第九章 凝集反应.ppt

1、第九章 凝集反应,学习目标,1.解释凝集反应的概念。 2.解释直接凝集反应、间接凝集反应、协同凝集反应的原理。 3.说出抗人球蛋白试验的应用。 4.了解自身红细胞凝集。,凝集反应,细菌、螺旋体、红细胞或细胞性抗原等颗粒性抗原，或可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒结合成致敏颗粒后，它们与相应抗体（或抗原）发生特异性反应，在适当电解质存在下，形成肉眼可见的凝集现象。,排斥,抗体,凝集反应,Y,凝集原：凝集反应中的抗原。,凝集素：凝集参与反应的抗体,反应阶段： 抗原抗体的特异性结合 出现肉眼可见的凝集现象 反应特点： IgM的作用比IgG大数百倍 IgG与抗原结合后，常不出现凝集反应，称不完全抗体,凝集

2、反应,可见反应形成,第一节 直接凝集反应,直接凝集反应： 颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。,方法评价：简便和快速、敏感度低，用于定性试验 临床应用：菌种鉴定、血清学分型、血型鉴定及抗体效价测定。,第一节 直接凝集反应,一、玻片凝集试验,方法评价: 定性试验 简便和快速 敏感度低,临床应用: 菌种鉴定 血清学分型 血型鉴定,一、玻片凝集试验,在试管内颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。,二、试管凝集试验,0.5,0.5,0.5,0.5,0.5,弃掉0.5,试管凝集试验原理,结果,1 2 3 4 5 6 7,菌液,试管凝集试验,结

3、果,+,很小的凝集颗粒,混浊,-,无凝集现象,与对照相同,+,小、部分凝集块,中等混浊,+,大多凝集管底,轻度混浊,+,大的凝集块,清亮,凝集程度,沉淀,上清,管底沉淀,凝集程度,最高稀释比例,待测血清的滴度,方法评价： 半定量试验 简便、快速 敏感度低 可有假阳性,临床应用： Widal reaction Weil-felix reaction Wright test:布鲁菌病 交叉配血试验,二、试管凝集试验,一、玻片凝集反应:,未知抗原,+,已知抗体,凝集团块 混浊,?,二、试管凝集反应：,定量抗原,+,系列稀释抗体,不同程度的凝集反应,YES NO,确定抗体的滴度,1.O凝集、H凝集与V

4、i凝集 2.交叉反应与凝集吸收试验,三、与凝集反应有关的概念,1、O凝集、H凝集与Vi凝集,交叉凝集反应,乙菌,甲菌,2、交叉凝集反应有凝集吸收试验,共同抗原与交叉反应,抗原1,抗原2,+,抗血清,交叉反应,2、交叉凝集反应有凝集吸收试验,2、交叉凝集反应有凝集吸收试验,凝集吸收试验: 用一种过量的细菌抗原与发生交叉凝集反应的抗血清相结合。可将其共同抗体吸去，剩下抗体只能与特异性抗原起反应，这种试验即称凝集吸收试验。,第二节 间接凝集反应,间接凝集反应: 将可溶性抗原或抗体吸附于颗粒性载体表面，然后与相应的抗体或抗原反应，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象,载体,可溶性抗原,致敏,致敏颗

5、粒,NS,凝集颗粒,间接凝集试验示意图,载体种类及其处理方法,红细胞： 新鲜红细胞吸附蛋白质的能力差。一般先醛化后应用。 聚苯乙烯胶乳颗粒： 可物理吸附蛋白质；常制备带有化学活性基团的颗粒,正向间接凝集试验 反向间接凝集试验 间接凝集抑制试验,间接凝集反应的类型,用抗原致敏载体-检测抗体,一、正向间接凝集试验,二、反向间接凝集试验,用抗体致敏载体-检测抗原,三、间接凝集抑制试验,用抗原致敏载体-检测抗原,间接凝集抑制试验,待测抗原,已知抗体,特异结合,抗原抗体复合物,NS,致敏颗粒,无凝集颗粒 阳性,间接凝集抑制试验,待测抗原,已知抗体,无结合,抗原抗体分散,NS,致敏颗粒,有凝集颗粒 阴性,

6、第三节 其他凝集反应,SPA:SPA-IgG Fc; SPA抗体致敏-测抗原,一、协同凝集试验,原理图,IgG,SPA,SPA- IgG,待测抗原,SPA- IgG-待测抗原凝集颗粒,混合,加入,抗球蛋白试验又称 Coombs试验,二、抗人球蛋白凝集试验,1945年由Coombs建立的一种抗球蛋白参与的间接血凝试验，检测抗红细胞不完全抗体的一种非常经典的方法。,二、抗人球蛋白凝集试验,1、直接Coombs试验,不完全抗体,检测红细胞上抗体,2、间接Coombs试验,检测血清中的抗红细胞抗体,临床应用： 在输血上的应用 血型抗原抗体的检查 对新生儿溶血性贫血性疾病的诊断 对溶血性贫血的研究 对细

7、菌或立克次体的不完全抗体检查,抗人球蛋白凝集试验,自身红细胞凝集试验,未经致敏的受检者新鲜红细胞 试剂：抗人O型红细胞的单克隆抗体,临床应用：HIV检测、HBV检测,自身红细胞凝集试验,胶乳凝集试验,明胶凝集试验,将病毒抗原或重组抗原吸附于粉红色明胶颗粒上，当致敏颗粒与样品血清作用时，若血清含有抗病毒抗体则可形成肉眼可见的粉红色凝集,间接凝集反应的应用,抗原的检测 反向间接凝集试验可用于检测病原体的可溶性抗原，也可用于检测各种蛋白质成分。 抗体的检测 检测细菌、病毒、寄生虫等感染后产生的抗体。,小结,凝集反应是指细菌和红细胞等颗粒性抗原或表面包被抗原的颗粒性载体与相应抗体结合后，可出现肉眼可见的凝集现象。 可以分为直接凝集反应和间接凝集反应。 在临床检验中最常用的为间接