实验七：植物染色体压片技术.ppt

1、实验 七,植物有丝分裂染色体压片技术,一、实 验 目 的 了解植物细胞周期中染色体的动态变化 学习植物染色体压片方法的基本技术。,二、实验原理 有丝分裂是体细胞分裂的主要方式，一般发生在植物根尖或茎尖的分生组织中。在有丝分裂时，细胞核与细胞质有很大的变化，但以细胞核内染色体的变化最为明显，而且是有规律地进行。各种生物染色体在数目上和形态上是相对恒定的，并随科属种的不同而具有一定的特征。洋葱和大蒜体细胞中有8对共16条染色体，在有丝分裂过程中，每个染色体能复制一份，然后分配到两个子细胞中，所以两个子细胞与母细胞所含的染色体在数目、形态和性质上都是相同的。在细胞遗传学研究中，人们常常需要了解某一物

2、种的染色体数目，而最有效的方法就是观察细胞有丝分裂的中期，这样能得到较为准确的结果。,（一）实验材料 大蒜（Aillum sativum）根尖 洋葱（Aillum cepa）根尖 蚕豆（Vicia faba）根尖。 （二）实验器具 显微镜、培养箱、恒温水浴锅、温度计、镊子、解剖针、刀片、载玻片、盖玻片、烧杯、量筒、滴瓶、大培养皿、纱布、吸水纸、铅笔、吸管等等。 （三）药品试剂 卡诺氏固定液（甲醇或95%乙醇3份，冰醋酸1份）、改良苯酚品红染色液、0.002M8-羟基喹啉水溶液、0.050.2%秋水仙素溶液、对二氯苯饱和水溶液、1N HCl、95%乙醇、正丁醇、加拿大树胶。,三、实验材料、器具与

3、试剂,四、实验方法 （一）材料准备 选取大蒜或洋葱放在培养盘或烧杯中，使幼根长出后，在2025继续培养。当根尖长13cm 时，即可以进行预处理。 （二）预处理 为利于有丝分裂中染色体的观察和计数，固定之前进行预处理，这样可改变细胞质的粘度，抑制或破坏纺锤丝的形成，促使染色体缩短和分散等。一般在分裂高峰前处理1.5小时以上，方法如下： 1秋水仙素水溶液 常用浓度为0.050.2%，室温下处理24小时。对抑制纺锤体活动的效果明显，易于获得较多的中期分裂相，并且染色体收缩较直，有利于对染色体结构的研究。 2对二氯苯饱和水溶液 室温下处理35小时，对阻止纺锤体活动和缩短染色体效果也较好，对染色体小而多

4、的植物中，计数染色体制片效果最好。 3低温处理 将材料如小麦，浸入蒸馏水内，放置到14冰箱中（玉米及水稻68）处理2024小时，也起到良好的效果。时间一般为上午79时，固定保存方法同上。,不同材料采用不同预处理方法获得的效果,* + 优 + 良。,（三）固定 通常采用的是卡诺氏固定液。目的是用化学的方法把细胞迅速杀死，使蛋白质变性，并尽量保持原来的分裂状态，同时更易于着色。固定时，将根尖投入固定液中室温处理424小时。材料若不及时用，可经过90%酒精和70%酒精浸洗一次，再换入新的70%酒精中，置于冰箱内04保存备用。 （四）解离 目的是使分生组织细胞之间的果胶质层解掉，并使细胞壁软化，便于压

5、片。解离的时间视根尖的粗细老嫩不同而有差异。方法是：将固定后（或保存后）的根尖分装到试管内，用清水洗几次，吸干水，加入1N HCl溶液，在60下水解820 min（大蒜用8min，洋葱用8min，蚕豆侧根用10min，玉米用20min），解离成功的根尖，分生组织发白，伸长区已呈半透明，似烂状。解离后的根尖用水轻洗23次，以利于着色。 （五）染色、压片 制片时，取一根尖放在洁净的载玻片上，用刀片切取1mm左右的生长区，其余部分弃掉，滴加改良苯酚品红染色液染色10分钟左右，加盖玻片。用镊子在材料的地方轻压几下，使生长区的细胞分散开来，再在盖玻片上覆盖一层吸水纸，用解剖针或铅笔上的橡皮头敲击根尖部位，重复几次，力一次比一次大，以盖玻片不破裂为准。 （六）观察 将制好的标本片，置于显微镜下先作低倍观察，选取不同分裂时期的