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1、实验二 沉淀试验,目的要求 1、掌握炭疽杆菌环状沉淀试验的操作技 术和结果观察。 2、掌握炭疽杆菌琼脂扩散试验的基本操 作技术和结果观察。,沉淀试验： 可溶性抗原（如细菌的外毒素、内毒素、 菌体裂解液、病毒、组织浸出液等）与相 应的抗体结合后，在适量电解质存在下， 形成肉眼可见的白色沉淀，称为沉淀试验 抗原沉淀原 抗体沉淀素,沉淀试验的类型： 液相沉淀试验 环状沉淀试验 絮状沉淀试验 固相沉淀试验 琼脂凝胶扩散试验 免疫电泳技术,实验材料 1、炭疽沉淀血清 由兽医生物药品厂生产供应。该血清是由免 疫的马血清分离。首免用炭疽芽孢苗，再以 炭疽强毒的死菌按34d的间隔，进行34次 加强免疫，抗体效

2、价达到要求时，采血分离 血清。 2、炭疽沉淀抗原 由兽医生物药品厂生产供应。,3、待检抗原 冷浸法 用于待检皮张，检样置37C温箱烘干，高压灭菌后，剪成小块称重，然后加入510倍的石炭酸生理盐水，放室温浸泡1824h，用滤纸过滤23次，使之呈清朗的液体，即为待检抗原。 热浸法 用于待检的组织脏器，取怀疑死于炭疽病畜的脏器（脾、肝、肾、血液或肌肉等），放入乳钵内研磨碎，加510倍生理盐水，装入试管或小三角瓶中，煮沸3040min，冷却后用滤纸过滤数次，直到滤液透明，即为待检抗原。 4、生理盐水,（一）炭疽环状沉淀试验,方法与步骤: 取3支口径0.4cm的小试管，在其底部各加约 0.1ml的炭疽沉

3、淀血清。 取其1支，用毛细管将待检抗原沿着管壁重 叠在炭疽沉淀血清之上，上下两液间有整齐 的界面，注意勿产生气泡。 另2支小试管，一支加炭疽阳性抗原，另一 支加生理盐水，作为对照。（如图）,炭疽环状沉淀试验加样式意图,结果判定 510min内判定结果，上下重叠两液界面 上出现乳白色环者，为炭疽阳性。对照组 中，加炭疽阳性抗原者应出现白环，而加 生理盐水者应不出现白环。,（二）炭疽琼脂扩散试验,方法与步骤： 琼脂板制备 称取1g琼脂粉，加至100ml 0.5%石炭酸生理 盐水中，煮沸使之溶解。待温度降至55左 右时浇玻板，厚约23mm左右。 打孔 在琼脂凝胶上打梅花孔，孔径为2mm，中间孔 和周围孔间的距离大约为3mm。 加样 中间孔加炭疽沉淀血清，周围孔中分别加炭 疽沉淀抗原、待检抗原及盐水。（如图）,炭疽琼脂扩散试验加样式意图, 作用 将琼脂凝胶板放置湿盒中，于37扩散24 72h，每天观察结果，观察三天。 结果观察 抗原抗体扩散时，在两孔间比例最合

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