球载药量升高而包封率下降。水：油对微球、的影响：水：油对微球包封率影响显著（）。随着体积比增大包封率下降。在浓度一定的前提下，水：油增大的同时投药

18、量也增大，此实验中不能真实反映内水相和油相体积比对微球载药量的影响。初乳功率对微球、的影响：初乳功率时，载药量、包封率随初乳功率的增加而增加，当初乳功率后，反而下降。初乳时间对微球、的影响：初乳时间为时微球载药量、包封率最高，时间延长或缩短载药量、包封率均有所降低但影响不明显。复乳转速对微球、的影响：在所选范围内，微球、随着复乳转速的加大呈进行性增加趋势。（）复乳时间对微球、的影响：随着复乳时间的延长，微球载药量、包封率均呈上升趋势。（）溶剂挥发时间对微球、的影响：溶剂挥发时间为时，微球的载药量和包封率均较低，分别为和，时间延长为后两者分别为和，进一步延长挥发时间对微球的载药量和包封率影响不大

19、。（）表各因素对、的影响结果表（，）因素水平内（咖）水：油，初乳功率（）（）】，驼（），（）】第三军医大学硕士学位论文一例鬣裰兹蕤静藕目冀。：因素水平图各因素影响微球载药量的变化趋势图因素水平图各因素影响微球包封率的变化趋势图一浓度水：油初乳功率初乳时间一复乳转速一复乳时间溶剂挥发时间：一浓度“一水：油初乳功率初乳时间一复乳转速一复乳时间溶剂挥发时间第三军医大学硕士学位论文正交设计（）实验结果由表和表可见，浓度对微球综合指标影响最大（），应取水平；水油体积比和初乳功率影响次之（），应分别取水平和水平；而复乳时间和复乳转速无显著影响（），应分别取水平和水平。号实验的综合优化指数最高（见表），因此

20、，微球制备工艺的最佳组合为：水油体积比：，初乳功率，浓度、复乳时间、复乳转速转分钟。按此工艺制备的微球形态规则呈圆形，表面光滑（图片见后），平均粒径，载药量，包封率。表正交设计实验结果表（）第三军医大学硕士学位论文表正交设计实验结果表表方差分析结果差异来源差方和自由度均方值水：油初乳功率（）内（）复乳时间（）复乳转速（）。注：（，），（，）第三军医大学硕士学位论文按优化工艺制备的微球体外释药速度的检测结果微球在释出的量占药物总量的，随时间延长累积释药率逐渐增加，、时分别达到、和（见表）。由微球体外释药曲线图（图）可见微球在前有明显的突释现象，达到，随后释药速度减趋于平缓。根据中华人民共和国药典

21、【规定的药物释放曲线拟合方法对药物的累积释放度进行曲线拟合得到：级方程：什，级方程：（。）一，方程：，为累积释药百分比，为释药时间（），为检验统计量，为相关系数，。为最大累积释放。按优化结果制得的微球体外释药符合上述三种方程，但方程的相关系数最大，所以更符合方程。表微球累积释药率结果表时间点（）】累积释药率（）。弋足、隶枢黩鼷噱舻州柙卅”。？肖州？。：，释药时间（）图微球体外释放药曲线图第三军医大学硕士学位论文微球稳定性检测结果微球的平均粒径为，载药量和包封率分别为和，与最初无明显差别。认为，优化组合工艺条件下制备的微球性质稳定。讨论关于微囊（球）的制备方法以各种可生物降解材料为载体制备载药缓

22、释微囊，是一种新型的药物给药系统（，），可使药物靶向、缓慢释放，提高局部药物浓度，增强疗效，同时减轻全身毒副作用。微囊制剂制备方法可归为物理化学法、物理机械法和化学法三大类【】。物理化学法又可分为单凝集法（）、复凝集法（）、溶剂非溶剂法（）、改变温度法和液中干燥法。单凝集法是在高分子囊材溶液中加入凝集剂降低高分子材料的溶解度而凝集成囊的方法。复凝集法是使用两种带相反电荷的高分子材料作为复合囊材，在一定条件下交联且与囊心物凝聚成囊的方法。复凝集法是经典的微囊化方法，它操作简便、容易掌握，适用于难溶性药物。溶剂非溶剂法是在囊材溶液中加入一种对囊材不溶的溶剂（非溶剂），引起相分离，而将药物包裹成囊的

23、方法。该方法适用的药物可以是固态也可以是液态，但必须对溶剂和非溶剂均不溶解，也不起反应。改变温度法不需凝集剂，而通过空者温度成囊，该方法中的囊材在高温时溶解，降温后成囊。液中干燥法是指从乳状液中除去分散相挥发性溶剂以制备微囊的方法，亦称溶剂挥发法。液中干燥法的干燥工艺按操作可分为连续干燥法、间歇干燥法和复乳法，前两者应用型、型及型乳状液，复乳法应用脚型或、型复乳。物理机械法是将固态或液态药物在气相中进行微囊化，需要一定设备条件。可分为喷雾干燥法（）、喷雾凝结法（）、空气悬浮法（）、多孔离心法（如）和锅包衣法（）。喷雾干燥法是先将囊心物分散在囊材的溶液中，再用喷雾法将此混合物喷入惰性热气流使液滴

24、收缩成球状，可用于固态或液态药物的微囊化。喷雾凝结法是将囊心物分散于熔融的囊材中，再喷于冷气流中凝聚而成囊的方法。该法中的囊材在常温下为固态，在教高温度能熔融。空气悬浮法是利用垂直强气流使囊心物悬浮在包衣室中，囊材溶液通过喷嘴喷射于囊心物表面，使囊心物悬浮的热气流将溶剂挥干，囊心物表面形第三军医大学硕士学位论文成囊材薄膜而得微囊的方法。多孔离心法是利用离心力使囊心物高速穿过囊材的液态膜，再进入固化浴固化制备微囊的方法。锅包衣法利用包衣锅将囊材溶液喷在固态囊心物上挥干溶剂形成微囊。化学法是利用溶液中单体或高分子通过聚合反应或缩合反应产生囊膜制成微囊方法。又可分为界面缩聚法（）和辐射交联法。在上述

25、多种微囊制备方法中以溶剂挥发法最常用，该方法对一些免疫抑制剂【】、抗炎药物、抗癌药物、麻醉药、类固醇类药物和避孕药是比较成功的。随着制剂水平的提高，水溶性药物用这种方法也取得了较好的包封效果，例如，蛋白质类药物、肽类和疫苗等。型、型和型溶剂挥发法用于水溶性差或不溶于水的药物，而水溶性药物则采用型和型溶剂挥发法制备微囊。【儿用、四种溶剂蒸发法制备了水溶性药物的（分子量）微球，结果表明：用制得的微球，由于水溶性药物易分配进入水相，包封率为左右；法制得的微球载药量较高（），包封率为；法包封率可达，载药量，这是由于型复乳可有效地阻碍药物分配进入连续相；法的包封率和载药量均可达，这是因为最初形成的乳剂有

26、效地阻止了药物分配进入外油相连续相。法制得的微球突释严重，因为此法多可形成多孔性微球，其中溶剂蒸发的速度、溶剂的种类、含药量都可影响其孔隙率，真空干燥会使孔隙率增加，突释加快；型微球的释放先有一个时滞，然后有的药物在释放，后又出现一次突释。此类微球多为骨架型结构，第一次突释是由于药物从表面释放出来，随即药物随水渗入骨架，缓慢释放出来；法也可形成骨架微球，同法一样，药物释放前先需聚合物降解并形成孔隙，所以药物释放先有的时滞，后释放加快，其释药机理为双相释放。法微球，内释药仅，其余药物在数周内均匀缓慢释放，药物释放开始时是由于药物扩散，而后是由于微球的溶蚀。对和微球的稳定性考察发现，贮存三个月后，

27、微球的释放无显著变化，而则发生了改变，原因是法可加速聚合物的降解。朱家惠等【的研究表明溶剂蒸发萃取法（）可缩短制备时间，提高药物包封率，且使微球粒径分布集中。本实验药物为水溶性好的，应用型溶剂挥发法制备的微球形态规则、表面较光滑，平均粒径，粒径分布的占，载药量、包封率分别达到和，体外释药速度符合方程。因此型溶剂挥发法是微球合理的制备方法。第三军医大学硕士学位论文关于乳酸羟乙酸共聚物（）是目前研究最多的可降解生物材料之一【引，已获美国联邦卫生与食品管理局（）批准用作手术缝合线，心血管支架控释药物涂层，以及注射用微囊、微球、埋植剂等的材料【。乳酸羟基乙酸共聚物因具有以下特点而成为应用最多、最广泛的

28、缓释载体之一：可有效改善与蛋白质等亲水性物质的生物相容性，延长在生物体内的半衰期；良好的生物降解性，主要通过酯键分解而降解成酸性代谢产物，最终以水和二氧化碳排除体外，无毒、无体内聚集；聚合简单、可控制性强、缓释效果较好、价廉。的生物相溶性：是一种生物相溶性非常好的高分子聚合物，作为药物载体用于体内后不会在局部或全身引起明显炎性反应、免疫反应和细胞毒性反应。已有大量研究表明与骨瞰、眼【、皮肤、脑等组织具有很好的生物相溶性。金爱华等为研究的生物相溶性，用浸提液进行全身毒性实验、眼结膜刺激实验、肌肉刺激实验、热源实验、溶血实验和过敏实验，结果发现注射浸提液的动物无全身中毒和过敏反应；眼结膜刺激实验中

29、动物无流泪、结膜充血和分泌物增加现象，眼结膜涂片也未检查到炎性细胞；肌肉注射浸提液后局部无充血、红肿、坏死等现象；注射浸提液的动物体温升高均低于，符合热源检查的规定；另外的溶血度为，符合医用材料的溶血实验要求。因此作者认为具有良好的生物相溶性。的降解：的降解机制为主链含有不稳定易被水解或酶解的化学键，在体内水解脱酯生成乳酸单体，并在乳酸脱氢酶作用下氧化为丙酮酸，作为能量代谢物质参与体内三酸循环，终产物为水和二氧化碳，经肺、肾、皮肤排泄【引。有人猜想降解过程中有酶催化降解发生，但却未能证实。等在微粒粒径与水解的关系的方面作了研究。体内和体外研究表明了粒径大的微球为非均匀降解【，其中核部分的降解速

30、度较表面部分的降解速度快，与大体积微粒相反，粒径小于的微球是均匀降解。核部分与表面部分的降解速度相等【引。微球体外降解的形态评价也证明了微球的降解为均匀降解。本实验以为的载体制备微球，就是利用良好的生物相溶性和可降解性，达到缓慢释放的目的。关于正交实验设计正交设计（吡）就是按照正交表和相应交互表进行的实验设计，它是进行多因素水平实验的效率很高的设计方法。这种设计不仅能明确各因素的主次地位，第三军医大学硕士学位论文而且能知道哪些因素存在什么性质的交互影响，还可以找出诸多因素各水平的最佳配比，因此已广泛应用于各科研领域【、。正交设计保留了析因设计整体考虑、综合比较的优点，避免了析因设计的全面试验、

31、工作量大的弊端。实际上，正交设计是全面试验的部分实施，因此，一切多因素多水平的实验，诸如临床上多因素综合治疗，细胞培养最佳条件组合，最适条件，有效成分提取与纯化的最优条件【】，多步骤的化验过程与多环节的药品生产【蜘】等等，都可以用正交设计来确定最佳搭配。微球制备过程，是一种多因素制约、多步骤的药品生产过程，同样可以用正交设计来确定最佳制备工艺。杨巾凡【”】等应用四因素三水平正交设计优化干扰素微球的制备工艺，结果最佳工艺条件为即浓度为，浓度为，油相与内水相的体积比为：，稳定剂为明胶。按最佳制备工艺重复制备干扰素微球批，所得微球的形态圆整，表面光滑，分布均匀，而且不黏连或极少黏连，流动性好，平均粒

32、径为，粒径在占总数的以上，粒度分布范围较窄。平均载药量为，为，平均包封率为，为，说明制备工艺具有一定的稳定性。陈发明等【】应用正交设计优化重组人骨形态发生蛋白缓释凝胶微球制备工艺，按最佳工艺条件制备的批微球表面形态良好，粒径分析表明以上的微球粒径左右，分散好，的载药量为（），包封率为（）。徐希明等在制备氟尿嘧啶白蛋白微球时也采用了正交设计优化制备工艺。经过优选制得的，扫描电镜观察呈规则球形。粒径范围为，跨距为，平均粒径。载药量、包封率分别为、。本实验采用正交设计简化了微球优化工作量，制备的微球形态规则，表面光滑，粒径分布，载药量，包封率均达到较好水平，体外释药速率符合方程。认为正交设计是微球制

33、备工艺合理的优化设计方案。关于微球制剂优劣的评价由于微球制剂的性质受药物自身性质、囊材、制备方法、制备工艺等多方面的影响，目前缺乏对微球制剂优劣性评价的统一标准。比较客观的评价指标主要有微球形态、粒径分布、体外释药速度和稳定性。本实验按最佳工艺优化组合条件下制备的微球形态规则（近圆形），表面光滑，粒径分布集中，体外释药速度符合中华人民共和国药典规定的方程，而且具有较好的稳定性。认为在最佳工艺条件下制备的微球具有良好的性状，能够满足本实验的要求。第三军医大学硕士学位论文第二部分微球化甲基强的松龙治疗大鼠脊髓压迫损伤模型的实验研究材料与方法材料主要仪器设备和试剂外科手术器械多道电生理记录仪牙科台式

34、电钻机立体定位仪型电子天平（精确度）高速台式离心机核酸蛋白检测仪光学显微镜及摄像系统电热恒温干燥箱电热水浴箱大鼠（体重：）测定试剂盒测定试剂盒小鼠腹水单克隆抗体单克隆抗体抗体稀释液即用型试剂盒（小鼠兔）显色试剂盒无水乙醇二甲苯中性树胶过氧化氢液乌拉坦多聚甲醛生产厂家上海医疗仪器厂澳大利亚公司上海型日本成茂会社德国沙多利斯公司上海安亭科学仪器厂美国贝克曼公司德国莱卡公司上海跃进医疗器械厂北京医疗设备厂第三军医大学大坪医院动物房武汉博士德公司武汉博士德公司武汉博士德公司武汉博士德公司武汉博士德公司武汉博士德公司武汉博士德公司上海振兴化工厂上海试剂一厂上海试剂一厂上海试剂一厂上海化学试剂公司北京生化

35、试剂九厂第三军医大学硕士学位论文氯化钠磷酸二氢钠州）磷酸氢二钠（）枸橼酸三钠（）枸橼酸（）动物分组将只成年大鼠随机分为组：重庆北碚化学试剂厂重庆北碚化学试剂厂重庆北碚化学试剂厂重庆川东化工有限公司重庆川东化工有限公司组（微球治疗组）、组（尾静脉给药组）、组（对照组）、组（假手术组）。各组再分为生化指标测定组和免疫组织化学组，生化指标测定组按、分为个时相点，每个时相点只；免疫组织化学组分为、个时相点，每个时相点只。大鼠脊髓压迫损伤模型的制备大鼠乌拉坦腹腔麻醉（蛭），腹卧位固定，后侧入路切除棘突、椎板，暴露脊髓。应用自制压迫棒（）及支架按法例持续压迫脊髓，组仅切除棘突、椎板，不制造压迫损伤。压迫完

36、毕后撤除压迫棒，逐层缝合手术切口，在缝合创口前组用微量注射器蛛网膜下腔推注适量微球（），组尾静脉推注（），组不予治疗。术后肌肉注射青霉素抗感染，由专人同一条件下饲养。观测指标大鼠后肢运动功能评分大鼠在术前进行一次功能评分，取得正常值范围。分别于术后、和进行运动功能评分。评分前所有动物应先检查膀胱是否充盈，以免因膀胱充盈而影响活动。评分期为，动物应尽量保持在活动范围的中心区域活动。评分标准】见表第三军医大学硕士学位论文无可观察到的后肢运动或个关节轻度活动个关节大扶运动和另一个关节轻度活动个关节大幅运动所有个关节轻度活动个关节轻度运动和第个关节大幅运动个关节大幅运动和第个关节轻度活动所有个关节大幅

37、运动不负重拖动或足置于不负重位足底仅位于负重位，或偶尔频繁持续以足偶见负重步行，但前、后肢不协调由频繁到持续负重步行，但无前、后肢协调由频繁到持续负重步行，偶见前、后肢协调由频繁到持续负重步行，频繁前、后肢协调持续协调足底步行，优势爪在刚触地和抬起持续协调足底步态，当前肢向前时无或偶有持续协调足底步态，频繁伸趾，优势爪触地（“，）后肢轻度：关节活动范围大幅：关节活动范围个关节：通常为髋和膝个关节：髋、膝、踝第个关节：通常为踝拖动：节律性伸展个关节，身体侧卧负重：足底负重位时或仅在后躯干抬高时，伸背负重步行，无足底负重步行肌收缩偶尔：且；步行：足底负重触地，前置使足底再次触地频繁：观察期：持续观

38、察期协调运动协调运动旋转：当其触地或抬起时爪内或外旋时旋转频繁足底步行，持续前、后肢协调，偶见足背侧步行平行：后爪在刚触地或抬起时与躯干平行伸趾，优势爪触地时平行伸趾：听趾拖沓音，即足音中无趾拖沓音频繁伸趾：一半以上足音中无趾拖沓音时平行，抬起时旋转持续协调足底步态，频繁伸趾，优势爪触地及抬起时均平行持续协调足底步态，持续伸趾，优势爪触地持续伸趾：观察期中仅有次趾拖沓音及抬起时均平行基本内容同，尾在部分或全部观察期中下垂基本内容同，尾持续上翘，但躯体不稳基本内容同，且躯体持续稳定尾上翘：不触地：躯体不稳：当快速移动时，重心侧移，出现摇摆、倾斜、滑倒躯体持续稳定：无滑倒，骨盆环与尾在运动时保持一

39、直线第三军医大学硕士学位论文运动诱发电位用多道电生理仪（澳大利亚生产）测定动物模型运动诱发电位，测量方法参考文献。大鼠头后部备皮，消毒，头后正中切口，在颅骨正中矢状线向左旁开，人字缝上的处用牙科钻钻一直径为小孔，将单极银球刺激电极放置于孔内，轻触而不压。测量时，要求小孔内干燥无明显出血迹象，否则用，擦拭小孔，再用棉签擦干，于左侧小腿腓肠肌插入两根探针作为输出电极，并在大鼠背部左侧（竖棘肌上）插入一探针作为接地电极。于术后即刻、和五个时相点分别测量（测不同动物时，探针放置的位置、深度要尽量保持一致）。刺激参数：强度，叠加次数次，分析时间，灵敏度“。一氧化氮（）含量和一氧化氮合酶（）活性分别于术后

40、、采用组织匀浆法测大鼠损伤段脊髓中含量和活性。其具体步骤如下：取材：大鼠乌拉坦腹腔麻醉（），迅速切取损伤段脊髓，在冰冷的生理盐水中漂洗，除去血液，滤纸拭干，称重，放入的小烧杯中。组织匀浆的制备：向小烧杯中加入适量冷生理盐水（其体积为损伤段脊髓重量的倍），用眼科剪尽快剪碎组织块，用体积为组织块重量倍的冷生理盐水将残留在剪刀上的碎组织块冲入小烧杯中，然后用内切式组织匀浆机制备成的组织匀浆，匀浆时间为秒次，间隙秒，连续次。上述操作均在冰水浴中进行（将盛有组织的小烧杯放入冰水中）。将制备好的组织匀浆离心（），吸取上清液于浸于冰水中的小试管内备用。含量、活性检测：按博士德公司一氧化氮试剂盒说明书和氧化氮

41、合酶测定试剂盒说明书中的操作步骤和计算方法检测损伤段脊髓组织中的含量和活性。（以分光光度法测定活性和的产量；采用考马斯亮兰法测定组织的蛋白质浓度）损伤段脊髓组织形态学大鼠于术后、和在完成运动诱发电位检测后，多聚甲醛磷酸二氢钠氢氧化钠溶液灌注，迅速切取损伤段脊髓，放入多聚甲醛磷酸二氢钠氢氧化钠溶液中固定，脱水，常规石蜡包埋，切片（片厚肛），部分做染色，余留作免疫组化之用。染色染色方法参照文献【第三军医大学硕士学位论文（）石蜡块切片，制成厚的切片；（）烤片分钟；（）浸入二甲苯分钟，依次入、梯度酒精各分钟水化，自来水冲洗分钟，蒸馏水冲洗分钟；（）浸入苏木素染液分钟，自来水冲洗分钟，镜检，若胞核偏蓝，

42、则以盐酸酒精分化数秒钟，自来水冲洗分钟；（）浸入伊红染液分钟，流水冲洗分钟，镜检，若胞浆过红则以无水酒精分化数秒钟，自来水冲洗；（）梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。损伤段脊髓免疫组化脊髓组织一（神经丝）、免疫组化（，链霉亲和素一过氧化物酶复合物）法染色操作步骤按试剂盒说明并结合文献【】进行，主要步骤如下：（）石蜡块制成厚的切片；烤片分钟；（）二甲苯浸泡分钟次脱蜡，依次入、梯度酒精各分钟水化，双蒸水冲洗分钟分钟；（），室温孵育分钟，灭活内源性酶，。蒸馏水洗涤次，每次分钟；（）热修复抗原：将切片放入枸橼酸盐缓冲液中，再放入微波炉中加热至沸腾然后断电，间隔分钟，再次煮沸，然后冷却至室温；洗涤

43、次，每次分钟；（）每片加（封闭用），室温孵育分钟；（）滴加抗：吸去多余，每片滴加：的抗稀释液“，置冰箱中过夜；（）震荡漂洗分钟次；（）滴加抗：滤纸吸去切片周围水分，每片滴加生物素标记的抗，孵育分钟；（）震荡漂洗分钟次；（）滴加液：每片“，孵育分钟；（）震荡漂洗分钟次；（）显色：每片滴加显色液“，镜下控制显色时间，一般为分钟左右。用双蒸水冲洗标本，终止显色反应；（配制：、各一滴）第三军医大学硕士学位论文（）苏木素复染：显色时间约；（）脱水：依次入、梯度酒精（前两个分钟，后两个分钟）；（）二甲苯透明：分钟次；（）中性树胶封片，镜检。图像分析及统计学处理图像分析由熟悉图像分析的实验人员，应用生物医学

44、图像分析系统【，对免疫组化染色结果进行半定量分析，计算阳性染色面积（）、阳性染色平均光密度（）值。统计学处理实验结果用均值标准差（）表示，运用软件包处理数据结果，比较组间差异采用单因素方差分析。结果动物行为学观察、三组动物在损伤后其运动功能评分（评分）均降低，且随时间延长逐渐升高，时仍低于正常水平，各时相点组内存在显著差异（），、三组组与假手术组比较也有显著差异（），、组于术后、明显高于组（），组、时优于组，但差异不显著（。）。（见表）表评分结果表（）第三军医大学硕士学位论文图评分变化趋势图运动诱发电位潜伏期变化正常大鼠波潜伏期为，脊髓压迫损伤后潜伏期延长，为，随着时间增加潜伏期的逐渐向正常水

45、平靠近，到时组基本恢复正常，组在术后也基本恢复到正常水平，但组术后与假手术组比较仍存在显著统计学差异（）。、三组与假手术组比较，术后、均存在显著统计学差异（），组在术后时和假手术组间仍存在差异但不显著（），组术后、与假手术组比较差异仍显著（）。术后、，、三组间也存在显著统计学差异（）；术后，、组间差异不显著（），术后两组间则无统计学差异。组与、两组比较在术后、仍有显著性统计学差异（）（见表）表运动诱发电位波潜伏期变化表（单位：）！，拈加三太墨第三军医大学硕士学位论文一一一一一】时间图波潜伏期变化趋势图含量变化正常大鼠胸段脊髓含量为。儋，脊髓压迫损伤后含量已有升高在损伤后达到高峰，仍维持在高峰水

46、平。、三组与假手术组间在各时相点均存在显著性统计学差异（），三组间差异也非常显著（），且含量组高于组，组高于组（见表）。表损伤脊髓含量变化表（单位：】儋）霉篮第三军医大学硕士学位论文：一一一一一一一一“一一一邑，图含量变化趋势图；一组组组”组活性变化正常大鼠胸段脊髓组织中活性为，脊髓压迫损伤后活性已有升高在损伤后达到高峰，仍维持在高峰水平。、三组与假手术组间在各时相点均存在显著性统计学差异（），三组间差异也非常显著（），且活性组高于组，组高于组（见表）。表损伤脊髓活性变化表（，单位：）第三军医大学硕士学位论文芎釜善蚤藿，一一一一一一一时间（）图活性变化趋势图组一组组：上翌到损伤段脊髓病理学变化

47、染色对不同组别损伤段脊髓组织行染色后，在光学显微镜下观察，其结果如下：脊髓压迫损伤后，、组损伤段脊髓组织内可见出血、细胞水肿，且组程度较、两组更为严重，染色较浅，组无明显出血、水肿，接近正常脊髓组织。伤后，组织出血程度加重，细胞肿胀更加明显，胞核着色不清，组织内可见炎性细胞浸润。伤后，损伤组织出血、水肿范围、程度达最大，累及到周边正常脊髓组织，神经元细胞失去多角形态、数量减少，、两组残存的神经元数目较组多，可见少量胶质细胞增生和噬神经现象。伤后，组少见正常神经元细胞，大量胶质细胞增生，少量空洞形成，、两组仍可见部分正常神经组织和神经元细胞，胶质细胞增生程度较组轻。伤后，组胶质细胞大量增生，大量

48、空洞形成，几乎找不到正常神经组织，、两组也有大量胶质细胞增生，但程度和范围较组小，少量小空洞形成，仍有部分正常神经组织、细胞残留。（见照片）免疫组织化学染色免疫组织化学染色后应用生物医学图像分析系统分析染色面积和平均光密度。（见照片）脊髓压迫损伤后脊髓前脚运动神经元的相对阳性染色面积（，）和平均光密度（）均已开始降低，达最低点。、三组与假手术组比较各时相点第三军医大学硕士学位论文均有显著统计学差异，、两组与组间也有明显差异（），组平均水平高于组，但无统计学差异（见表）。表一免疫组织化学染色结果表（冤，：）时相点组别，水器值曲躲医墨图阳性染色面积变化趋势图一第三军医大学硕士学位论文型椎装：；固糕

49、掣匿时间（）图阳性染色平均光密度变化趋势图一组一组；组；【一组免疫组织化学染色免疫组织化学染色（见照片）后应用生物医学图像分析系统分析阳性染色平均光密度，在光学显微镜高倍视野下计数阳性染色神经元数，计算阳性染色神经元百分比。脊髓压迫损伤后，脊髓前脚区的表达升高，到达高峰，随后逐渐下降，于损伤后基本接近正常水平（见表）。在、三个时项点阳性染色平均光密度和阳性染色细胞百分比，、三组与组存在显著性差异（），、三组间也有明显统计学差异（）后各组间均无统计学差异。表脊髓灰质前脚免疫组织化学染色平均光密度（）枷第三军医大学硕士学位论文型氍装霾争蝗熙拳墨上时间（）图阳性染色平均光密度变化趋势图表阳性染色细胞

50、百分比（，）组组组，卜组第三军医大学硕士学位论文鼍隶、譬联：爱楚医固慰：三：三兰兰兰三五每当五一一“。一】时间（）图染色阳性神经元百分比变化趋势图讨论关于急性脊髓损伤急性脊髓损伤包括两个病理过程：原发性损伤和继发性损伤。原发性损伤（又叫机械性损伤）表现为脊髓创伤局部出现轴突离断、神经元和胶质细胞坏死、微循环障碍。原发性损伤激发一系列细胞和分子水平的改变引发继发性损伤，包括循环和生物化学改变，如出血、坏死、代谢及电解质紊乱、磷脂水解和自由基形成、炎性反应和迟发性脱髓鞘，最终导致损伤区域扩大，损伤程度加重。脊髓损伤破坏了损伤部位的神经信号传导系统，机体出现功能障碍或减弱，而且这种神经功能的损害表现

51、绝大多数是不可逆的，这是因为成年哺乳动物中枢神经系统微环境不利于轴突再生【】。轴突再生障碍主要有两个原因：损伤的神经元存在内在的再生能力的缺陷；中枢神经系统内的微环境不适合轴突再生【。其中，抑制性因素被认为可能起着更重要的作用。目前我们知道在髓鞘中，成熟的少突胶质细胞表达的髓鞘相关蛋白和（抑制轴突生长的活性蛋白）可以阻止神经生长。近年来，已经有许多抑制因子被鉴定，如蛋白多糖、等，生长抑制因子、等和细胞外基质分子等。当然，中枢神经系统内的微环境中除了抑制因子外，还存在神经生长因子、黏附因子和轴突诱向因子组组组组面暖一第三军医大学硕士学位论文等诱导生长的因子，可以克服脊髓的抑制环境【。成熟神经元再

52、生轴突的能力依赖于以下几个因素：（）再表达生长相关基因的能力；（）再生轴突能攀附及伸展的有效基质分子；（）促进及引导轴突再生的有效神经营养因子；（）是否存在损害轴突延伸的脊髓生长抑制因子，脊髓组织作为成熟的中枢神经系统，其神经元已失去分裂和再生新神经的能力，其髓鞘由少突胶质细胞而不是雪旺细胞组成，成熟的少突胶质细胞可以分泌某种抑制蛋白，使神经轴突的再生受到抑制。而且在脊髓损伤后，缺少合适的再生轴突能攀附生长的基质分子，使再生的轴突被瘢痕组织阻挡。可见，由于脊髓损伤后缺乏轴突再生的合适的机械、化学微环境，从而影响了神经再生。目前非手术治疗旨在减轻脊髓继发性损伤，促进神经功能的恢复或再世】实验证明

53、，能够减轻脊髓继发性损伤，保护神经元，促进神经功能恢复。对脊髓损伤的保护作用是一种人工合成的糖皮质激素，其抗炎作用是氢化可的松的倍，而其盐皮质激素的保钠排钾作用只相当于氢化可的松的。其血浆半衰期约，生物学半衰期达。在静脉注射后约可达血浆峰浓度。但其中约与血浆蛋白结合，这部分不与类固醇受体结合，也不跨过细胞膜或通过血脑屏障，不发挥生物学效应。在静脉注射后，脊髓部位出现峰浓度。急性脊髓损伤内给药，损伤部位摄入的明显比非损伤部位多，而损伤后给药，损伤部位摄入明显随损伤时间下降与非损伤部位没有显著差异【】。本身难溶于水，但帷床上使用的甲基强的松龙琥珀酸钠进入体内后，可水解成游离型发挥其神经保护作用【】

54、。经肝脏代谢，主要代谢产物为一羟基和一羟基一。这些代谢产物主要以葡萄糖醛酸酯、硫酸盐和非结合型化合物的形式随尿液排出。年龄、性别、注射剂量等均影响的清除率。老年人的清除率明显比年轻人慢。神经保护作用的确切机理仍未完全清楚。人们提出了很多学说，如：抑制脂质过氧化、抗炎作用【】、抑制脂质水解和花生四烯酸释放【】、改善损伤后脊髓血流【、防止细胞内外、及失衡【】、防止脊髓细胞凋亡【】、抑制兴奋性氨基酸【】、增强神经兴奋性和突触传递【】等，但目前大多数学者认为对急性脊髓损伤保护作用最重要的机理是抑制脂质过氧化，这也可能是最根本的作用，的抗炎作用、抑制花生四烯酸释放、改善损伤后脊髓血流、防止细胞内外离子失

55、衡、抑制兴奋性氨基酸等可能均是其抑制脂质过氧化作用的结果【】。和曲【】通过检测猫急性脊髓第三军医大学硕士学位论文损伤后脂质过氧化物，发现损伤后脂质过氧化物明显升高，而给予治疗后脂质过氧化物明显降低；并发现的效果最佳，低于或超过，抑制脂质过氧化物的作用均低于蝇；而反而增加脂质过氧化物。也就是说，对急性脊髓损伤的剂量一效应曲线是钟形的，峰值是埏，但在远低于时，糖皮质激素受体就已经饱和【副：说明的脊髓神经保护作用不是通过受体途径：进一步的研究认为，神经保护作用是由膜介导的，是直接作用于膜的结果。也就是说，静脉推注蚝的可维持创伤后神经细胞及其它细胞膜的稳定，而大于或小于此值均造成膜的不稳定，使膜脂质过

56、氧化加重。经研究发现【。】，大剂量可降低后花生四烯酸的释放及其产物（前列腺素、白三烯、血栓素等）的生成，这是因为进入体内后可和糖皮质激素受体结合，促使调脂蛋白的释放，抑制磷脂酶的活性。等的研究还表明大剂量能抑制脊髓损伤区中性粒细胞和巨噬细胞的聚集，从而减轻脊髓的继发性损伤，促进损伤脊髓修复。具有类固醇激素的所有特性，包括其副作用，如糖尿病、免疫抑制、继发感染、伤口愈合延迟、应激性溃疡、负氮平衡等全身并发症等【报道，增加了病人感染性疾病的发生率，并且增加了重症临护的天数，还报道了例急性合并多发性损伤的病人在治疗后出现了严重的高血糖和非酮症性代谢性酸中毒，这可能是由于促进肾上腺素分泌过多的结果是。

57、因此，认为应避免用于多发性损伤的病人和可能需要使用儿茶酚胺的病人。等报道大剂量可能会产生糖皮质激素肌病。按照【的观点，大剂量治疗急性应该定位在实验性应用阶段，而且不主张连续使用。本试验证实，能够抑制损伤脊髓的继发性出血、水肿，促进蛋白生成，保护神经元，减少神经细胞凋亡，促进神经轴突再生和神经功能恢复。微球化后蛛网膜下腔注射给药大大减低了用药量，就可以在保证疗效的同时避免全身副作用的发生。治疗脊髓损伤的给药途径脊髓损伤修复的给药途径包括全身用药、损伤局部注射给药、心室内给药、鞘内注射给药和蛛网膜下腔给药。全身用药包括口服、静脉注射和动脉注射给药，目前甲基强的松龙就是通过该途径治疗脊髓损伤【】，这

58、种给药途径存在药物再分配问题和全身副作用的问题，而损伤局部直接给药则会加重脊髓损伤。目前最常用的给药途径是鞘内微量泵注射给药【】，该方法能够将药物以恒定的速率注射到鞘膜腔内，维持药物的有效浓度，但是植入的微量泵是一种侵袭性占位，易引起慢性炎症反应【”。蛛网膜下腔注射给药是一种新型、安全、可靠的给药途径【，其优点之一是能够第三军医大学硕士学位论文将注射药物（如生长因子、神经保护因子）储备在注射点，该用药方法的缺点在于需要多次或长期应用的药物若反复蛛网膜下腔注射容易引起感染。因此众多学者将目光转向药物微球化技术，药物微球化后一次用药就可以达到长期治疗的目的，且用量少，既可以节约成本、提高药物利用率

59、，又可以减少药物的毒副作用。目前了白介素（）、表皮生长因子（）、纤维生长因子一（）【蝴等药物已成功制备成微球制剂用于实验研究。，两种用药方法治疗急性脊髓损伤的疗效比较实验中，微球治疗组评分在术后、明显好于外周静脉给药组，波潜伏期在术后、较尾静脉给药组短，伤段脊髓组织中含量和活性在术后各时间点两组之间也存在明显差异，免疫组织化学染色在前也有相同差异。上述结果表明缓释微球蛛网膜下腔给药，能充分发挥的神经保护作用，而且其效果不亚于外周静脉直接注射给药。第三军医大学硕士学位论文全文结论溶剂挥发乳化法是制备。微球的合理方法，采用此方法制备的微球经优化后形态规则，近圆形，性质稳定，平均粒径、粒径分布集中（的微球数占。）、载药量、包封率、体外释药符合方程（）。正交设计能够很好地优化微球制备工艺，其最佳优化组合为：内水相和油相体积比：、初乳功率、初乳时间，浓度、复乳时间、复乳转速转分钟，溶剂挥发时间。能够减轻损伤脊髓的继发性出血、水肿，抑制活性和生成，增加蛋白表达，减轻脊髓继发性损伤，促进脊髓损伤修复。微球蛛网膜下腔注射治疗急性脊髓损伤的效果不亚于外周静脉大剂量给药，同时能减少用药量，提高药物生物利用率，降低全身副作用的发生率。第三军医大学