土壤全N有效N测定.ppt

1、土壤全氮的测定 本章要点： 1、了解土壤中氮素的存在形态及含量。 2、熟悉开氏法测定全氮的两大步骤 3、掌握开氏法测定土壤全氮的原理。 4、熟悉开氏反应及其特点。 5、掌握蒸馏法测定氨的原理及条件。,土壤全氮的测定 存在形态及含量 1、形态： 有机态N：占90%以上，如蛋白质、氨基酸、 氨基糖、腐殖质等。 无机态N：占1-5%，主要有NH4-N、NO3-N、 NO2-N（少量）。,2、含量： （1）我国大部分耕地土壤全N含量不高，切变幅 很大，其范围大约在0.03-0.5%。其中： 东北黑土 0.15 - 0.5% 华北地区 0.05 - 0.08% 黄土高原和黄淮海平原 0.03 - 0.1

2、% 有机质含量很低的砂土 0.03% 一般自然土壤明显高于耕作土壤。,（2）华北地区土壤全N的分级指标大致是： 土壤全N水平 低 中 高 土壤全N % 0.05 0.05-0.08 0.08,测定方法评述 一、干烧法： （杜马法、杜氏法） 1831年，瑞典人杜马（Dumas）创立的干烧法 基本原理：样品在CO2气流中燃烧（600C），以 Cu+CuO作催化剂，使所有的N都转变成N2，气 流通过碱液（浓KOH、NaOH）除去CO2后，测 定N2的体积，计算样品全N含量。 Cu+CuO NaOH除去CO2 土 + CO2 N2 N2 ，600C 经典的杜马法结果准确，回收率高，但仪器装置及 操作复

3、杂、费时，在土壤N素分析中很少采用。,二、 湿烧法： （开氏法） 1883年，丹麦人开道尔（J.Kjeldahl）创立。 由于仪器设备简单易得，操作也简便，准确度较高， 因此为一般实验室所采用。 目前已有多种半自动及自动定N仪。,开氏法测定土壤全N（半微量法） 一 、原理： 含N有机物在催化剂作用下，与浓H2SO4高温共煮， 使有机N转化成NH4-N（(NH4)2SO4），然后在碱 性溶液中蒸馏出NH3，用H3BO3吸收，再用标准酸 溶液直接滴定H3BO3吸收的NH3，根据酸的用量来 计算N含量。,二、测定条件： （一）样品的消煮： 1、开氏反应及其特点： 开氏反应：样品用浓H2SO4高温消煮

4、时，各种含N 有机化合物经过复杂的高温分解而转化为NH4-N 的反应。 开氏法：凡是用开氏反应消煮的定N方法都叫开氏 法，不论采用何种加速剂、仪器及如何定量。,开氏反应的特点： （1） 浓H2SO4是中强氧化剂，单靠它不能很快完 成各类含N有机物的开氏反应，因此需要加入加 速剂，以缩短消煮时间。 （2） 开氏反应的氧化还原电位范围较窄，既须把 有机C氧化成CO2，又须防止把NH4+氧化成NO3-， 因此使用氧化剂要特别注意。 （3） 高温消煮能促进有机质分解，但温度过高则 会引起NH4+盐热分解，所以温度不能超过410C。,2、消煮时的反应条件： （1） 加速剂： I、增温剂：K2SO4或无水

5、Na2SO4 作用：提高消煮溶液的沸点，加速高温分解过程。 消煮温度要求控制在360-410C，一般用加盐量 的多少来控制消煮液温度的高低，按每毫升浓 H2SO4中含0.3-0.8g盐。,II、催化剂： Hg、HgO、CuSO4、Se等，其中以Hg、Se催化 效率较高，而Cu次之，但使用安全，不易引起 N素损失。 现多采用Cu-Se混合使用。,Se的催化效率也高，也有毒，但如掌握不好，用量 过多，温度过高或时间过长，均易导致N素损失。 4NH4+ + 3SeO32- + 2H+ = 2N2 + 3Se + 9H2O 如果用量不多或与Cu按比例混合使用，也可达到较 好效果。 Se能使有机C很快氧

6、化成CO2，但不能加速有机N NH4-N，虽然能使消煮液很快变清亮，但有机N并未 转化完全，所以后煮时间较长。 催化过程： Se + 2 H2SO4 H2SeO3 + 2 SO2 + H2O H2SeO3 SeO2 + H2O SeO2 + C Se + CO2,CuSO4催化效率不如前两者，但毒性小，使用完全， 不易引起N素损失。 催化过程为： 4CuSO4+3C+2H2SO42Cu2SO4+4SO2+3CO2+2H2O Cu2SO4+2H2SO42CuSO4+SO2+2H2O 即：当土壤有机质分解完毕，C被完全氧化后，消煮 液呈现清澈的兰绿色，冷却后为无色（CuSO45H2O 脱水），因此

7、CuSO4不仅起催化作用，也起指示作用。,现在普遍采用Cu-Se与盐按比例配成的加速剂，它 既起到缩短消煮时间，又能防止N素损失的作用。 加速剂的比例为： 组成 K2SO4(或无水Na2SO4) ：CuSO45H2O ：Se粉 重量比 100 ： 10 ： 1 按比例混合，研细后使用。,III、氧化剂： 有HClO4、KMnO4、K2Cr2O7、H2O2等，其中以 HClO4较好，但氧还电位太高，作用很激烈，加 入量稍多，极易使N素损失，使结果偏低。 K2Cr2O7、KMnO4在消煮时易暴溅，控制不好也 易引起N素损失。H2O2较安全，但也要控制量(作 植株分析用)。 总之，使用上述氧化剂都必

8、须特别小心。,在H2SO4-HClO4消煮中，如果对测定的要求不太 高时，可在同一试液中测N、P，但要求精度高时 不宜作N、P联合测定。 因为二者矛盾在于：为了完全回收P，HClO4用量 应多些；而为了完全回收N，则要求HClO4用量少 些，所以联合测定时只好折中处理，使回收率达到 95%即可。,（2）H2SO4用量： 加入浓H2SO4的量要考虑土壤有机质类型、含量以 及加盐量的多少等因素。 一般是0.5-1.5g（含N约1mg时）加5ml浓H2SO4。 加酸的同时要做空白测定，以消除试剂误差。,（3）加热温度与时间： 加热温度在360-410C，才能使土壤有机N化合物 分解完全，也不引起N的

9、损失。 对温度的控制：自动控温器或消煮管中H2SO4蒸汽 冷凝回流的高度。,加热时间：控制适当的加热时间可以保证土样中的 有机N全部转化为NH4-N，又不致因时间过长而引 起N素损失。 据全N标准化研究指出：(对半微量开氏法的要求) 当消煮液和土粒全部变为灰白并略带绿色后，再消 煮一小时，这1hr叫后煮，其作用是促使土壤中复 杂的有机N化合物分解完全，全部转化为NH4-N。 后煮时间的长短取决于土壤有机质的含量、加速剂 的种类和用量。 根据研究结果看，在360-410C消煮80-90min，即 可得到稳定的测值。,3、消煮方式： 铝块消煮器、远红外消煮器、封管消煮器,4、注意： （1）在开氏反

10、应中，有少量含杂环N、N-N键、 N-O键等有机化合物（如偶N硝基、肼、腙）不 能完全分解，但它们在土壤中含量很少，所以开氏 N中不包括在内。,（2）开氏反应也不包括全部NO3-N、NO2-N。 因为NO3-N在消煮过程中不会完全还原为NH4+，而 且易挥发，一般土壤中含量不超过全N量的1%，所 以可以忽略不计。 如果某些土壤NO3-N含量较多或对全N量要求准确度 较高时，则需采用改进法，如水杨酸法，即先用水杨 酸和浓H2SO4处理土样，NO3-N与水杨酸反应，生成 硝基化合物，然后再用Na2S2O3或Zn粉把硝基化合物 还原为氨基酸，又经H2SO4消煮，转化成NH4+。或者 用KMnO4-F

11、e粉法把NO3-N变成NH4+。,（3）晶格固定态NH4+，即NH4+被固定在矿物晶格 中，一般不能被水、盐溶液所提取，因此也不包括 在开氏N中。 若要包括在内，则需用HF-H2SO4处理。,（二）消煮液中NH4+的测定： 1、原理： 一般用加碱蒸馏的方法从消煮液中分离出NH4+， 用滴定法（或电位滴定法）测NH4+，也有用扩 散法、比色法、氨电极法。,蒸馏法： 消煮液加碱（NaOH）碱化，使NH4+NH3，逸 出的NH3可用： （1）标准酸吸收，再用标准碱滴定多余的酸，根 据净用酸量计算NH4+的量。（现在用的很少） （2）现在普遍采用的是用H3BO3溶液吸收NH3， 然后用标准酸滴定吸收的

12、NH3。 NH4+ + OH- = NH3 + H2O NH3 + H3BO3 = NH4+ + H2BO3- H+ + H2BO3- = H3BO3,蒸馏装置图,H3BO3中加入混合指示剂溴甲酚绿-甲基红，指示 剂的变色范围pH4.2-4.9，酸性时红色，碱性时兰 绿色。 用H3BO3吸收前，把此混合液调到pH4.5，为紫红 色（此时正好是滴定终点）。 紫红色的H3BO3液收集蒸馏出的NH3后，pH升到8.6， 为兰绿色，再用标准酸滴定溶液至紫红色（pH4.5）， 此时消耗的酸量即为NH3的量。,2、测定NH4+的条件： （1）H3BO3的用量： H3BO3是一元弱酸，在溶液中呈弱酸性，pK

13、a=9.2， 吸收NH3后溶液的pH是8.6，即H3BO3（加指示剂 调节pH后的）吸收NH3后pH由4.5上升到8.6，溶液 已呈碱性，不能再吸收NH3了。,1% H3BO3 约等于0.16 mol/L 1ml 1% H3BO3吸收的NH3量: 0.16 20% 14 = 0.45 mg N 1ml 2% H3BO3吸收的NH3量: 0.16 20% 14 2 = 0.90 mg N 在半微量开氏法蒸馏中，一般是1 mg N，用5ml 2% H3BO3吸收NH3足够了。,与用酸吸收比较，用H3BO3吸收NH3有以下几个优点： A、仅用一种标准酸溶液即可测出NH3含量，准确度高； B、H3BO

14、3用量不必准确，只要足够即可，而标准酸的 用量要求准确； C、蒸馏时不怕倒吸，如倒吸可再加H3BO3，然后继续 蒸馏； D、H3BO3液中加入指示剂，可检查接受瓶是否干净、 蒸馏瓶中的碱是否足够。,（2）NaOH的用量： 以保证NH4+全部蒸出为原则，主要是根据加入浓 H2SO4的量来计算的。 浓H2SO4加入5mL，40%NaOH用量： 36mol/L(1/2H2SO4) 5ml = 10mol/L(NaOH) V V = 18mL 实验中一般加20mL 10mol/LNaOH。,（3）空白测定： 一般不大于0.40mL。 *注意：蒸馏时馏出液的温度勿超过40C，以防 NH3挥发，注意打开冷

15、凝水。,扩散法 消煮液放在外室，H3BO3放内室，适用于含N少 （约0.05-0.2mgN）的土壤，室温20C，扩散24 小时。一般用标准(NH4)2SO4作回收试验。此法 受室温、液层厚度、内室大小等因素的影响。,小结,结果计算：,式中： C：标准酸浓度(MOL.L-1)。 V：滴定样品所用标准酸体积（ml） Vo：空白所用标准酸体积（ml） 14：N的摩尔质量（g/mol） 10-3：将mL转换为L m：土样重(g),土壤有效氮的测定 本章要点： 1、了解土壤有效养分的概念。 2、掌握土壤有效养分测定方法选择的依据。 3、了解土壤有效氮的存在形态及其常用测定方 法的优缺点。 4、掌握土壤碱

16、解氮测定的方法原理、反应条件 及操作技术。 5、掌握土壤无机氮测定的浸提方法。 6、掌握靛酚蓝比色法测定土壤铵态氮的方法原 理、反应条件及操作技术。 7、掌握紫外分光光度法测定土壤硝态氮的方法 原理及操作技术。,用化学方法测定有效养分的基本设想： 选用适当的化学试剂与土壤作用，将其中的有效部 分溶解出来，经过分离后用定量分析方法加以定量 测定，以此量作为土壤供肥的强度或容量指标。所 以，测定方法分为两部分： （1） 有效养分的浸提（前处理，预处理） （2） 浸出液中养分的定量（定量或测定） 有效养分测定方法的中心是用化学试剂溶解有效养 分，从而分离出来测定之。 关键在于浸提方法的选择。,浸提方

17、法包括： 浸提剂种类，土液比，时间等。最重要的是浸提剂， 其选择的原则（依据）是： （1）浸出的土壤养分量应与作物吸收量（或植物对 养分的反应）有良好的相关性； （2）快速、简便； （3）适应性广，包括：A 一种浸提剂适用多种元素； B 各类土壤； C 各实验室都可用。 （4）成本低。 化学方法测定土壤有效养分的数值不是植物吸收养分 的绝对数量，而只是一个相对值。,土壤有效N 定义：当季作物可以吸收利用的N。 形态： （1）无机N：NH4+，NO3-，NO2- （液） 交换态NH4+ 非交换态NH4+ （2）易水解的有机态N（易矿化N）： 一般为全N的1-3%（一年），与其形态和存 在状态有关

18、。,测定方法评述 1、初始（起始）无机N（施肥前测定） 水田NH4+（不测NO3-，无） 旱田NO3-和NH4+ Nmin的测定（土壤剖面(根层)残余无机N）？ (根系深度，NO3-的移动性) 2、易水解性N（潜在有效N、易矿化N）,培养法测定土壤可矿化N 一、好气培养法： 1、 基本原理： 将土壤置于培养箱中，在好气条件下培养一定 时间，利用土壤中的微生物将土壤中的易水解 的有机N矿化成无机N，然后测定培养前后释放 出来的无机N（NH4-N，NO3-N）。（扣除原有 的无机N或培养前淋洗除去）,2. 培养条件： （1）温度：25-35C （25，30，35C） （2）水分（通气性）：50-6

19、0%（最大持水量） 为保持通气性，土样常与砂粒（或蛭石） 混合后培养。 （3）时间：2-4周（2，3或4周）,3. 优缺点： （1）测定原理有理论依据（与田间矿化相似） （2）与植物吸N量相关性高，常作为其他方法 的参比 （3）与盆栽法相比，时间较短 （1）与化学法相比，时间长 （2）条件要求严格，尤其水分不易掌握 （3）培养时间短结果不可靠，培养时间长则易 生成有害物质，抑制进一步的硝化作用。 所以，有一种培养法是用0.01mol L-1CaCl2 淋洗生成的NO3-，再继续培养。,优点,缺点,二、嫌气培养法： 1、 基本原理：将土壤淹水处于嫌气条件下，置 于培养箱中培养一定时间，利用厌气微

20、生物 将土壤有机N矿化成NH4-N，然后测定NH4-N 含量（扣除原有的NH4-N）。 2、 培养条件： （1）土壤淹水，处于嫌气态 （2）温度：30-40C （30或40C） （3）时间：1-2（1或2周）,3、优缺点： 优点： （1）条件易于控制，不必考虑水分、通气矛盾 （2）与好气法相比，快速、准确，重现性好 （3）培养时间相对较短 （4）可靠性也好，不仅适用于水田，也适用于旱田 缺点： （1）有反硝化问题，可加液体石蜡来消除 （2）与化学法相比，时间仍长,化学方法测定土壤供N能力 一、全N 或有机C：不是有效N 二、易水解性N（潜在有效N）： 着眼点是测定土壤中容易分解的那部分有机态N

21、。 1. 碱水解性N（碱解N）： （1）NaOH-扩散法：,(a) NaOH-扩散法原理： 在密封的扩散皿中，用1.8mol/L氢氧化钠(NaOH)溶液水解土壤样品，在恒温条件下使有效氮碱解转化为氨气状态，并不断地扩散逸出，由硼酸(H3BO3)吸收，再用标准盐酸滴定，计算出土壤水解性氮的含量。旱地土壤硝态氮含量较高，需加硫酸亚铁使之还原成铵态氮 。由于硫酸亚铁本身会中和部分氢氧化钠，故需提高碱的浓度(1.8mol/L，使碱保持1.2mol/L的浓度)。水稻土壤中硝态氮含量极微，可以省去加硫酸亚铁，直接用1.2mol/L氢氧化钠水解。,(b) NaOH-扩散法操作步骤： 1. 称取土样2.00g

22、和1.00g硫酸亚铁粉剂，均匀铺于扩散皿外室。 2内室中加两滴甲基红-溴甲酚绿混合指示剂和2H3BO3 2ml。 3在扩散皿边上涂碱性甘油，盖上玻璃片，转动使碱性甘油在四周沾匀。 4将玻片推开一小缝，往外室加人1 mol.L-1 NaOH 10ml。 5立即盖严玻片，轻轻转动扩散皿，使外室土样与碱液混匀。用皮筋将玻片固定住。 6. 扩散皿小心放人恒温箱，40，放24小时。 7取出扩散皿，去玻片，用0.01 mol.L-1标准酸滴定内室溶液至紫红色止。,(c) NaOH-扩散法注意事项： 1. 土样用40目，均匀散开，必须全部与NaOH溶液混匀; 2. 扩散皿要无缺口，无裂缝，保证扩散过程中不漏

23、气; 3. 碱性甘油及NaOH都不得沾及内室。如有少量沾人，需重做; 4. 操作中要小心，不使扩散皿倾斜，或剧烈晃动，避免内室H3B03溢出，或外室样品和NaOH浸入内室; 5. 为使水解完全，应使时间在24小时左右，温度40，夏天温度在35以上时，也可不放在恒温箱中，就在室内桌上水解，时间可稍长点。 6滴定时可用小玻棒轻轻搅动内室溶液，但不要摇动扩散皿。,(d) 结果计算：,式中： C：标准酸浓度(MOL.L-1)。 V：滴定样品所用标准酸体积（ml） Vo：空白所用标准酸体积（ml） 14：N的摩尔质量（g/mol） 103：“换算系数”（包括mL转换为L，10-3；g换算为 mg，103

24、；换算为每kg土，103.） m：土样重(g),（2）蒸馏法： 用CaO、MgO、NaOH、Ba(OH)2与土样蒸馏一定 时间 （3）0.05mol L-1NaHCO3浸提-紫外分光光度法： 0.05mol L-1NaHCO3 100ml 与5.00g土，振荡15min， 离心，在260nm比色。,2、酸水解法： （1）0.5 mol L-1（1/2 H2SO4）浸提法 以 1：20水土比，浸提24h，测定浸提出的有机N、 NH4+、NO3- 。 （2）6 mol L-1 HCl （3）1 mol L-1 H2SO4,3、 氧化降解N： 在酸或碱性条件下，加氧化剂来分解有机N。 例如：KMnO

25、4-Na2CO3，KMnO4- H2SO4。 4、 其他方法： （1）高压蒸煮法： 0.01mol L-1CaCl2 与土共煮，高压下16h （2）1 mol L-1 KCl煮沸1h,三、无机N：（NH4+，NO3-，NO2-） 意义：无机N本身是速效N，是植物吸收利用的主 要形态。 易水解性N、培养法的N，最后都需要测定 NH4+或NO3- 。 土样的特殊性：新鲜样品 （1） 采样后要求冷冻或冷藏 （2） 快速干燥使NO3-变化极小，但对NH4+影响大,浸提： NH4-N：阳离子、交换态，存在于土壤胶体表面。 浸提剂：1-2 mol L-1 KCl或NaCl 浸提方法：淋洗法或平衡法 NO3

26、-N（NO2-）：不被胶体吸附，用水即可浸出。 但溶液易浑浊，要得清亮溶液，可加CaSO4、 KAl(SO4)2、KCl、NaCl、CuSO4-CaO等。,浸出液中N的测定 硝态氮的测定： 1、酚二磺酸法： 1863年Sprenge提出，1929年Harper改进 方法原理：酚二磺酸在无水条件下，与硝酸起硝化 反应，生成硝基酚二磺酸。生成物在酸性条件下 为无色，在碱性条件下为稳定的黄色，可根据黄 色的强度用比色法测定NO3-N的含量。,注意事项： （1）硝化反应要求在无水条件下进行，所以加显 色剂（酚二磺酸）前需要蒸干。但在微酸性下蒸 干，NO3-N可能以HNO3态逸出，所以应使蒸发液 呈微碱

27、性或保持中性。,NO2-：干扰是它与显色剂也呈黄色，但一般土壤 含NO2-极少，可忽略不计。 NO2-含量大于1 mg kg-1时，可加入尿素或硫脲或 氨基磺酸（2%NH2SO3H）破坏它。 HNO2 + NH2SO3H = N2 + H2SO4 +H2O 重金属：在碱化时会沉淀，可过滤除去沉淀后再比 色。一般浸出液中重金属不多。 有机质：颜色干扰，用活性碳除去。,（3）适用范围：0.1 2 mg L-1 （4）比色波长：400-410nm 评价：此法重复性好，准确性高，常作测定微量 NO3-N的参比方法。但需要蒸干，手续较麻烦。,2、紫外分光光度法： （1）NO3-等的紫外吸收特性及测定波长

28、的选择： NO3-在203nm和300nm处各有一个吸收峰，但203nm 处的灵敏度是300nm处的1000倍。因此，可在203nm 附近测定含量少的样品，如土壤NO3-N等；而在300 nm附近测定含量高的样品，如肥料中NO3-N。,土壤中以及浸提剂中可能存在的物质在紫外波段的 吸收特性： 波长203nm时，NO3-N的吸收值最高，但此时多数 无机盐、土壤有机质都有很高的吸收值，因此难于 在此波长下测定NO3-而不被其它离子干扰。 波长210nm时，NO3-N的灵敏度稍有下降，但在此 波长下，很多无机盐已无吸收值或吸光度极低，因 此多数无机盐实际已无干扰或干扰极少。只有OH-、 CO32-、

29、HCO3-、NO2-以及Fe3+、Cu2+等吸收值仍较 高，还有有机质。,这些干扰物的消除： A、OH-、CO32-、HCO3-可加入酸，酸化而消除。 B、NO2-：一般含量极少，不会造成干扰；如含量 高可加入氨基磺酸消除。氨基磺酸在室温下很 快（2min）就能定量地分解NO2-，而对NO3-无 作用。 HNO2 +NH2SO3H = N2 + H2SO4 + H2O 过量的氨基磺酸在210nm处无吸收值。,C、Fe3+、Cu2+等土壤中含量少，一般不会造成干 扰。若多时，可用差值法（Zn还原法）消除。 D、有机质的干扰： 有机质在210nm处有较高的吸收值，因此，紫外 法测定NO3-N，有机

30、质是主要的干扰物质。紫外 法的不同措施都是针对有机质的干扰而设计的。,（2）测定方法： A、差值法（Zn还原法） 方法原理：根据吸光度具有可加性，在210nm 处， 两次测定试液的吸光度。第一次，取一份试液酸 化（消除OH-、CO32-、HCO3-等的干扰），测定 吸收值A1；第二次，取另一份试液酸化后，加还 原剂（如镀Cu的Zn粒或Ni、Al合金粉等）使NO3- 还原成非NO3-物质（如NH4+等），再测定试液的 吸收值A2。二者之差（A1-A2）即被认为是NO3-N 的吸光度。此NO3-的吸收值与其浓度成正比，可 做工作曲线求NO3-。,评价：此法原理上比较合理，结果也可靠，是目 前常用的

31、紫外分光光度法。缺点是需要时间较 长，还原作用要求在8-10小时以上才能完全。,B、校正因数法： 方法原理：根据吸光度的可加性，改变波长，两次 测定。NO3-N在210nm处有强吸收值，而在275nm 处无吸收值（或极低），但干扰物（如有机质等） 在两个波长下都有吸收值，但在210nm处的吸收 值要比275nm处大若干倍。,因此，分别在210与275nm处两次测得A值后，可将 有机质的A275(OM)校正为A210(OM)值，从A210(总)中减去， 即得到NO3-在210nm处的吸收值，从而求出NO3-的 含量。 A210(NO3) = A210(NO3 +杂) - R A275(杂),R为

32、校正因数，是由实验得到的，主要决定于选用的 波长和干扰物的性质。北京地区为3.6。 评价：优点是快速、简便。缺点是不能消除有机质 以外的干扰物的影响，而且R值随土壤类型有所 不同，都用一个R值会造成误差。,3、硫酸肼法： 方法原理： 利用土壤浸提液中硝酸盐氮在Cu2+催化作用下，NO3-被硫酸肼还原生成NO2-，在盐酸介质中与对氨基苯磺酰胺起重氮反应，重氮化合物与-（1-萘基）乙二胺盐酸（NEDD）生成玫瑰红色染料的原理，以分光光度法测定土壤浸提液中硝酸盐氮含量。,土壤无机氮的测定 亚硝态氮的测定： 常用的方法是Griess比色法（重氮-偶联法）。 重氮试剂：对氨基苯磺酰胺（又称磺胺） 对氨基

33、苯磺酸 偶合(偶联)试剂：萘胺 N-(1-萘基)乙二胺,原理：在酸性介质中，HNO2与重氮试剂（对氨基 苯磺酰胺）进行重氮化反应，生成重氮盐，然后 重氮盐与偶合试剂（N-(1-萘基)乙二胺）进行偶 合反应，生成红色的偶氮化合物，其颜色深浅与 NO2-N含量成正比，可用比色法测定。,此法吸收峰为520nm，测定范围0-0.6mg/L。 酸度要求pH1.5-1.6，提高酸度可加速重氮化反应， 但延缓偶合反应。 加温可促进反应，但使颜色的稳定性下降。一般 25C下，10分钟即达最大值。,土壤无机氮的测定 铵态氮的测定： 1、扩散法： 将土壤放在扩散皿的外室，加入一定量的MgO悬 液，在室温下扩散24

34、小时，然后滴定内室H3BO3 所吸收的NH4+。 该法是利用MgO的弱碱性（pH 11），在扩散皿中 直接与土壤作用，使NH3逸出，而不破坏土壤胶体 和有机质，而且是在室温下进行的。,评价：优点是设备简便，不必蒸馏，适用于大批 样品的分析；测定NH4-N的范围为50-300g(含 量低的样品)。但因是固体样品直接与MgO作用， 不易均匀，重现性不好；用浸提剂浸提时，因 浸提液中NH4+含量少而不易准确测定。,2、蒸馏法（浸提-蒸馏法）： 土样用2 mol L-1KCl溶液浸提，浸出液用蒸馏法 测定NH4+的含量，也用MgO碱化。因高温，不 易直接用土壤而用浸出液。 吸取一定量的浸出液，在半微量

35、定氮仪中加入 MgO悬液进行蒸馏，用H3BO3吸收逸出的NH3， 再用标准HCl滴定。,这里不能用NaOH，因浸出液中有有机氮，加MgO 碱化时不致使有机N水解成NH4+，若加NaOH碱化， 有机N会水解成NH3。 此法操作简便，易于控制，适用的NH4+范围为： 10mg kg-1的土壤N，即含NH4+较高的土壤。 蒸馏法还可以在MgO存在下直接作用于土壤，不 预先浸提，但此法在弱碱蒸馏时，仍可能使一些简 单的有机N微弱水解成NH4+而被蒸出，使结果偏高， 不如用浸提后蒸馏法可靠。,3、靛酚蓝比色法： 方法原理：土壤浸出液中的NH4-N在碱性介质中与 次氯酸盐（Na）和苯酚作用，生成水溶性的染料 靛酚蓝，